肿瘤标志物CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1与D-D联合检测在非小细胞肺癌早期诊断中的应用

刘 奕

(天津市胸科医院检验科，天津 300350)

非小细胞肺癌(NSCLC)是临床最为常见的肺癌类型，约有4/5以上的肺癌都为NSCLC。NSCLC的治疗方案、预后与肿瘤类型及诊断时机有着紧密联系[1]。NSCLC的诊断多采用支气管镜检查结合活检、痰脱落细胞学检查、影像引导穿刺活检、胸部CT等手段，但是这些诊断手段都为有创检查，并且多用于NSCLC中晚期诊断[2]。肺癌在早期通常无明显临床症状，患者多在体检时发现肺部实质性病灶，而早期肺癌的肺部实质性病灶缺乏特异性，临床容易将其与肺结核、肺炎、肺部炎性假瘤等混淆而延误诊断[3]。近年来，肿瘤标志物在肺癌诊断中的应用越来越受关注，但是目前还未发现肺癌的特异性抗原，所运用的肺癌标志物均为肿瘤相关物质。癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)是目前临床用于肺癌诊断的几种常用肿瘤标志物，这些标志物各有优势，但均不是器官特异性标志物，并且诊断不同类型肺癌的敏感性差异明显。有研究发现[5]，D-二聚体(D-D)在癌症患者体内的表达有一定的特殊性，其在NSCLC患者血清中有明显的升高趋势。本次研究拟将肿瘤标志物CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1与D-D共同用于NSCLC的早期诊断中，现将其应用情况报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

研究对象为60例NSCLC患者、60例良性肺病患者和60例健康志愿者，分别纳入NSCLC组、良性肺病组、对照组，病例来源于本院2016年6月至2018年6月肿瘤科、胸外科的住院或门诊患者。(1)纳入标准：NSCLC患者经组织学或病理学检查明确诊断，良性肺病患者经纤维支气管镜、肺部螺旋CT等检查确诊，健康志愿者无肺部疾病；体温、血常规检查正常；无感染征象；无心、脑、肝、肾等重要脏器疾病；患者自愿参与研究并签署了知情同意书。(2)排除标准：合并其他系统恶性肿瘤者；接受过抗癌系统治疗者；伴有肝硬化者；合并严重肾病、心脏疾病者；测量前1周应用过高剂量利尿剂者，或应用过可影响测量指标相关药物者；病历资料不完整者。NSCLC组男34例，女26例，其中鳞癌32例，腺癌28例，年龄50～73岁，平均(59.8±8.2)岁；良性肺病组男28例，女32例，其中炎性假瘤10例、结核瘤24例、错构瘤16例、纤维瘤10例，年龄47～76岁，平均(58.3±7.9)岁；对照组男30例，女30例，年龄49～75岁，平均(59.0±10.6)岁。3组研究对象的性别构成比、平均年龄接近(均P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1检测试剂与仪器

仪器：TECAN SUNRISE酶标仪；Roche E601型电化学发光仪；SC-3610离心机；Sysmex CA7000全自动凝血分析仪。

试剂：CYFRA21-1试剂盒、NSE试剂盒、CEA试剂盒、SCC-Ag试剂盒均为美国Roche公司产品；D-D试剂盒为上海捷门生物技术合作公司产品；肝素钠、枸橼酸钠均为赛诺菲(北京)制药有限公司产品。

1.2.2标本采集与检验

采集3组研究对象的空腹静脉血(3 ml)，进行离心处理(2000 r/min，5 min)后，保留血清及血浆，放置于-20℃的冰箱中保存待检。检测前，将标本放置于室温平衡。在电化学发光仪中加入待检试剂盒(CEA、SCC-Ag、CYFRA21-1、NSE)，仪器对试剂自动搅拌使其处于悬浮状态，然后加入血清标本，2 h后读取结果。在全自动凝血分析仪中加入D-D试剂盒，仪器自动搅拌让试剂处于悬浮状态，然后加入血浆标本进行检测，2 h后读取数据。

正常值参考范围：D-D<1 μg/ml；CYFRA21-1<3.3 ng/ml；NSE<12 μg/L；CEA<3 μg/L；SCC-Ag<5 ng/ml，检测结果超过正常值即判定为阳性，联合检测中其中任何一项超过正常值即判定为阳性。

1.3 观察指标

(1)对比3组的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D检测结果。(2)对比不同病理类型NSCLC患者的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D检测结果。(3)对各指标检测结果绘制ROC曲线，并计算曲线下面积(AUC)，对比CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D单项检测与联合检测对NSCLC的诊断敏感性、特异性。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D检测结果

3组研究对象的各项检测指标比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；肺癌组的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D水平均显著高于良性肺病组与对照组(P<0.05)，良性肺病组的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D水平又显著高于对照组(P<0.05)。见表1。

2.2 CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D阳性率

与对照组和良性肺病组比较，肺癌组的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D阳性率均明显更高(P<0.05)。见表2。

2.3 不同病理类型NSCLC患者的各项指标检测结果

肺癌组中，腺癌患者的CEA水平显著高于鳞癌患者，SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D水平均显著低于鳞癌患者(P<0.05)。见表3。

表1 3组研究对象的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D检测结果比较

表2 3组研究对象的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D阳性率比较[n(%)]

表3 不同病理类型NSCLC患者的各项指标检测结果

2.4 ROC曲线分析

CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D单独检测及5项指标联合检测诊断NSCLC的ROC曲线下面积分别为0.736、0.771、0.814、0.755、0.764、0.915，联合检测的AUC值明显比5项指标单独检测更高(图1)。5项指标指标联合检测对NSCLC的诊断敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为87.3%、89.6%、88.5%、86.5%，均显著高于各项单独检测(P<0.05)。见表4。

