Nrf2/ARE信号通路与多发性硬化预后的相关性研究

柴竞艳 吴向斌 夏忠斌 鲍兵 陈志颖

[摘要] 目的 探討Nrf2/ARE信号通路与多发性硬化预后的相关性研究。 方法 将我院2014年6月～2017年6月收治的40例多发性硬化症患者作为研究对象，随机分为观察1组、观察2组，各20例。选择同期我院20例健康体检者作为对照组。观察1组给予糖皮质激素联合常规营养神经治疗，观察2组采用单纯营养神经治疗。采用流式细胞仪检测三组入组Nrf2、HO-1、TNF-α表达水平，分析ADL及神经功能评分。 结果 随访6个月、随访12个月，观察1组Nrf2、HO-1表达水平、ADL评分高于观察2组，而其TNF-α表达水平、神经功能评分低于观察2组（P<0.05），观察1组、观察2组Nrf2、HO-1表达水平、ADL评分高于治疗前，而其TNF-α表达水平、神经功能评分低于治疗前（P<0.05），观察1组、观察2组Nrf2、HO-1、TNF-α表达水平高于对照组（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组、观察2组ADL评分低于对照组，神经功能评分高于对照组（P<0.05）。 结论 糖皮质激素联合常规营养神经改善多发性硬化症患者神经功能损伤，其可能通过上调Nrf2、HO-1表达，下调TNF-α表达而发挥作用。

[关键词] Nrf2/ARE;信号通路;多发性硬化;预后;相关性

[中图分类号] R744.5          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）07-0011-03

[Abstract] Objective To explore the correlation between Nrf2/ARE signaling pathway and prognosis of multiple sclerosis. Methods Forty patients with multiple sclerosis admitted to our hospital from June 2014 to June 2017 were randomly divided into observation group 1 and observation group 2， 20 cases in each group. Twenty healthy subjects in our hospital were selected as the control group. Observation group 1 was treated with glucocorticoid combined with conventional nutritional nerve therapy， and observation group 2 was treated with simple nutrition nerve therapy. Flow cytometry was used to detect the expression levels of Nrf2， HO-1 and TNF-α in the three groups， and the ADL and neurological function scores were analyzed. Results At 6 months and 12 months of follow-up， the expression levels of Nrf2 and HO-1 and ADL scores in observation group 1 were higher than those in observation group 2， while the expression of TNF-α and neurological function scores were lower than those in observation group 2（P<0.05）. The expression levels of Nrf2 and HO-1 in the two groups were higher than those before treatment， while the expression levels of TNF-α and neurological function were lower than those before treatment（P<0.05）. The expression levels of Nrf2， HO-1 and TNF-α in observation group 1 and observation group 2 were higher than those in the control group （P<0.05）. At 6 months and 12 months of follow-up， the ADL scores of observation group 1 and observation group 2 were lower than those of the control group， and the neurological function score was higher than that of the control group（P<0.05）. Conclusion Glucocorticoid combined with conventional neurotrophic therapy can improve neurological impairment in patients with multiple sclerosis. The mechanism may be up-regulation of Nrf2 and HO-1 expression and down-regulation of TNF-α expression.

[Key words] Nrf2/ARE; Signaling pathway; Multiple sclerosis; Prognosis; Correlation

多发性硬化症是临床上较为常见的神经系统疾病之一，其是指累及中枢神经系统白质的炎症性自身免疫性脱髓鞘疾病[1-3]，临床上多采用非特异性的免疫治疗方法，如糖皮质激素、免疫抑制剂等治疗措施。相关病理研究显示[4]，多发性硬化症患者常伴有一定程度的少突胶质细胞及轴突的损伤，而炎症趋化因子等炎症介质参与疾病的发展。中枢神经系统含有一系列抗氧化酶来调节受到氧化损伤的细胞，转录因子Nrf2调控这些保护细胞减轻损伤的抗氧化酶的表达[5]。本研究主要探讨Nrf2/ARE信号通路与多发性硬化预后的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将我院2014年6月～2017年6月收治的40例多发性硬化症患者作为研究对象，随机分为观察1组、观察2组，各20例。选择同期我院20例健康体检者作为对照组。观察1组，男12例，女8例;年龄42～76岁，平均（52.5±4.6）岁;观察2组，男11例，女9例;年龄41～77岁，平均（52.6±4.5）岁;对照组，男10例，女10例;年龄40～75岁，平均（52.7±4.5）岁;患者均签署研究知情同意书;本研究经医院伦理委员会批准;三组在性别、年龄等方面比较，无统计学差异（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

观察1组采用甲基强的松（批准文号：H20080284，厂家：Pfizer Manufacturing Belgium NV）500 mg溶于5%葡萄糖注射液500 mL中，静脉输液，每日1次，按2014版中国《多发性硬化诊断和治疗的中国专家共识》，500 mg使用3 d，250 mg使用3 d，120 mg使用3 d，改成60 mg持续口服，后续缓慢减量。同时给予神经节苷脂（国药准字H20066833，长春翔通药业有限公司）20 mg+维生素B族及常规治疗静脉输液，每日1次，连续应用14 d为1个疗程。观察2组则单纯给予神经节苷脂+维生素B族常规治疗，剂量及疗程同观察1组。

