血清miR-6861-5p联合CA153对乳腺癌的诊断价值

付红伟 董禹洋

[摘要] 目的 研究血清微小RNA-6861-5p（miR-6861-5p）聯合糖类抗原153（CA153）对乳腺癌的诊断价值。 方法 选择2015年4月～2018年4月辽宁省鞍山市肿瘤医院（以下简称“我院”）收治的乳腺癌患者83例为研究对象，作为乳腺癌组。另取同期于我院接受诊治的乳腺良性疾病患者80例作为乳腺良性疾病组，再取同期在我院进行体检的健康人者80名作为对照组。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组人员血清miR-6861-5p表达情况，采用化学发光法检测血清CA153水平。比较三组血清miR-6861-5p与CA153水平，并分析上述两项指标与乳腺癌患者临床病理特征的关系。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-6861-5p与CA153水平联合检测对乳腺癌的诊断效能。 结果 乳腺癌组患者血清miR-6861-5p与CA153水平分别高于乳腺良性疾病组与对照组，差异有统计学意义（均P < 0.05）。Ⅰ～Ⅱ期与无淋巴结转移的乳腺癌患者血清miR-6861-5p水平分别低于Ⅲ～Ⅳ期与有淋巴结转移患者，差异有统计学意义（均P < 0.05）。Ⅰ～Ⅱ期与无淋巴结转移的乳腺癌患者血清CA153水平分别低于Ⅲ～Ⅳ期与有淋巴结转移患者，差异有统计学意义（均P < 0.05）。miR-6861-5p联合CA153检测诊断乳腺癌的敏感度、特异度均高于miR-6861-5p与CA153水平单独检测（均P < 0.05）。 结论 血清miR-6861-5p联合CA153检测应用于乳腺癌患者中具有较高的诊断效能，可作为临床上诊断乳腺癌的一种有效手段。

[关键词] 乳腺癌;miR-6861-5p;糖类抗原153;诊断效能;实时荧光定量聚合酶链反应

[中图分类号] R737.9          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）02（b）-0092-04

[Abstract] Objective To study the diagnostic value of serum micro RNA-6861-5p （miR-6861-5p） combined with carbohydrate antigen 153 （CA153） in breast cancer. Methods A total of 83 cases of breast cancer patients admitted to Anshan Tumor Hospital （hereinafter referred to as “our hospital”） from April 2015 to April 2018 were selected， which were recorded as the breast cancer group. In addition， 80 patients with benign breast diseases who received diagnosis and treatment in our hospital during the same period were selected as the benign breast disease group， and 80 healthy people who underwent physical examination in our hospital during the same period were selected as the control group. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction was used to detect the expression of serum miR-6861-5p in each group， and the serum CA153 level was detected by chemiluminescence. The levels of serum miR-6861-5p and CA153 in the three groups were compared， and the relationship between the above two indicators and the clinicopathological characteristics of breast cancer patients was analyzed. The diagnostic efficacy of serum miR-6861-5p combined with CA153 levels in breast cancer was analyzed using the receiver operating characteristic （ROC） curve. Results The levels of serum miR-6861-5p and CA153 in the breast cancer group were higher than those in the benign breast disease group and the control group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Ⅰ-Ⅱ period with no lymph node metastasis of breast cancer patients serum miR - 6861-5 P levels were lower than Ⅲ-Ⅳ period and the patients with lymph node metastasis， the differences were statistically significant （all P < 0.05）. Ⅰ-Ⅱ period with no lymph node metastasis of breast cancer patients serum CA153 levels were lower than Ⅲ-Ⅳ period and the patients with lymph node metastasis， the differences were statistically significant （all P < 0.05）. The sensitivity and specificity under the curve of miR-6861-5p combined with CA153 in diagnosis of breast cancer were all higher than those of miR-6861-5p and CA153 alone （all P < 0.05）. Conclusion The application of serum miR-6861-5p combined with CA153 detection in breast cancer patients has high diagnostic efficacy， and can be used as an effective means for clinical diagnosis of breast cancer.

