内皮素受体A基因多态性与中青年原发性高血压的相关性研究

闫生玲 屈丽娜 薛恩忠

原发性高血压（essential hypertension，EH）是临床最常见的慢性病之一，长期高血压是心脑血管疾病的重要危险因素。近年来，有流行病学研究结果显示EH发病不断呈现年轻化趋势，越来越多中青年人罹患该疾病[1]。有学者认为生活方式的改变可能是其主要原因；也有研究提出基因遗传因素对中青年人发生EH所起到的作用值得进一步深入关注[2-4]。内皮素作为迄今所发现的作用最强的缩血管因子，可通过与内皮素受体（endothelin receptor type A，EDNRA）结合发挥缩血管作用，既往已有多项研究结果证实内皮素生成增多或EDNRA活性异常均与高血压的发生发展相关[5-7]。随着分子生物学发展，有研究发现EDNRA基因多态性具有多种生物学功能，可能与动脉瘤、青光眼等疾病发生相关[8-10]。然而目前EDNRA基因多态性与EH相关性的研究相对较少，本研究以中国北方汉族中青年人作为观察人群，比较EH患者与健康体检者EDNRA基因多态性的差异，为临床工作提供参考。

资料与方法

1.研究对象 选择2015年1月至2018年1月，于我院心血管内科治疗的高血压患者纳入EH组。纳入标准：①年龄＞18岁，≤45岁；②出生并长期生活于陕西地区的汉族人；③高血压诊断符合2010中国高血压防治指南[11]；④入组患者彼此无血缘关系。排除标准：①各种原因导致的继发性高血压；②合并糖尿病、甲状腺疾病、心力衰竭、心房颤动、心肌梗死或卒中、严重心律失常、严重肝肾功能障碍及恶性肿瘤病史；③妊娠期女性。本研究共纳入338例EH患者，其中男性204例，女性134例，平均年龄（39.2±4.7）岁。根据所纳入EH患者年龄、性别纳入同时期于我院行健康体检的志愿者300例作为对照组，其中男性175例，女性125例，平均年龄（39.1±4.3）岁。本研究通过本院伦理委员会审核批准，所有入组患者充分知情同意。

2.一般临床资料采集 收集所有入组人员以下基本资料：①一般人口学资料，包括姓名、性别、年龄等；②一般生物学资料，包括体质量、身高、血压等，计算BMI；③生活行为方式，吸烟、饮酒等，本研究吸烟定义为平均每日至少吸烟1支，且至少连续1年；饮酒定义为平均每日饮白酒≥50 g，或红酒≥150 g，或啤酒≥500 g，且至少持续1年。通过采集清晨空腹静脉血，检测患者血脂水平。所有调查员均经统一培训，并采用统一编制的问卷进行调查。

3.基因多态性检测 采集清晨空腹时外周静脉血3mL，采用氯仿饱和酚法提取全基因组DNA，采用聚合酶链反应联合DNA直接测序法检测EDNRA基因rs1801708和rs5335位点多态性。应用Primer5.0及Oligo6.0软件进行引物设计及验证，本研究所用引物由上海生共生物有限公司合成，rs1801708位点上游引物：5′-AAGAGGATGGGTTCCTCTGC-3′，下游引物：5′-CCCAGTCCCCGATAAGAAAG-3′；rs5335位点上游引物：5′-AACACAGACCGGAGCAGCCATA-3′，下游引物：5′-GGGTGTGGGAGTGAATTAAGGAAGAA-3′。严格按照常规PCR扩增操作流程进行操作，两位点退火温度分别设置为56℃和58.5℃。PCR产物采用美国ABI公司配套专用BigDyeⒸTerminator v3.1 Kit试剂盒进行线性扩增，最后采用ABI 3730测序仪进行测序。

4.统计学处理 采用SPSS19.0统计软件分析处理，本研究计量资料均服从正态分布，结果以均数±标准差表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验；计数资料结果以构成百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。基因型分布采用Hardy-Weinberg平衡定律检验。采用二分类多因素Logistic后退逐步回归法评价EDNRA基因多态性与ACS的相关关系。以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1.两组患者基本临床资料 两组在BMI、收缩压和舒张压3项指标，差异具有统计学意义（均P＜0.05）；在性别、年龄、吸烟、饮酒、TG、TC、LDL-C及HDL-C等方面差异无统计学意义（均P＞0.05），如表1。

2.基因分型及Hardy-Weinberg遗传平衡检验结果 人群中EDNRA基因rs1801708和rs5335位点均存在三种基因型，本研究两组研究对象此两位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡（均P＞0.05），具有较好的群体代表性。

3.EDNRA基因多态性与EH的关系 如表2，EH组与对照组比较，两组rs1801708位点基因型和等位基因分布频率，差异均无统计学意义（均P＞0.05）；两组rs5335位点基因型分布频率，差异无统计学意义（P＞0.05），等位基因频率分布，差异存在统计学意义（P＜0.05）。

表1 两组患者基本临床资料[±s，n（%）]

表1 两组患者基本临床资料[±s，n（%）]

