miRNA-21在宫颈癌患者组织中的表达及其与临床病理特征的关系

李新 董立新

【摘要】目的：探讨宫颈癌患者miRNA-21组织表达情况及其同临床病理特征的联系。方法：选取41例宫颈癌病患为研究对象，取得患者肿瘤组织及临近非肿瘤组织标本，采用定量PCR分析的方式，测定样品中miR-21-3P、miR-21-5P表达情况及同患者临床病理特征的联系。结果：同临近非肿瘤组织对比，宫颈癌组织样本中的miR-21-3P、miR-21-5P水平表达高（P<0.05）;宫颈癌病患中miRNA-21表达病理因素包括肿瘤大小及淋巴结转移。结论：宫颈癌病患中，miRNA-21表达明显上调，且与肿瘤大小及淋巴结转移，因此可将miRNA-21作为检测宫颈癌患者预后的重要标志物。

【关键词】miRNA-21;宫颈癌;临床病理特征

【中图分类号】R181.3+2【文献标志码】A【文章编号】1005-0019（2019）02-075-02

宫颈癌是女性群体中常见的恶性肿瘤疾病，疾病的发生同乳头状瘤病毒的感染存在密切的联系[1]。从关于宫颈癌的研究中我们可发现，患者机体中的染色体发生突变以及单核苷酸多态性会引起宫颈上皮细胞恶性病变，而借助小RNAs（miRNA）这一调节基因可判定宫颈癌的具体病变情况。在宫颈癌患者中，miRNA-21表达明显更高，针对这一情况，很多的学者认为miRNA-21对宫颈癌发生及发展有促进作用[2]。本次研究中，探讨了宫颈癌患者组织中的miRNA-21表达情况，并探讨其与宫颈癌患者临床病理特征间的关系，旨在为宫颈癌患者的早期诊治提供依据和重要帮助。

1资料与方法

1.1一般资料

选取本院2017年3月-2018年6月收治的41例宫颈癌病患为研究对象，所有患者均行手术切除，且术前均未行放化疗。41例患者年龄范围在35～71岁之间，平均年龄54.3岁;肿瘤大小2～6cm，平均大小3.5cm。在术中均采集患者肿瘤病灶及邻近的非肿瘤组织标本，将采集到的标本放置到液氮中进行保存。

1.2方法

1.2.1进行RNA提取

用Trizol试剂提取肿瘤组织和临近非肿瘤组织样品的RNA，同时借助紫外分光光度計对组织器官中的miRNAs的含量与纯度进行测定。

1.2.2RNA逆转录及定量PCR检测

采用逆转录法、定量PCR检测获取对的宫颈癌样本及临近非肿瘤组织中的miRNA表达情况，具体miRNA测定内容包括miR-21-3P及miR-21-5P。应用miR-21-3P、miR-21-5P下游引物转录，各转录体系中均含有500ng的RNA产物。定量PCR检测中，检测反应条件是在95℃的温箱中预变性10min、95℃变性10s、60℃变性30s，持持续40个循环时间[3]。各个样品重复三孔，之后应用定量PCR仪行定量扩增。针对扩增的产物，借助溶解曲线鉴定产物的特异性，鉴定的温度设定为60℃～95℃，应用U6、RNA作为参照评估标准，评定基因的表达情况，对miRNA-21、U6扩增Ct比值进行计算。

针对miRNA-21的表达水平，应用△Ct、2-△△Ct分析，△Ct计算样品Ct值同内参Ct值的差值，具体的计算公式为△Ct=CtmiRNA-CtU6;△△Ct的计算公式为：△△Ct=△Ct肿瘤样品-△Ct临近非肿瘤样品。针对本研究所选RQ，计算公式为：RQ=2-△Ct，这主要显示miRNA在肿瘤组织与临近非肿瘤组织的比值大小，若计算出RQ的值小于1提示肿瘤组织中的miRNA表达下降，反之升高。

1.3统计学方法

使用SPSS 20.0软件做统计学分析，计量资料用t检验，P<0.05为差异显著。

2结果

2.1miRNA表达的定量测定

41例样品中测得38例miRNA-21高表达，宫颈癌标本同临近非肿瘤组织标本的表达差异显著（P<0.05），见表1。

2.2miRNA-21同宫颈癌病理学特征的关系

对病患的一般资料进行分析，显示宫颈癌患者的miRNA-21表达情况肿瘤大小、淋巴结转移有显著联系，而与患者年龄、肿瘤分化情况无明显联系。

3讨论

宫颈癌是临床中常见的恶性肿瘤疾病，而在最近几年的临床研究中发现，miRNA常常作为原癌基因或抑癌基因参与肿瘤的发生发展。而关于miRNA同宫颈癌间的关系，多个研究提示可将miRNA作为诊断及治疗疾病的重要标志产物。

为了进一步的了解miRNA-21在诊治宫颈癌中的价值，在本次研究中，应用定量PCR检测宫颈癌病患中miR-21-3P和miR-21-5P的表达情况，同时对miRNA-21的表达水平进行分析，探讨其与患者临床病理特征的关系。本研究中采集了宫颈癌病患肿瘤组织及非肿瘤组织的样本进行检测，结果显示肿瘤组织样本中miR-21-3P、miR-21-5P显著高表达，通过进一步对患者病理学特征进行分析，提示肿瘤组织中miRNA-21高表达同肿瘤大小、淋巴结转移有密切的联系，这一结果同韩英等[6]的研究结果相一致。

综上所述，在宫颈癌患者肿瘤组织中miRNA-21的表达明显上调，且其表达情况同肿瘤大小、淋巴结转移状况有着紧密联系，提示临床中可以将miRNA-21作为评价宫颈癌患者诊治和预后的重要标志物。

参考文献

[1]杨朝晖， 章辉， 顾华敏， 等. 宫颈癌组织中miR-21和Stat3的表达及相关性研究[J]. 浙江医学， 2017， 39（2）：93-96.

[2]赵芳， 王静， 余建军， 等. microRNA表达与乳腺癌患者临床特征的关系[J]. 中国肿瘤， 2016， 25（12）：1013-1017.

[3]王佳佳. microRNA-21、microRNA-205在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[D]. 中国科学院心理研究所， 2012.

[4]沈蓉， 高建武， 李妍雨，等. 宫颈癌组织中miRNA-21含量检测及其下游靶分子的初步分析[J]. 海南医学院学报， 2015， 21（11）：1536-1538.

[5]冯磊， 常春红， 管晓卿， 等. 宫颈癌患者血浆miRNA-10b的表达及其临床意义[J]. 现代检验医学杂志， 2018，23（1）.

[6]韩英， 张蓉， 俞丹华， 等. miRNA-21在子宫颈鳞癌组织中表达的初步研究[J]. 中国妇产科临床杂志， 2015，14（2）：179-180.