[Key words] Breast cancer; miR-6861-5p; Carbohydrate antigen 153; Diagnostic efficacy; Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction

乳腺癌属于临床上最为常见的女性恶性肿瘤之一，其发病率在全球范围内所有女性恶性肿瘤中位居首位，严重危及女性生命健康安全[1]。迄今为止，关于乳腺癌的具体发病机制尚未完全明确，因此早期有效的诊断以及治疗对改善患者预后具有极其重要的意义。手术病理组织活检是目前临床上用以确诊乳腺癌的“金标准”，然而该诊断方式会对患者造成一定的创伤，存在局限性[2]。随着近年来相关研究的不断深入，血清学标志物由于具有检测方便、迅速的优势，开始被广泛关注。目前，临床上常用的乳腺癌相关血清标标志物包括糖类抗原125（CA125）以及糖类抗原153（CA153）等，但均存在敏感度与特异度较低的缺陷[3]。而miRNAs属于一类具有调控基因表达的非编码小RNA，可通过对转录与翻译产生干扰作用，进一步调节靶基因的表达，在多种生物学信号通路的调节过程中发挥着至关重要的作用[4]。鉴于此，本研究通过探讨血清微小RNA-6861-5p（miR-6861-5p）联合CA153对乳腺癌的诊断价值，旨在为乳腺癌的鉴别诊断提供一种有效手段，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年4月～2018年4月辽宁省鞍山市肿瘤医院（以下简称“我院”）收治的乳腺癌患者83例为研究对象，作为乳腺癌组。另取同期于我院接受诊治的乳腺良性疾病患者80例作为乳腺良性疾病组，再取同期在我院进行体检的健康者80名作为对照组。乳腺癌组：年龄34～72岁，平均（51.32±10.52）岁;肿瘤直径1.1～5.3 cm，平均（2.81±0.32）cm;TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期41例，Ⅲ～Ⅳ期42例;有淋巴结转移38例，无淋巴结转移45例。纳入标准[5]：①所有患者均经影像学检查以及经病理确诊为乳腺癌;②年龄>20岁;③临床病历资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤疾病者;②存在交流沟通障碍或精神疾病者;③伴有心、肝、肾等脏器功能严重障碍者;④正参与其他研究者;⑤入院前接受相关治疗。乳腺良性（经病理确诊）疾病组：年龄30～76岁，平均（51.03±10.72）岁;疾病类型：乳腺囊肿22例，乳腺炎32例，乳腺纤维瘤10例，其他16例。对照组：年龄31～74岁，平均（51.26±10.38）岁。三组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。所有研究对象均签署了知情同意书，本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法

①标本采集：所有人员入院后均采集清晨空腹静脉血5 mL，离心半径为12.5 cm，3000 r/min，离心8 min，取上层血清保存于-80℃冰箱中待检。②采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组人员血清miR-6861-5p表达情况，具体方法如下：根据miRNeasy血清/血浆总RNA试剂盒（购自德国QIGEN公司）完成血清总RNA的提取，并在稀释后参照逆转录试剂盒说明书完成逆转录，其反应体系主要是参照SYBR Prenix Ex TaqTM Ⅱ（购自日本TakaRa公司）说明书进行制备。采用ABI 7500荧光定量PCR仪（購自美国Applied Biosystems公司）进行PCR扩增。其中PCR扩增条件如下：95℃预变性30 s，95℃变性5 s，60℃ 30 s，40个循环，采用2-△△Ct公式计算表达量。③采用化学发光法检测血清CA153水平：具体操作严格按照CA153检测试剂盒说明书进行，试剂盒购自美国雅培公司，生产批号：2016301437。

1.3 观察指标

分别比较三组血清miR-6861-5p与CA153水平，分析血清miR-6861-5p、CA153水平与乳腺癌患者临床病理特征的关系。血清miR-6861-5p相对表达量正常值范围为4.4～7.3;血清CA153正常值范围为4.0～15.6 U/mL。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验。计数资料采用百分率表示，组间比较采用χ2检验。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-6861-5p与CA153指标对乳腺癌的诊断效能。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组血清miR-6861-5p和CA153水平比较

乳腺癌组患者血清miR-6861-5p和CA153水平均高于乳腺良性疾病组与对照组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;而乳腺良性疾病组与对照组上述两项指标水平比较，差异无统计学意义（均P > 0.05）。见表1。

2.2 血清miR-6861-5p水平与乳腺癌患者病理特征关系分析

Ⅰ～Ⅱ期与无淋巴结转移的乳腺癌患者血清miR-6861-5p水平均分别低于Ⅲ～Ⅳ期与有淋巴结转移患者，差异有统计学意义（均P < 0.05）。见表2。

2.3 血清CA153水平与乳腺癌患者病理特征关系分析

Ⅰ～Ⅱ期与无淋巴结转移的乳腺癌患者血清CA153水平均分别低于Ⅲ～Ⅳ期与有淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表3。

