“益培灵”在自由人槭‘秋焰’组培快繁中的抑菌效果试验

杨春柳，史绍林

(黑龙江省森林与环境科学研究院，黑龙江 齐齐哈尔 161005)

植物组织培养中发生污染的现象是普遍存在的问题， 创造无菌环境对减少组培瓶苗污染率来说尤为重要。在做好其他控制措施的同时添加适当的抑菌剂可以防止污染[1]，在自由人槭‘秋焰’(Acer×freemanii)快速繁殖中，控制污染是组培工厂化育苗可持续生产的必要条件，因此，尝试添加新兴杀菌剂 “益培灵”观察其抑菌效果，为合理控制成本，规模化繁殖提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

组培室内以自由人槭‘秋焰’不定芽苗无菌苗为材料。

1.2 供试杀菌剂

“益培灵”为植物组织培养专用防污染杀菌剂，具有易溶解于水且 120 ℃加热2 h活性不下降的特性，购自上海稼丰园艺用品有限公司。

1.3 试验设计

基本培养基为改良MS培养基，在培养基内添加①不添加任何杀菌剂；②青霉素10 mg·L-1、 20 mg·L-1；③“益培灵”10 mg·L-1、20 mg·L-1，每个处理50瓶，试验重复3次。比较添加物及其不同浓度对污染真菌和细菌的抑制作用和对不定芽生长的影响。

1.4 数据分析

2 结果与分析

表1 不同添加物对污染率的影响

在制作培养基的过程中，添加抑制物质控制污染的发生，结果见表1。由表1知接种7 d已经有直观的变化，污染均在4%以内，但“益培灵”20 mg·L-1的浓度下污染率能控制在3%以下。通过方差分析(见表2)发现接种7 d差异显著(sig<0.05)。

表2 接种7 d污染率方差分析表

表3 接种7 d污染率Duncan法多重比较

从表3多重比较表可知，对照和其他处理之间差异显著，其他处理中“益培灵”20 mg·L-1与另外三个处理差异显著。即在培养7 d时，添加杀菌剂对培养基有一定的效果，因此我们接着进行观察接种21 d(3周)的污染情况。

表4 接种21 d污染率方差分析表

接种21 d后通过直观调查可知，对照污染率在7%左右，使用控制污染物后，污染率有了不同程度的下降。在“益培灵”20 mg·L-1的浓度下污染率能控制在4.7%。通过方差分析(见表4)可知接种21 d各处理之间差异显著( sig<0.05)。

表5 接种21 d污染率Duncan法多重比较

从表5多重比较表可知，各处理之间差异显著，青霉素控制的污染有一定的下降，但下降程度极其有限，主要的原因是青霉素对真菌无效。只杀死了瓶中细菌。本试验中也发现在较高浓度的青霉素时不定芽的生长会受到一定的抑制。表现为茎尖弯曲，畸形等现象，新型抑菌剂“益培灵”的抑菌效果较为明显，“益培灵”20 mg·L-1效果最佳，对不定芽没有伤害。

3 结论与讨论

自由人槭‘秋焰’是适合北方大部分地区的园林绿化树种，具有适应性广、抗逆性强、树形优美，叶形清秀，叶色鲜红艳丽等特点，是观赏价值高的彩叶树种[2-4]。近年来自由人槭组培工厂化育苗技术的研究越来越迫切。在组织培养工厂化育苗中，控制成本是影响工厂化能否继续扩大再生产、甚至存活的根本。污染控制又是关键。污染会影响组培工厂化甚至整个组培进程，污染率越大，成本越大，有研究表明，随着污染率的增加，成本将大大增加，当污染率达到30%时，成本增加106%[5]。只有控制好污染，才能进行正常的组培工厂化育苗生产。为了弥补物理方法的不足，常常在培养基里添加抗生素等物质来防治污染发生。在万年青茎段培养中，在培养基中加氯霉素，使其污染率从原来的81.55%降低到15.62%[6]。黄小荣等发现在香水白掌的组织培养中添加青霉素可抑制细菌污染[7]。但是也有很多研究表明加入抗生素会影响外植体的生长，甚至抑制生长[8]。另外相反的研究是在有些培养中，细菌或霉菌污染存在的情况下，某些组织块会刺激的更加强大，微生物的存在已经导致了令人意想不到的效果[9]。

“益培灵”为植物组织培养专用防污染杀菌剂，具有易溶解于水，120 ℃加热2 h活性不下降的特性。我们通过试验发现，在其他控制污染基础上，添加“益培灵”后污染率下降，添加20 mg·L-1效果最好，培养21 d后污染率在4.5%。