注：1 mmHg=0.133 kPa

项目 对照组（n=300）EH组（n=338） t/χ2值 P值男性/女性 175/125 204/134 0.269 0.604年龄/岁 39.1±4.3 39.2±4.7 0.306 0.763 BMI≥25 kg/m2 104（34.7） 190（56.2） 29.696 0.000吸烟 117（39.0） 137（40.5） 0.156 0.693饮酒 16（5.3） 26（7.7） 1.438 0.230高血压病史/年 3.4±2.3 - - -收缩压/mmHg 124.2±17.4 150.7±22.1 16.673 0.000舒张压/mmHg 80.5±10.4 89.2±11.6 9.921 0.000 TG/（mmol/L） 1.4±0.6 1.5±0.7 0.849 0.408 TC/（mmol/L） 3.9±1.0 4.1±1.2 0.855 0.467 LDL-C/（mmol/L） 2.5±0.8 2.7±1.0 0.998 0.397 HDL-C/（mmol/L） 1.2±0.2 1.1±0.3 1.416 0.239

4.分层分析 进一步按照BMI将研究对象分为BMI＜25 kg/m2和BMI≥25 kg/m2两层进行分析，结果显示：对于rs1801708位点，在BMI＜25 kg/m2和BMI≥25 kg/m2两层中，EH组和对照组基因型和等位基因分布频率，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。对于rs5335位点，在BMI＜25 kg/m2时，EH组基因型/等位基因分布频率，在共显性基因模型、隐性基因模型和等位基因模型下与对照组比较，差异均具有统计学意义（均P＜0.05）；在BMI≥25 kg/m2时，EH组与对照组比较在各种基因模型下，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表3。

表2 EDNRA基因多态性与EH的关系[n（%）]

5.多因素分析 校正性别、年龄等混杂因素后，多因素分析结果显示EDNRA基因rs5335位点C等位基因是陕西地区汉族中青年BMI＜25 kg/m2人群发生EH的保护性因素（OR=0.484，95%CI：0.361～0.836，P=0.007）。

表3 不同BMI分层分析结果[n（%）]

讨 论

近年来，不断有研究结果显示基因遗传因素可能与EH发生相关[2，4]。然而，不同研究在研究对象纳入标准、排除标准多方面存在差异，所得的研究结果多数不能被复制，甚至有部分研究结果相互之间彼此矛盾。作者认为EH作为一种基因遗传因素、环境因素和行为因素共同作用疾病，随着患者年龄的增长，环境因素和行为因素在EH发病中所起到的作用愈多，基因遗传因素的作用也逐渐被掩盖，因此研究中青年EH患者基因遗传因素与发病的相关性，对全面认识EH具有重大意义。

越来越多研究证据表明内皮素与EH易感性相关，EH患者血清内皮素-1水平显著升高[12]。内皮素参与EH发生的具体机制目前尚不明确，可能在于：首先，内皮素的直接缩血管作用调控血压变化；其次，有研究发现内皮素与血管内皮细胞炎性反应相关，参与动脉粥样硬化发生发展的病理改变过程，进而导致高血压发生[13]；另外，还有研究结果提示内皮素可通过直接介导机体钠尿排除以参与血压变化[14]。近年来，还不断有研究结果显示内皮素相关基因多态性可能与EH易感性相关，已证实内皮素-1基因存在Lys198Asn、TaqⅠ酶切位点等多个SNP位点与EH发生相关[15]。

内皮素受体包括A、B、C三种亚型，在哺乳动物中表达的主要是A型和B型，两者均在心血管组织中广泛表达，但其生理功能存在显著差异，EDNRA主要与内皮素-1相互作用，介导缩血管作用，EDNRB介导舒张血管作用。人类EDNRA基因位于第4号染色体上，目前研究发现rs1801708、rs5335、rs5343、rs6841581等多个多态性位点均可能具有生物学意义，其中rs1801708和rs5335位点多态性被认为与多种心脑血管疾病关系密切[10，16]。如Lajemi等[17]以未治疗的高血压患者为研究对象，发现EDNRA基因的rsl801708位点G等位基因可增加脉搏波速率，提示EDNRA基因多态性影响动脉硬化的参数；Rahman等[18]发现rs5335位点每携带1个G等位基因可使收缩压升高2.5 mmHg，舒张压升高1.5 mmHg。基于上诉研究结果，作者认为有理由推测EDNRA基因多态性与EH易感性相关。

本研究以陕西地区汉族中青年人群为研究对象，结果显示EH组和对照组比较，rs5335位点等位基因分布频率，差异具有统计学意义，EH组患者C等位基因频率明显低于对照组；两组rs1801708位点基因型、等位基因分布频率，差异均无统计学意义。考虑两组BMI存在差异，且一般认为BMI与血压水平密切相关，本研究进一步按照BMI大小进行分层分析，结果显示在BMI＜25 kg/m2时，EH组，rs5335位点基因型/等位基因分布频率在共显性基因模型、隐性基因模型和等位基因模型下与对照组比较差异均具有统计学意义；而在BMI≥25 kg/m2时，EH组与对照组比较在各种基因模型下其差异均无统计学意义。同时，研究结果显示不同分层中，各种基因模型下均未发现EH组和对照组rs1801708位点基因型/等位基因分布频率存在显著差异。最后，本研究采用Logistics多因素回归分析法，校正性别、年龄等混杂因素，结果显示rs5335等位基因C是BMI＜25 kg/m2的中青年人群发生EH的保护性因素。

综上所诉，本研究发现EDNRA基因rs5335位点多态性与中青年EH发病相关，尤其对于BMI＜25 kg/m2人群。最后，须指出本研究也存在不足之处，首先，本研究仅为单中心研究结果，纳入样本量相对较少，检验效能低，期待后续多中心大样本研究结果加以验证；其次，EH发病系多因素共同作用所致，EDNRA基因除此之外也还包括等多个多态性位点，对于其他因素，其他位点基因多态性以及彼此之间交互作用与EH易感性的关系，也期待后续进一步研究。