2.4 血清miR-6861-5p与CA153指标对乳腺癌的诊断价值分析

以本研究资料为样本，其中乳腺癌组83例为阳性样本，乳腺良性疾病和对照组共160例为阴性样本。再将miR-6861-5p及CA153两指标检测数据分为若干组段，构建ROC分析模型，进行乳腺癌诊断价值分析。分析结果：miR-6861-5p的诊断阈值为7.0，CA153的诊断阈值为16.2 U/mL。在此二阈值处，ROC曲线下面积、敏感度、特异度均在0.7以上或附近，为较高值，提示该二指标均有较好的诊断乳腺癌应用价值。见表4。ROC曲线见图1。

再从本研究样本中随机抽样61例，建立二指标联合诊断模式（综合模式），该模式为：当二指标均高于阈值即判断为阳性（乳腺癌），均低于阈值则诊断为阴性，一高一低则进行复查。如此获得了明显高于该二指标单独诊断的效果，其敏感度和特异度均明显升高，可达0.8以上。见表4。

3 讨论

随着人们生活水平的不断提高以及饮食结构的逐渐改变，乳腺癌的发病率正呈逐年升高趋势，且发病人群趋于年轻化[6-8]。乳腺癌发病早期具有较强的隐匿性，大部分患者一经确诊便是中晚期，丧失了手术根治的最佳时机，因此，寻找一种有效的诊断方式显得尤为重要[9-10]。随着相关研究的不断深入，越来越多的学者发现miRNAs对基因表达具有一定的调控作用，且在细胞生命活动众多的信号转导途径中发挥重要作用，参与了细胞增殖、分化、凋亡、血管生成以及免疫反应等一系列过程[11-12]。另有研究报道显示，miRNAs在血清等多种体液中均存在不同程度的表达，且表达量相对稳定，不易被分解，可多次冻融以及长期保存，因此具有作为临床肿瘤标志物的特性，是目前临床研究的热点[13-14]。

本研究結果显示，乳腺癌组患者血清miR-6861-5p与CA153水平均高于乳腺良性疾病组与对照组（P < 0.05），而乳腺良性疾病组与对照组上述两项指标水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。这提示了乳腺癌患者血清miR-6861-5p与CA153均存在明显高表达状态。分析原因，主要可能是因为两者均参与到了乳腺癌的发生及发展过程。其中miR-6861-5p定位于人类染色体12q24.13，迄今为止尚未见其功能的相关报道，但已有研究学者在日本人群中筛查发现miR-6861-5p在乳腺癌患者血清中的表达明显高于健康女性[15-16]。CA153属于肿瘤相关抗原之一，主要位于肿瘤细胞表面，当细胞骨架被破坏时，细胞表面抗原会凋落，从而导致血清CA153水平显著升高[17-18]。

此外，本研究还发现，Ⅰ～Ⅱ期与无淋巴结转移的乳腺癌患者血清miR-6861-5p与CA153水平均分别低于Ⅲ～Ⅳ期与有淋巴结转移患者（P < 0.05）。这提示病情越重的患者血清miR-6861-5p与CA153水平也相对越高。笔者考虑可能是因为上述两种指标在乳腺癌患者机体中的反馈属于正向性，随着患者病情的加重，二者均通过机体中的Rho等信号通路产生了更加明显的生化调节，最终表现出了更高的表达水平[19-20]。因此，在临床工作中可通过联合检测上述两项指标，从而有效判断乳腺癌患者病情严重程度，进一步为临床治疗方案的制订提供指导作用，最终达到改善患者预后的目的。

最后，本研究显示，miR-6861-5p联合CA153检测诊断乳腺癌的敏感度、特异度均高于miR-6861-5p与CA153水平单独检测。这提示了血清miR-6861-5p与CA153水平的联合检测应用于乳腺癌中具有较高的诊断效能，可作为临床上诊断乳腺癌的有效手段之一。这主要是因为二者的联合检测发挥了较好的协同性和弥补性，有效降低了单项检测时的漏诊或误诊的发生，因此也更具诊断价值。

综上所述，血清miR-6861-5p联合CA153检测应用于乳腺癌患者中具有较高的诊断效能，可显著降低临床漏诊率与误诊率，值得临床推广应用。

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（收稿日期：2018-10-25  本文编辑：封   华）