Bmal1、eIF4E基因在儿童急性淋巴细胞性白血病中的表达 及临床意义

史利欢 刘 炜 田 亮 刘俊闪 郭明发

河南省儿童医院，郑州儿童医院(河南 郑州450000)

急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童最常见的恶性肿瘤，占儿童白血病的70%～85%，发病高峰发生在学龄前儿童[1]。患者发病后自身造血干细胞增殖分化功能异常，以至于淋巴细胞数量减少，属于儿童时期恶性克隆性疾病。针对该疾病的发病机制及疾病原因尚处于研究状态，但是国外研究人员发现该病可能与基因以及细胞死亡等方面有一定关联性[2-3]。有报道指出[4-5]，白血病的发生及发展进程中与机体多种基因之间存在关联性，本次研究对急性淋巴细胞性白血病患儿治疗前后Bmal1、eIF4E基因表达水平变化进行研究并分析其相关性，特作以下报道。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年1月～2017年8月我院收治30例未经任何临床治疗的初治确诊急性淋巴细胞性白血病患儿作为研究组，其中男16例，女14例，年龄1～11岁，平均年龄(5.6±1.2)岁，该组患儿经过临床治疗后，采取骨髓形态学、免疫学、遗传学及分子生物学等检查其骨髓缓解情况，另选择健康儿童30例作为对照组，其中男15例，女15例，年龄1～11岁，平均年龄(5.4±1.5)岁，所有患儿均排除心、肝、肾器质性病变，患儿家属自愿加入本次研究，并签署相应知情同意文件。患儿一般资料无统计学差异(P>0.05)，医院伦理委员会审核通过。

1.2方法

1.2.1 样本：研究组化疗前、研究组化疗后及对照组儿童留取静脉血2ml，EDTA抗凝，所有操作在无菌环境下进行。

1.2.2 对血液样本单个核细胞进行分离：静脉全血与无菌生理盐水1∶1混匀稀释至4ml，血液稀释液与淋巴细胞分离液以2∶1比例分离单个核细胞，离心20min提取中间白膜层。无菌盐水反复洗涤后，制备单个核细胞悬液。

1.2.3 RNA提取：单个核细胞悬浮液加入1ml Trizo混匀，常温静置5min，加入200μL的氯仿，震荡混匀，静置5min后离心15min，取无色水相至离心管内并加入等量异丙醇，10min后再次离心，弃上清静置3min，加DEPC水20ul，最终选取RNA后逆转录合成cDNA。

1.2.4 定量RT-PCR检测Bmal1、eIF4E mRNA水平：反转录用RNA-cDNA试剂盒(ABI，Carlsbad，CA)进行，荧光定量PCR用ABI TaqMan引物和试剂在Roche LightCycler 480II上进行检测。所有mRNA测量均标准化为β-actin mRNA水平。

2 结果

2.1研究组患儿化疗前与化疗后Bmal1、eIF4E基因水平对比 研究组患儿化疗前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于化疗后(P<0.05)，具体见表1。

表1 研究组患儿化疗前与化疗后Bmal1、eIF4E基因水平对比

2.2研究组患儿化疗后与对照组患儿Bmal1、eIF4E基因水平对比 研究组患儿化疗后外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于对照组(P<0.05)，具体见表2。

表2 研究组患儿化疗后与对照组患儿Bmal1、eIF4E基因水平对比

2.3研究组患儿化疗前与对照组患儿Bmal1、eIF4E基因水平对比 研究组患儿化疗前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于对照组(P<0.05)，具体见表3。

表3 研究组患儿化疗前与对照组患儿Bmal1、eIF4E基因水平对比

3 讨论

研究发现急性淋巴细胞性白血病患者病情发展受到自身体内多种基因的影响[6]。eIF4E是一种蛋白质合成翻译起始的限速因子，如细胞核内部的表达超过正常范围则会加速细胞增生，细胞自身死亡进程受到明显抑制作用，分裂与死亡失衡状态下易发生细胞癌变[7]。另外研究还发现多种类型肿瘤细胞内部的eIF4E基因表达均处于升高状态，充分表明这种基因的表达与肿瘤存在某种关联性[8-9]。流行病学针对基因的节律性进行大量分析发现，癌症易感性与之存在一定关联，并且有研究人员在自身研究结果支持下大胆做出肿瘤的出现与患者机体内昼夜节律的控制基因变化有很大关联性的设想[10]。并逐步对其进行深入的研究，而Bmal1基因就属于节律控制的主要核心参与基因之一，对节律的调节起到至关重要的作用，但因内容较为复杂，目前尚处于研究状态，并未给出准确定量[11]。

研究数据显示，研究组化疗前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于化疗后(P<0.05)，研究组化疗前外周血Bmal1、eIF4E基因水平高于对照组(P<0.05)，研究组化疗后外周Bmal1、eIF4E基因水平高于对照组(P<0.05)。这是因为eIF4E基因是一种单纯的限速因子，并不能直接参与癌细胞生成。而研究发现初诊患儿该基因表达极高，对于诊断、治疗等方面存在明显的特异性，可作为确诊及治疗效果判定的主要特异性指标之一，可对患者诊断及预后治疗产生积极的影响，具有较高的临床价值。Bmal1水平变化与患儿疾病进展及化疗效果存在明显的联系。研究发现50%以上患儿自身Bmal1基因表达处于正常水平，但是另外少部分患儿Bmal1基因则出现甲基化，足以证实该基因表达与疾病发生发展存在关联性，可在临床诊断及治疗中作为特异性指标使用[12]。

综上所述，在针对儿童急性淋巴细胞性白血病的初诊筛查中，外周血Bmal1、eIF4E基因指标特异性明显，可作为相关性指标进行筛查诊断，另外因治疗对Bmal1、eIF4E基因水平影响效果明显，也可作为治疗效果观察指标在临床中使用。