毛细管区带电泳法检测硝苯地平

张 剑， 张 博， 韩 禄， 杨 阳， 刘春叶

(西安医学院药学院，陕西西安 710021)

硝苯地平是第一代二氢吡啶类钙通道阻滞药，其化学性质不稳定，遇光易分解。在临床应用中，硝苯地平具有抑制钙离子内流作用，可增加冠脉血流量，降低外周血管阻力。在心血管疾病方面，主要用于治疗高血压。此外，硝苯地平还可用于治疗稳定型和变异型心绞痛、晕动病、偏头痛、抑制癌症的扩散等。同时，硝苯地平具有作用快而强、疗效确切、毒副作用小等特点[1 - 2]。常用硝苯地平含量的测定方法有：铈量法[3]、紫外-可见分光光度法[4]、高效液相色谱法[5 - 7]等。此外，还有文献报道使用活化玻碳电极电化学法[8]、流动注射-串联质谱法[9]、液相色谱-质谱法[10]等方法测定硝苯地平含量。

毛细管电泳法具有简便、快速、高效、样品用量少、分析成本低，近年来发展迅速，已被广泛应用于药物含量测定。目前，尚未有人采用毛细管区带电泳法(CZE)测定硝苯地平含量。本实验拟建立CZE法测定硝苯地平含量的分析方法，希望可以对其他药物含量测定新方法的建立提供参考[11 - 12]。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

BeckmanP/ACEMDQ毛细管电泳仪(贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司北京分公司)，配二极管阵列检测器(DAD)；熔融石英毛细管(60 cm×50 μm i.d.,有效长度为50 cm；河北永年锐沣色谱器件有限公司)；PB-10型pH计(德国，赛多利斯股份有限公司)；UV-2102 PCS型紫外-可见分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)。

硝苯地平对照品(中国药品生物制品检定所，约100 mg)；NaH2PO4(≥99.0%)，Na2HPO4(≥99.0)(天津市红岩化学试剂厂)；其余试剂均为分析纯。实验用水为去离子水。样品溶液及缓冲溶液使用前均用0.45 μm滤膜过滤。

硝苯地平缓释片分别购自陕西步长高新制药有限公司，南京白敬宇制药有限公司，山西云鹏制药有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1毛细管的预处理及平衡新毛细管在使用前分别用水、1 mol/L NaOH溶液、水、1 mol/L HCl、水依次冲洗10、30、15、30、15 min。为了确保实验的重现性，每两次运行之间依次用水、0.1 mol/L NaOH溶液、水、缓冲溶液各冲洗5、5、5、3 min。运行缓冲溶液为20 mmol/L磷酸盐溶液(pH=8.0)，电动进样3.45 kPa×5 s，分离电压20.0 kV，检测波长254 nm。

1.2.2实际样品中硝苯地平的含量测定(1)CZE法测定硝苯地平含量:取4个不同批号(批号分别为：C130104、120101、F160910、160302)的硝苯地平片剂各10片，称量后计算平均片重，分别研磨后，各称取硝苯地平粉末2 mg。制备硝苯地平供试品溶液，每个供试品溶液配制好后用0.45 μm的微孔滤膜过滤，进行电泳分离，重复3次，记录峰面积平均值，代入标准曲线计算其浓度，进一步得到进样硝苯地平的质量，根据硝苯地平的平均片重可计算出每片药物中含有硝苯地平的质量。(2)紫外-可见分光光度法测定硝苯地平含量：根据《中国药典》二部(2005版)的方法，取硝苯地平片剂20片，称量后研磨，称取硝苯地平粉末适量(大概相当于含有硝苯地平30 mg)，用三氯甲烷溶解，溶解后用无水乙醇定容，取滤液5 mL定容至50 mL容量瓶中，在333 nm波长处测定溶液的吸光度，依据公式[13]计算硝苯地平含量。

2 结果与讨论

2.1 工作曲线

在1.2.1电泳条件下，硝苯地平对照品溶液与供试品溶液的电泳图谱如图1所示。可以看出，硝苯地平出峰时间约为4.8 min，其理论塔板数分别为21654、17339。在此条件下硝苯地平分离效率较好，可保证整个实验稳定运行。

图1 硝苯地平标准品(A)与供试品(B)电泳谱图Fig.1 Electropherograms of nifedipine standard(A) and nifedipine sample(B)

配制系列硝苯地平标准溶液，按优化后CZE条件测定，以硝苯地平的峰面积为纵坐标(y)，其浓度(x)为横坐标进行线性拟合，得回归方程:y=55633x+1019.4，相关系数r=0.9998(n=5)。硝苯地平溶液浓度在0.03～0.11 mg/mL范围内线性关系良好。

2.2 加标回收率

精确吸取已知浓度的硝苯地平溶液9份，每份约相当于硝苯地平0.1118 mg，分别准确加入硝苯地平对照品储备液(质量为0.0590、0.1118、0.1677 mg(各3份))，制成低、中、高3种加标浓度的溶液。测定结果如表1所示，平均回收率分别为105.84%、104.60%、98.04%，能保证实验的准确性。

2.3 精密度考察

准确吸取对照品储备液70 μL，连续进行6次测定，计算峰面积的相对标准偏差(RSD)，得日内峰面积RSD值为2.1%(n=6)；每天按照上述电泳条件运行3次，平行实验5 d，得日间峰面积的RSD值为1.4%(n=5)。表明该方法的精密度较高，重现性良好。

2.4 重复性考察

将批号为C130104的硝苯地平片剂研磨，研细后称取2 mg，平行配制5份供试品溶液进行测定，计算峰面积RSD值。实验结果表明峰面积的RSD值为4.3%(n=5)，方法重复性良好。

表1 硝苯地平加样回收率实验

2.5 稳定性考察

称取批号为C130104的硝苯地平，配制供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h条件下进行测定，计算得峰面积RSD值为5.5%(n=5)，表明硝苯地平供试品在8 h内稳定性较好。此外，实验中所配制的硝苯地平对照品储备液应置于棕色瓶中，并置于冰箱中保存，以免其见光分解。

2.6 实际样品含量测定

硝苯地平CZE法含量测定结果见表2。结果显示，批号为C130104、F160910、160302的硝苯地平片剂均符合标注规格，而批号为120101的硝苯地平含量低于标注规格。截至测试时间(2017年4月)，批号为120101的硝苯地平片剂于2013年已经过期，批号为C130104的硝苯地平片剂于2016年过期。可见，随着硝苯地平片剂存放时间增加，硝苯地平的含量也会随之呈现下降趋势；同时，实验也对此4个批号的硝苯地平按照《中国药典》二部(2005版)方法进行了测定(表2)。结果显示，4个批号的硝苯地平含量均符合标注规格，两种测量方法相比较，测定结果差值范围在0.06～0.479 mg(0.57%～4.78%)之间，差异性较小。因此本文所建立的CZE测定新方法，可作为一种硝苯地平片剂质量控制的有效方法。

表2 硝苯地平含量测定结果

3 结论

本文建立了一种测定硝苯地平含量的毛细管区带电泳法，采用该方法对4个不同批号的硝苯地平片剂进行含量测定，其中有3个批号的硝苯地平片剂符合标注规格，而不符合标注规格的硝苯地平片剂过期时间较长。通过比较可以看出，硝苯地平药物的存放时间越长会使其含量减少，同时该实验所建立的毛细管电泳测定新方法与药典的紫外-可见分光光度法的测定结果差异较小(0.57%～4.78%)，说明毛细管区带电泳法可作为一种硝苯地平片剂质量控制的有效方法。