糖尿病肾病患者自身抗体检测的意义

杨宏秀，张会芬，刘丽，袁宝军，夏彦东，王建梅

（开滦总医院 1.检验科，2.妇产科，河北 唐山 063000）

糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）是导致糖尿病患者死亡及致残的主要原因[1]，对DN早诊断，可预防DN的发生、发展，有利于糖尿病患者的预后[2-3]。DN是继发于糖尿病的全身性微血管病变，主要表现为微血管循环障碍和微血管基底膜增厚，尿酸（uric acid,UA）通过介导血管损伤参与了DN肾损害[4]；同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）是一种反应性血管损伤氨基酸，与DN的进展相关[5]；抗肾小球基底膜抗体（anti-GBM antibody）引起的疾病很可能是由于肺出血-肾炎综合征抗原暴露引起[6]；抗心磷脂抗体（anti-cardiolipin antibodies,ACA）可加重血管损伤，与体内的高凝状态有关[7]。本研究通过对糖尿病患者血清UA、Hcy、GBM和ACA的检测，探讨其在DN诊断中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年9月—2017年2月开滦总医院就诊的2型糖尿病（T2DM）患者174例作为研究对象。其中，男性89例，女性85例，年龄41～65岁，平均（52.1±7.8）岁。所选患者均符合1999年WHO糖尿病诊断标准[8]，除外恶性肿瘤、高血压、泌尿系感染、糖尿病酮症酸中毒及心功能不全，无糖皮质激素服用史。所有患者根据肾小球滤过率（GFR）和尿蛋白/肌酐比值（ACR）分为4组：单纯糖尿病组（A组）32例，GFR ≥ 60 ml/（min·1.73 m2）且 ACR＜30 mg/g ；早期糖尿病肾病组（B 组）42 例，GFR ≥ 60 ml/（min·1.73 m2）且30 mg/g≤ACR≤300 mg/g；糖尿病肾病组（C组）45 例，GFR ≥ 60 ml/（min·1.73 m2）且 ACR＞300 mg/g；肾功能不全组（D组）55例，GFR＜60 ml/（min·1.73 m2）且ACR＞300 mg/g。4组患者性别比例、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

留取受检者晨尿10 ml，检测尿清蛋白，并于清晨抽取静脉血 3 ml，静置 20 min 后 3 000 r/min 离心10 min分离血清，置入-20℃冰箱冷冻保存待测。血清复融后统一检测血清UA、Hcy、GBM和ACA。血清UA和Hcy使用全自动生化分析仪检测，UA采用氧化酶法检测，Hcy采用酶法检测，GBM和ACA采用间接酶联免疫法检测后计算其浓度。GFR采用适合中国人的改良 MDRD 计算公式，GFR（ml/min·1.73 m2）=186×Scr-1.154× 年 龄 -0.203×0.742（ 女 性 ）×1.233（中国人）。

1.3 仪器与试剂

日立7180全自动生化分析仪（日本日立公司），尿酸试剂盒（液体）（上海科华公司），Hcy测定试剂盒（北京九强公司），抗肾小球基底膜抗体测定试剂盒、抗心磷脂抗体免疫球蛋白G（ACA-IgG）测定试剂盒、抗心磷脂抗体抗免疫球蛋白A（ACA-IgA）测定试剂盒、抗心磷脂抗体免疫球蛋白M（ACA-IgM）测定试剂盒（深圳亚辉龙公司）。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0统计软件，正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，ACA-IgM的结果呈偏态分布，将其转换平方根后以（±s）表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，两组间比较采用LSD-t检验，两变量间进行Pearson直线相关性分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清UA及Hcy结果比较

各组血清UA及Hcy结果比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。B、C、D组的血清 UA 水平高于A组（t=3.090、5.130 和 7.477，均P=0.003），B、C、D 组的血清 Hcy水平也高于A组（t=2.774、6.550和 8.083，P=0.007、0.000和0.000）；与B组比较，C组血清UA和Hcy水平升高（t=2.445和2.229，P=0.017和0.024），D组血清UA和Hcy水平升高（t=5.298和5.546，均P=0.000）；D组与C组比较，血清UA和Hcy水平升高（t=2.956 和 4.190，P=0.004 和 0.000）。见表1。

2.2 各组自身抗体结果比较

各组血清GBM和ACA-IgA结果比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。与A组比较，B组ACA-IgM水平升高（t=2.097，P=0.040），GBM、ACA-IgG 和ACA-IgA水平差异无统计学意义（t=1.038、1.716和 0.760，P=0.303、0.091 和 0.450），C 组 GBM、ACA-IgG 和 ACA-IgA水平升高（t=4.563、4.014和2.664，均P=0.000），ACA-IgM水平差异无统计学意义（t=1.897，P=0.062），D 组 GBM、ACA-IgA 和 ACAIgG 水 平 升 高（t=4.165、2.475 和 2.253，P=0.000、0.015 和 0.027），ACA-IgM 水平差异无统计学意义（t=0.872，P=0.386）；与B组比较，C组GBM、ACA-IgG、ACA-IgA和ACA-IgM水平差异无统计学意义（t=1.121、1.895、1.724 和 -0.210，P=0.266、0.062、0.067和0.834），D组GBM和ACA-IgA水平升高（t=2.718和 2.363，P=0.018和 0.020），ACA-IgG 和 ACA-IgM水平均无统计学意义（t=1.678 和 -1.377，P=0.097 和0.172）；D组与C组比较，GBM水平升高（t=2.435，P=0.017），ACA-IgA、ACA-IgG 和 ACA-IgM水平均无统计学意义（t=0.305、0.714 和 -1.179，P=0.761、0.964和0.241）。见表2。