图1 各项指标诊断NSCLC的ROC曲线

3 讨 论

CEA是一种具有胚胎抗原特异性决定簇的酸蛋白，早期研究认为CEA为大肠癌的特异性抗原，但随着后续研究的不断深入，越来越多的研究显示在肺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌等恶性肿瘤中也能检测到CEA，故认为CEA并非大肠癌的特异性抗原，其本质可能为腺癌标志物[6-7]。本次研究结果显示肺癌组的血清CEA水平、CEA阳性率均显著高于另外两组，并且腺癌患者的血清CEA水平明显比鳞癌患者更高。这一结论契合了前述文献报道结果，提示CEA是一种较为普遍的肿瘤标志物，并且相比肺鳞癌，CEA与肺腺癌的关系更为密切。

CYFRA21-1是一种可溶性酸性多肽物质，是一种细胞骨骼标记物。在肿瘤细胞死亡或溶解时会激活蛋白酶，加速细胞角蛋白降解，从而将大量的CYFRA21-1释放到血液中引起血清CYFRA21-1含量升高。研究显示[8]，NSCLC患者血液中的CYFRA21-1水平明显升高，其对NSCLC的敏感性超过50%，并且相比腺癌，CYFRA21-1对鳞癌的敏感性更高，是目前临床用于诊断鳞癌的可靠标记物。本次研究结果也显示，相比良性肺病组与对照组，肺癌组的血清CYFRA21-1水平明显更高，并且在肺癌组中，鳞癌患者的CYFRA21-1水平显著高于腺癌患者。这一结果说明血CYFRA21-1对NSCLC有较高的预测价值，但CYFRA21-1对腺癌的敏感性不及鳞癌。

NSE是糖酵解酶的关键酶，是神经母细胞瘤的重要肿瘤标志物，其在神经内分泌细胞和神经元细胞中有广泛分布。肺癌是最常表现有神经内分泌性质的肿瘤，研究显示[9]NSE在肺癌组织中的含量远远超过正常肺组织，二者的NSE含量差值最高可达到30倍。临床认为NSE是小细胞肺癌的高特异性、高敏感性标志物，其对小细胞肺癌的敏感性超过70%，但对NSCLC的敏感性、特异性相对较低。本次研究显示肺癌组的NSE水平显著高于良性肺病组与对照组，NSE对NSCLC的敏感性、特异性分别为66.2%、59.4%。说明NSE对NSCLC有一定的相关性，但对NSCLC的敏感性、特异性并不高。

表4 各检测指标诊断NSCLC的ROC曲线分析结果

SCC-Ag为糖蛋白，是从子宫颈鳞状细胞中分离出来的抗原TA4的亚组分，广泛存在于恶变的上皮细胞中，尤其是鳞癌细胞。SCC-Ag水平的高低与肿瘤分化程度密切相关，对肺鳞癌有较高的诊断特异性，但是对肺鳞癌的诊断敏感性并不高[10]。国内有文献报道[11]，联合检测循环肿瘤细胞数与血清SCC-Ag水平，能够有效提高NSCLC的早期检出率。本次研究结果显示，肺癌组的SCC-Ag水平显著高于另外两组，鳞癌患者的SCC-Ag水平显著高于腺癌患者，ROC曲线分析显示SCC-Ag对NSCLC的诊断特异性高达90.1%，但诊断敏感性仅为55.2%。这一结果与前述文献报道结论相符。

D-D是纤溶酶与交联纤维蛋白相互作用所产生的代谢产物，其水平的升高预示着凝血功能异常和机体处于纤溶亢进状态。肺部恶性肿瘤细胞可分泌促凝血物质，激活产生凝血酶的级联反应，促进纤维蛋白形成。凝血功能系统与恶性肿瘤细胞之间可相互作用、相互影响，从而促进肿瘤细胞增殖、转移，所以恶性肿瘤的生长、发展、转移均与凝血系统紊乱有着密切联系[12]。有研究显示[13]，NSCLC患者的血液呈高凝状态，D-D水平明显上升。还有研究发现，恶性肿瘤患者发生弥散性血管内凝血的风险较高，这主要与肿瘤细胞引起的凝血功能异常有关。D-D水平不仅与肺癌预后密切相关，还能反映机体的纤溶亢进状况，可用于临床评估肺癌患者预后的有效指标。国内有研究指出[14]，肺癌患者的凝血指标多存在一项甚至多项异常，并且晚期肺癌患者表现得更为明显，所以认为D-D在肺癌的诊断中有一定价值。本研究也发现肺癌组的D-D水平及D-D阳性率均显著高于另外两组，D-D对NSCLC的诊断敏感性、特异性分别为80.1%和63.2%。这一结果说明D-D对NSCLC虽有较高的敏感性，但特异性较低。

CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC-Ag、D-D在NSCLC的早期诊断中各具优势，为提高NSCLC的早期诊断敏感性与特异性，临床常联合检测多项指标。本次研究结果显示CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC-Ag、D-D五项联合检测对NSCLC的诊断敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值均较高，分别为87.3%、89.6%、88.5%、86.5%，明显优于各项单独检测的诊断效能(P<0.05)。这是因为多项肿瘤标志物及D-D联合检测有效避免了单一标志物检测可能带来的假阳性、假阴性，从而有效降低漏误诊风险。

综上所述，肿瘤标志物CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1与D-D联合检测对NSCLC有较高的敏感性、特异性，能够有效提高NSCLC的早期诊断准确率，临床应用优势显著。