不同方法提取车前草蛋白质效果比较

李 蒙

(西安文理学院 生物与环境工程学院， 陕西 西安 710065)

车前草(PlantagoasiaticaL.)属于车前科多年草本植物，在自然界分布广泛，主要生长于山野或路旁等处，其种子和全草均可入药，民间采集幼苗经加工成美味而食用，能调节胃肠功能，具有解毒、清热利尿、治疗痰热咳喘等功效[1-2]。

蛋白质资源紧缺成为世界性问题，由于我国人口众多，资源缺乏尤为严重，几乎每年都进口大量的蛋白质饲料原料，因此，蛋白质资源的开发利用具有重要的意义[3]。具有药食两用的车前草是一种极具开发潜力的植物蛋白质资源，目前关于蛋白质提取方法有很多[4]，不同植物中各种成分的差异，故采取不同的提取方法，而从车前草中提取蛋白的方法至今鲜见报道。因此，本研究由必要对车前草叶片的蛋白质的提取方法进行探索，以期为今后车前草蛋白质的开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

前草种子(采摘于陕西省商洛市商州区黑龙口镇山野车)，种植于西安文理学院植物繁育单元温室中，四十天后，采摘新鲜车前草叶片洗净晾干后，研成粉末，作为实验材料。

1.2 试剂与仪器设备

试剂：三羟甲基氨基甲烷(Tris，分析纯)，氯化钠(分析纯)，考马斯亮蓝G250( 超纯，Amresco)等实验所用分析纯试剂。

仪器： 紫外·可见分光光度计(型号：UV-2450，岛津公司)，全自动鼓风干燥箱(型号：ZFD-5250A，陕西天美)，电子天平(型号：BSA223S，上海智泰电子科技)，恒温水浴锅(型号：HH-S，北京科伟)，台式高速冷冻离心机(型号：H1850R，湘仪)。

1.3 方法

1.3.1 蛋白质的提取方法 碱、盐、Tris-HCl提取方法：准确称取约1 g实验材料，按表1和表2进行试验，经浸提时间、浸提温度，离心去除残渣，上清用纱布过滤，然后用2 mol·L-1的稀盐酸调节pH(Tris-HCl提取：加入饱和硫酸铵充分搅拌1 h)有大量沉淀，再12 000 r·min-1离心10 min，再透析得到粗蛋白，再50～60 ℃下烘干至恒重。

表1 正交试验因素与水平

表2 不同方法测定因素与水平

1.3.2 测定蛋白质含量 根据文献[5]Bradford法，以牛血清蛋白标准溶液(浓度为6%)，加入G-250试剂，在波长595 nm下测定吸光度，绘制标准曲线。

计算方法：蛋白质得率(%)=(粗蛋白提取质量/称取叶片样品质量)×100%。运用Excel数据处理与分析。

2 结果与分析

2.1 碱法提取蛋白结果分析

从表3正交试验分析可知，四种因素影响蛋白提取效果为B>D>C>A，碱提取车前草蛋白质最佳工艺为A3B1C2D2，即碱液浓度为1.5 %，浸提温度为60 ℃，抽提60 min，固液体积比1∶ 10。

2.2 盐法提取蛋白结果分析

从表4正交试验分析可知，四种因素影响蛋白提取效果为A>B>D>C，盐提取车前草蛋白质最佳工艺为A3B1C2D1，即盐浓度为1.5 %，浸提温度为60 ℃，抽提时间为60 min，固液体积比为1∶ 5。

2.3 Tris-HCl法提取蛋白结果分析

从表5正交试验分析可知，四种因素影响蛋白提取效果为B>A>D>C，Tris-HCl提取车前草蛋白质最佳工艺为A3B1C3D3，即Tris-HCl缓冲液pH值为8.0，浸提温度为20 ℃，抽提时间为90 min，固液体积比为1:15。

表3 碱法的正交试验结果

表4 盐法的正交试验结果

表5 Tris-HCl法的正交试验结果

3 讨论

研究不同方法对车前草叶片蛋白的提取效果，及其工艺条件的优化，筛选每种提取方法的最佳条件。结果表明，碱提取车前草叶片蛋白的效果要优于盐提取法、Tris-HCl提取法。关于车前草蛋白质的提取鲜见报道，此研究有助于车前草蛋白资源的研究与开发。

统计显示，世界上有2/3的人缺乏蛋白质，寻找蛋白质资源对未来粮食的补充及畜牧业的饲用蛋白的弥补，具有重要意义[6-7]。本结果所得蛋白得率不高，可能原因是车前草中含有大量的多糖类物质[8]，影响提取效果，还有在提蛋白过程中，组织中的蛋白酶活性较高，直接将蛋白质水解，Tris-HCl缓冲液为蛋白酶活性提供了合适的反应体系，或者实验过程中其它影响因素，如原料的破碎程度、杂质等，因此，提取车前草蛋白还有待进一步深入研究。