桑树抗黄化型萎缩病种质资源筛选试验

李万明

(安康学院，陕西 安康 725000)

在陕南安康，桑树黄化型萎缩病防治主要通过防治媒介昆虫菱纹叶蝉[2]，由于菱纹叶蝉年发生4代，第二、三代常迁出桑园在其它寄主危害，行踪不定。且该虫食性繁杂，又有世代重叠现象，依靠防虫控制病害的效果较差。树干注药又受到条件限制难以长期维持。化学防治污染环境且易对非靶标家蚕造成毒害[3]。故该病防控必须依靠抗性品种的培育和栽培。

1 材料与方法

1.1 试验试材

测试品种包括陕西省蚕桑重点实验室品种圃引植品种47种，陕南安康地区有明确品种引种记载的主栽品种11种，共计58种。

1.2 试验方法

1.2.1 品种抗病性鉴定 采用种质接穗高接法[4]，此法系病树(砧)接健穗，2014-2015年，每年以发病较重桑树上高接待鉴定桑树品种，方法是选择树冠较大、萎缩病较重、生长势较强的成龄湖桑19桑树，在湖桑19病枝上高接待鉴定58桑树材料的健康接穗，每份参加鉴定的材料每株病树上嫁接4个接穗，5株重复，即每份鉴定材料嫁接20个接穗组成试验样本。

桑树黄化型萎缩病严重度分级为：

1级——健壮，无症状。代表值为0。

2级——病株有隐症现象，髙接接穗中仅有1个枝梢出现黄化枝，表现叶色黄化，皱缩，叶脉呈黄色网状，有时叶片有5%变黄或变红发紫等典型症状。代表值为1。

3级——病株无隐症现象，髙接接穗中有2～3个枝梢出现黄化枝，病株叶片有5%～15%表现黄化萎缩病状，株型出现矮化症状。代表值为2。

4级——病株无隐症现象，髙接接穗中有4个以上枝梢出现黄化枝，病株叶片有16%～25%以上桑叶表现症状，株型明显矮化。代表值为3。

5级——病株无隐症现象，髙接接穗中枝梢全部出现黄化枝，病株叶片几乎全部表现黄化症状，甚至枯焦脱落，枝茎枯死，有时整株出现急性凋萎死亡。代表值为4。

发病程度计算公式[5]：发病率(%)=发病接穗数/成活接穗总数×100

病情指数=∑(各级病株数×该病级值)/ (调查总株数×最高级值)×100

桑树抗黄化型萎缩病抗性评价标准：高抗品种：发病率≤5%，病情指数≤5%； 中抗品种：发病率6%～20%，病情指数6%～10%； 中感品种：发病率21%～40%，病情指数11%～20%；高感品种：发病率≥40%，病情指数≥21%。

1.2.2 种质抗性稳定性鉴定 采用皮枝接种法和管状芽接法[6]，此法以健树(砧)接病穗。具体方法是每年提前3月份将待测定的桑树品种嫁接在实生苗上获取健壮的嫁接苗。至7月中旬时开始进行两次嫁接，第一次嫁接采用皮枝接种法，主要是幼苗(穗)木质化程度不够，目的是检测桑品种产生木卫素前抗性情况。第二次采用管状芽接法，8月中旬开始选取上年高接接穗中的病桑接穗，扭动皮部使之与木质部分离，在病穗芽上下0.5 cm处环割皮层形成芽管，接穗均用5%的盐酸土霉素溶液浸泡后套接在待鉴定的桑品种嫁接苗上。嫁接苗枝条选木质化或半木质化健壮枝条。观察萎缩病芽发病率、病情指数和等级，比较桑品种抗黄化型萎缩病的抗性。

2016-2017年，每年将初选18个抗性品种的接穗再次高接在健康的桑树上，每株接8个接穗，每品种5株重复，每品种40个复接接穗组成观察样本，观察品种资源抗病性的稳定性。每年逐代嫁接两次。

桑树品种对黄化型萎缩病抗病稳定性标准为：0级,接穗(芽)不发病；1级,10%以下接穗(芽)发病；2级,11%～20%接穗(芽)发病；3级,21%～30%接穗(芽)发病； 4级,30%以上接穗(芽)发病。

2 结果分析

2.1 调查黄化型萎缩病在不同桑品种上的发病情况如表1所示。

由表1可知，初测58个桑树种对桑树黄化性萎缩病抗性较强的桑树品种有：育237、育2、凤尾芽变、团头荷叶白、鲁诱1号、鲁诱3号、鲁诱7号、小红皮、908、湖桑199、强桑、葫芦桑、扶桑丸、乌克兰107号、洞庭1号、731、伦教408、青叶鼠返共18个品种。