表1 各组血清UA及Hcy结果比较 （±s）

表1 各组血清UA及Hcy结果比较 （±s）

注：1）与A 组比较，P＜0.05；2）与 B组比较，P＜0.05；3）与C组比较，P＜0.05

组别 n ACR/（mg/g） GFR/[ml/（min·1.73 m2）] UA/（μmol/L） Hcy/（μmol/L）A 组 32 6.90±5.74 146.82±26.13 314.57±82.04 11.45±3.03 B 组 42 149.55±78.621） 126.57±27.801） 375.73±81.881） 15.84±8.251）C 组 45 476.42±205.411）2） 95.62±20.881）2） 422.78±94.091）2） 19.46±6.211）2）D 组 55 765.56±296.971）2）3） 26.76±10.051）2）3） 483.69±106.971）2）3） 26.70±10.051）2）3）F值 118.232 213.272 23.173 28.786 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 各指标与肾功能相关性分析

采用Pearson相关分析，GBM、ACA-IgA、UA和Hcy分别与ACR呈正相关（r=0.281、0.206、0.411和 0.492，P＜0.05）；ACA-IgG 和 ACA-IgM与ACR无相关性（r=0.051 和 -0.015，P＞0.05）。

表2 各组自身抗体浓度结果比较 （u/L，±s）

表2 各组自身抗体浓度结果比较 （u/L，±s）

注：1）与 A 组比较P＜0.05；2）与 B 组比较，P＜0.05；3）与 C 组比较，P＜0.05

组别 n GBM ACA-IgG ACA-IgA ACA-IgM A 组 32 3.063±0.059 3.421±0.130 1.123±0.452 1.338±0.674 B 组 42 3.146±0.294 3.435±0.521 1.349±0.529 1.495±0.6821）C组 45 3.173±0.1531） 3.448±0.6131） 1.499±0.3721） 1.440±0.603 D 组 55 3.284±0.2841）2）3） 3.452±0.8321） 1.647±0.9551）2） 1.417±0.729 F值 6.729 2.026 4.710 0.332 P值 0.000 0.112 0.003 0.802

3 讨论

UA是嘌呤核苷酸的代谢产物，通过增加血小板的黏附，沉积于肾间质和肾小管，激活肾素—血管紧张素的表达而介导肾血管损伤[9-10]，有文献指出，UA可作为评价糖尿病患者肾脏损害严重程度的指标[11]。本研究显示，随着DN肾损害程度的加重，血清UA的水平升高，且与ACR呈正相关，可见血清UA水平升高可提示早期肾损伤，并可作为监测DN进程的指标。

Hcy增高也是糖尿病患者出现肾损害的危险因素，Hcy通过诱导产生过氧化物酶或抑制一氧化氮合成酶，增强自由基活性，引起血管内皮细胞损伤，导致蛋白尿[12-13]。本研究显示，Hcy与ACR呈正相关，且随着DN病情的加重Hcy水平逐渐升高，差异有统计学意义，即Hcy可作为DN早期肾损害检测指标，并监测DN的疾病进程。

GBM以人基底膜Ⅳ型胶原α3链的非胶原区1为靶抗原，抗原抗体结合后激活补体，并与中性粒细胞和巨噬细胞结合，后者通过释放溶菌酶和细胞因子，导致肾小球基底膜溶断裂，产生局部炎症[14]。本研究显示，GBM浓度随着DN的发展逐渐升高，C组与A组比较，GBM浓度升高，D组分别与A、B、C组比较，GBM浓度均升高，且GBM与ACR呈正相关，提示GBM在DN的发生发展中能反映肾损害的严重程度。

ACA是一种自身抗体，有IgG、IgA、IgM 3类，它以血小板和内皮细胞上带负电荷的心磷脂为靶抗原，与血栓形成密切相关。糖尿病的发展进程中多种因素可直接或间接损伤血管壁，内皮细胞受损和血小板活化后激活ACA，而ACA又可加重血管损伤并使前列环素合成减少和血小板聚集，促使血栓形成，产生各种慢性并发症，尤其是血栓并发症[15]。本研究发现，随着糖尿病肾损害的加重，ACA-IgG 和ACA-IgA逐渐升高，尤其到C组和D组分别与A组比较其水平升高，而D组与B组比较，其ACA-IgA水平也升高，ACA-IgA与ACR呈正相关；B组与A组比较，ACAIgM水平升高，后随着肾损害加重ACA-IgM水平降低，但D组仍高于A组，即ACA-IgM在糖尿病肾功能损伤早期即可升高，提示DN早期肾损害。由此可见ACA可在DN进程中提示糖尿病肾损害的程度，指导临床及时对症治疗。

血清GBM、ACA、UA和Hcy均参与肾血管损伤，本研究提示，UA、Hcy和ACA-IgM水平可提示早期肾损害，血清GBM、ACA、UA和Hcy可作为DN疾病进程的监测指标，为DN的诊断和治疗提供依据，延缓DN的发展，提高患者的生存质量。