原发性高血压并发2型糖尿病患者与MTHFR C677T基因的相关性研究

隋小芳,徐 男,费秀斌,黄佳滨,范巧菊,王凤玲*

(1.佳木斯大学附属第一医院 老年病科,黑龙江 佳木斯154002；2.佳木斯大学老年医学研究生)

亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)催化5，10-亚甲基四氢叶酸转化为5-甲基四氢叶酸，这一过程为同型半胱氨酸到甲硫氨酸的甲基化提供了碳源[1]。MTHFR C>T的转换导致酶活性的降低，进而同型半胱氨酸水平增高[2]。本研究旨在通过检测高血压并发糖尿病患者中MTHFR C>T的突变频率，探讨高同型半胱氨酸水平与糖尿病的发生和发展的关系，为临床更好的治疗和预防高血压和糖尿病的发生和发展奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 研究对象

本研究总计纳入了从2017年11月到2018年3月就诊于佳木斯大学附属第一医院的患者，严格按照实验纳入标准排除后有317人符合，同时，选取同期体检中心73人作为对照组共同纳入本研究。最终，本研究共纳入113名高血压患者(HTN组)、101名2型糖尿病患者(T2D组)、103名高血压并发2型糖尿病组(HTN+T2D组)和73名健康人(control组)。

所有以上研究对象是长期居住在佳木斯地区且没有血缘关系的汉族人，本研究已经通过佳木斯大学附属第一医院伦理委员会的认可，且已经获得研究对象的知情同意书，同意提供外周静脉血做基因型检测分析。

1.2 纳入标准

(1)年龄≥18岁；(2)没有重大疾病(肝肾衰竭、癌症等)或传染性疾病史；(3)原发性高血压组纳入标准参照2017年《高血压防治指南》；(4)2型糖尿病诊断标准符合1999年WHO糖尿病专家委员会报告。

1.3 实验方法

采集所有受试者静脉血2 ml于紫色抗凝真空采血管中，放置-20℃冰箱中冷藏保存。DNA提取使用传统的实验方法(酚氯仿方法)。采用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性对SNP进行基因型分析，并用高分辨溶解曲线进行基因型分析。为了保证基因分型的质量，我们随机选择了三个基因型样品进行直接测序,未见差异。

1.4 统计学处理

运用SPSS 19.0版本做数据处理和分析。哈迪温伯格平衡分析检验群体的代表性，t检验用于样本均值间的比较，分类变量用频率表示；χ2检验分析MTHFR等位基因频率与基因型频率比较。本研究所有的统计检验结果均为双尾，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 各实验组临床资料的比较

HTN组、T2D组、HTN+T2D组分别与control组的比较，结果见表1。四组在年龄、性别无明显差异(P>0.05)。其中HTN组、T2D组、HTN+T2D组中同型半胱氨酸水平分别高于control组，且差异有统计学意义(P<0.05)。T2D组、HTN+T2D组中甘油三酯水平高于control组，HTN组、HTN+T2D组中血压高于control组，差异均有统计学意义(P<0.05)，其余未见有明显差异(P>0.05)。

表1 各实验组临床基线数据的比较

注：M:男,F:女,Hcy:同型半胱氨酸TG:甘油三酯,TC:总胆固醇,LDL:低密度脂蛋白,HDL:高密度脂蛋白,FBG:血糖,SBP:收缩压,DBP:舒张压,PP:脉压差。*表示P<0.05。

2.2 各实验组患者哈迪温伯格平衡分析

HTN组、T2D组、HTN+T2D组和control组的哈迪温伯格平衡分析检验结果见表2，结果显示各组P>0.05，说明样本具有群体代表性。

表2 各实验组患者MTHFRC677T的哈迪温伯格平衡分析

2.2 各实验组患者MTHFR C677T基因型和等位基因频率的比较

HTN组、T2D组、HTN+T2D组和control组MTHFR C677T基因型和等位基因频率的组间比较，结果见表3。HTN组、T2D组、HTN+T2D组T等位基因频率显著高于control组，且差异有统计学意义(61.06% vs.41.78%,61.39% vs.41.78%,53.88% vs.41.78%,Prangge=0.0003-0.03)；HTN组、T2D组TT基因型频率明显高于control组，差异有统计学意义(38.94% vs.13.70%,34.65% vs.13.70%,P=0.0007)，HTN+T2D组TT基因型频率高于control组，但无统计学差异(25.24% vs.13.70%,P=0.06)，其余组未见明显差异(P>0.05)。

表3 各实验组患者MTHFRC677T的基因型频率和等位基因频率

注：P<0.05为有统计学意义。

3 讨论

高血压并发糖尿病患者的心血管疾病发生率会明显上升，基于这两种疾病基础罹患心血管疾病风险增加2-4倍[3]。近来有研究表明同型半胱氨酸水平与2型糖尿病及心血管疾病相关，MTHFR C>T降低了酶的活性，引起同型半胱氨酸水平增高，机体活性氧的破坏性产生导致胰岛素抵抗，进而引起糖尿病的发生[4，5]。国外有研究表明MTHFR C>T与糖尿病无明显关联，与本实验研究结果不同，可能是由于地区、种族差异，使基因变异的频率不同，如C677T的TT基因型的频率在印度的拉其普特地区人群中发现为7.8%，而在印度的科姆、梅泰、帕特等地区人群中未发现这种基因型[6，7]。此外，本研究结果显示高血压并发2型糖尿病患者的MTHFR 677T基因型频率均低于单纯高血压和糖尿病患者，CC、CT基因型频率高于单一病种的患者，但未有统计学意义，未来需进一步研究。

综上，本研究结果表明：MTHFR 677T基因型与高血压和2型糖尿病的发病风险相关；与高血压并发2型糖尿病可能无关，尚需未来进一步探讨。