2.2 抗病稳定性检测

经对18个抗性桑品种种质抗性稳定性逐代嫁接复选，结果如表2所示。

表2可见：抗性稳定性能好，且抗病力强的品种有：凤尾芽变、育237、育2、强桑、湖桑199、葫芦桑等六个品种。抗性不稳定，且相对较弱的品种有：鲁诱1号、洞庭1号两个品种，中等抗性的品种有：鲁诱7号、鲁诱3号、团头荷叶白、乌克兰107号、731、青叶鼠返等。同时，由表2可知，由病芽病穗接健砧接穗成活率高，黄化型萎缩病的发病率低，这种现象说明病害发生时病原存活在芽稍上数量少，这与王忠阳部分观点相吻合[7]。

表1 58个桑品种抗黄化型萎缩病发病程度 (陕西安康 2014，2015)

表2 桑品种种质抗性稳定性检测 (陕西安康 2016，2017)

2.3 综合抗性结果

按照桑树黄化型萎缩病评鉴标准,两次评鉴的抗性等级，综合表1和表2结果，桑树58个品种经筛选抗性结果如下：

高抗品种：凤尾芽变、育237、育2、强桑、湖桑199、葫芦桑。

中抗品种：鲁诱1号、鲁诱3号、豆腐皮、908、红头桑、望天青、湖桑199、广1号、陕桑305、剑持、强桑、扶桑丸、红皮海桑、镜泊桑、伦敦40号、中桑5801、中亚细亚、乌克兰107号、GM41、洞庭1号、金龙、731、黑叶墨斗、伦教408、青叶鼠返、农桑14、农桑8号、陕桑406、陕桑403、陕桑402、金十。

中感品种：桐乡青、盛东1号、8837、鲁9463、浙农火桑、朝桑、伊豆早生、荆青1号、紫薇桑、双头桑、黄桑、麻桑、日本早生、凤尾桑、羊角桑、农桑12号。

高感品种：真肚子、湖桑16、湖桑175、油灯鸡毛掸。

3 结论及讨论

(1)高接和芽管套接操作过程中，要严格执行桑黄化型萎缩病防治规程[8]中桑树嫁接修剪病原阻断技术。具体做法是:①桑树修剪嫁接操作时首先准备脸盆一个，内盛5 L洁净清水。②脸盆中加入消毒液。消毒液配方为：84消毒液50 mL+3%多氧清水剂5 mL(或用病毒灵5 g+农用土霉素25 g+四环素4 g。③准备嫁接工具或修剪工具2至3套，浸泡在消毒液中，确保浸泡时间5～10 min。④大树修剪(或嫁接)时，浸泡工具轮换交替使用，确保一桑(穗)一剪(工具)。此项技术，可以防止病原在高接和芽接时通过工具交互感染。

(2)试验中发现，芽管套接时对芽管使用5%的盐酸土霉素浸泡后，部分芽萌发展叶时叶片能正常发芽展叶，对桑黄化型萎缩病病原的抑制效果明显。但是叶片发黄，分析原因，浸泡叶的PH值过小，因此，在健砧接病穗时，对病穗的消毒药剂及其配比有待进一步研究。

(3)鉴定桑树抗黄化型萎缩病的抗病力,大田诱发法及媒介昆虫传毒法比较传统，虽能真实反映桑种质抗病力强弱,但持续时间长且费工费力[9]. 蒯元璋[10]为了减少病芽管接时接菌量大而提出芽接发病中量法,此法对砧木与接穗的粗细搭配要求较为苛刻。技术难度大，不易控制推广。故试验中对芽接发病中量法进行如下改进：一是采用了皮枝接种法和管状芽接法两种方法。在芽管嫩稍未木质化前，此时芽管难以剥离，采用皮枝接种法，在健砧上接病穗。后期病芽芽管易剥离时采用管状芽接法，克服病穗失水后难取管状芽不足。二是统一对接穗接芽进行了适当的药剂处理，从而减少带菌量。因此，皮枝接种法和管状芽接法具有操作简便，成活率较高，无需贮藏接穗等特点，两法配合使用可有效鉴定桑品种抗黄化型萎缩病的抗病稳定性。但这两种方法在夏季高温季节操作时易造成芽穗脱水，其改良方法有待进一步探索完善。