1.3 观察指标

记录三组入组患者血液中Nrf2、HO-1、TNF-α表达水平，并分析其日常生活能力水平（ADL）及神经功能评分;采用流式细胞仪检测Nrf2、HO-1、TNF-α表达水平，采用ADL评价其行为生活能力情况，其总评分为100分，得分越高，生活能力越高[6]，采用EDSS量表评价患者神经功能缺损情况[7]，每一项分为5～6个等级，0～10分，得分越高，神经功能缺失越严重。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行数据统计分析，计量资料用（x±s）表示;多组间计量资料比较采用方差分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组Nrf2、HO-1、TNF-α的表达水平比较

治疗前观察1组、观察2组Nrf2、HO-1表达水平低于对照组，而其TNF-α表达水平高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）;治疗前观察1组、观察2组Nrf2、HO-1、TNF-α表达水平比较，无明显差异（P>0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组Nrf2、HO-1表达水平高于观察2组，而其TNF-α表达水平低于观察2组，具有统计学差异（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组、观察2组Nrf2、HO-1表达水平高于治疗前，而其TNF-α表达水平低于治疗前，具有统计学差异（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组、观察2组Nrf2、HO-1、TNF-α表达水平高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）;见表1。

2.2 三组ADL、神经功能评分比较

治疗前观察1组、观察2组ADL评分低于对照组，而其神经功能评分高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）;治疗前观察1组、观察2组ADL、神经功能评分无明显差异（P>0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组、观察2组ADL评分高于治疗前，神经功能评分低于治疗前，具有统计学差异（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组ADL评分高于观察2组，神经功能评分低于观察2组，具有统计学差异（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组、观察2组ADL评分低于对照组，神经功能评分高于对照组，具有统计学差异（P<0.05）;见表2。

3 讨论

多发性硬化症患者发病原因较为复杂，治疗后易反复发作，相关研究显示[8-9]，多发性硬化症患者的致病因素多为自身免疫细胞的功能障碍，以往多采用糖皮质激素、免疫抑制剂及营养神经细胞等治疗该疾病。甲基强的松龙可显著抑制炎症反应，调节免疫功能，抑制T淋巴细胞及B淋巴细胞，而控制白质炎症脱髓鞘是当今MS免疫治疗的主要任务。

本研究主要观察Nrf2/ARE信號通路与多发性硬化预后的相关性。其结果显示：治疗前观察1组、观察2组Nrf2、HO-1表达水平、ADL评分低于对照组，而其TNF-α表达水平、神经功能评分高于对照组（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组Nrf2、HO-1表达水平、ADL评分高于观察2组，而其TNF-α表达水平、神经功能评分低于观察2组（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组、观察2组Nrf2、HO-1表达水平、ADL评分高于治疗前，而其TNF-α表达水平、神经功能评分低于治疗前（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组、观察2组Nrf2、HO-1、TNF-α表达水平高于对照组（P<0.05）;随访6个月、随访12个月，观察1组、观察2组ADL评分低于对照组，神经功能评分高于对照组（P<0.05）;因此，糖皮质激素联合常规营养神经改善多发性硬化症患者神经功能损伤，其可能通过上调Nrf2、HO-1表达，下调TNF-α表达而发挥作用。TNF-α是多发性硬化损伤的潜在发病机制，单核细胞与脑血管内皮细胞相互作用产生活性氧[10-11]，细胞骨架重排，血脑屏障破坏，诱导了巨噬细胞吞噬髓鞘，导致少突胶质细胞、神经元与轴突损伤。当细胞存在氧化应激时，Nrf2转位入核，激活抗氧化反应原件（ARE）所介导的抗氧化酶表达。迄今为止，Nrf2-ARE通路介导的解毒酶和抗氧化酶超过200个，其中包括超氧化物歧化酶1、超氧化物歧化酶2等[12]。Johnson DA等[13]通过Nrf2基因敲除小鼠研究证明：Nrf2的缺失可以使EAE病情恶化，表现为神经功能评分增多与发病率的增加，提示激活Nrf2通路可以减轻自身免疫性疾病。Nrf2/HO-1途径是调节机体抗氧化应激反应的重要信号通路。Nrf2属于亮氨酸拉链家族中重要转录因子，多存在细胞质内，与Keap1相结合而处于失活状态，抗氧化反应元件调控的抗氧化基因 HO-1可激活并表达增加，促进氧化还原反应紊乱恢复至平衡状态，减轻自由基损伤[14]。本研究发现，Nrf2/HO-1高表达、TNF-α低表达，可有助于改善多发性硬化症患者，中枢神经细胞损伤后，糖皮质激素及营养神经细胞治疗后，使脑组织Nrf2基因表达上调、激活并转位至细胞核，激活 Nrf2、HO-1途径，从而激动下游抗氧化蛋白 HO-1的表达，增强机体抗氧化应激的损伤。

综上所述，糖皮质激素联合常规营养神经改善多发性硬化症患者神经功能损伤，可能通过上调Nrf2、HO-1表达、下调TNF-α表达而发挥作用。

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（收稿日期：2018-12-11）