胃癌原发灶活检标本与淋巴结转移内HER2状态及临床病理相关性分析

张晓昉

随着社会和医疗水平的不断发展，近些年来胃癌发病率有降低的趋势，但其死亡率仍位于恶性肿瘤的第一位，是癌性致死亡的主要因素[1-2]。手术治疗是胃癌诊治主要方法，前期胃癌术后患者五年存活率可达到94%以上，但临床较多的却是进展期胃癌，借助化疗或手术患者预后效果较差。在研究期发病机制基础上寻求分子水平治疗办法是目前研究重点，人类表皮生长的因子受体2(HER2)是位于染色体17q21内跨膜受体样蛋白，其在不同肿瘤组织内均有表达，HER2在胃癌诊疗内重要性逐步显现。当前一般以患者胃癌原发灶的组织内HER2状态为基准[3]，患者在确诊时已处于胃癌晚期，此时已无法进行肿瘤切除术，在晚期患者中筛选HER2的阳性患者，使其获得HER2靶向治疗有十分重要意义。因此，本文着重研究原发灶HER2状态和胃癌临床病例特征间联系，为临床患者治疗提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 病例选择

回顾性分析2014年4月至2016年4月在青海仁济医院接受治疗的胃癌患者，依据胃镜活检和手术标本病检的结果，选取经病理组织学确诊为胃腺癌患者的石蜡标本144例。其中男性82例，女性62例，年龄46～83岁，平均年龄(57.92±11.2)岁，远端胃癌患者79例，患者肿瘤直径>5cm 66例，组织学分级中低级70例，高级74例，患者中淋巴结转移102例，病理分期Ⅰ期15例，Ⅱ期42例，Ⅲ期74例，Ⅳ期13例，Lauren分型中弥漫型/其他有99例，肠型有45例。

1.2 主要试剂

生物素化二抗工作液(由中衫金桥生物制品公司生产)、鼠抗人的HER2单克隆的抗体(由ORIGENE公司生产)、辣根酶标记链霉卵白素的工作液(由中衫金桥生物制品公司生产)、DAB的显色试剂盒(由中衫金桥生物制品公司生产)、封闭用正常山羊的血清工作液(由中衫金桥生物制品公司生产)、FISH的探针、抗原的修复液(由中衫金桥生物制品公司生产)、乙醇和二甲苯等。

1.3 实验方法

本研究HER2检验过程严格依据胃癌HER-2的检测指南组所编写的实践指南来进行[4]。

1.3.1 免疫组化染色(IHC)和结果判定[5]研究标本在离开人体内的35 min内标记、切开等初步的处理。固定液为8%中性的福尔马林，浸泡所固定的组织。样本都已由病检部门HE染色并验证是胃癌，从中选择手术切除肿瘤的原发灶标本和胃镜活检的标本各7例，淋巴转移的患者取转移的淋巴组织。手术和活检的标本IHC的判定依据2011年发布《胃癌HER-2的检测指南》[6]来进行。

1.3.2 荧光原位杂交(FISH)和结果判定[7]对IHC检测淋巴转移灶与原发灶不一致患者进行FISH检测，在一致患者中随机选取IHC1+、IHC2+和IHC3+各10例进行FISH的检测。淋巴结转移灶、活检标本和手术标本内IHC2+相关检查都采用一致的准则：在扩增度最强部位，针对大于21个连续的肿瘤细胞核来进行两色信号计数与比值的计算：①HER2/CEP17<1.9时，判定是扩增实验的阴性；②HER2/CEP17>2.3时，判定是扩增实验的阳性；③HER2/CEP17在1.9与2.3间，则再次进行计数。

1.3.3 HER2的状态判定[8]IHC 1+与IHC 0判定是HER2阴性；IHC 3+判定是HER2阳性； IHC 2+的患者需要做临床相关检测，再判定其阴阳性。

1.4 统计学方法

研究数据应用SAS 9.5软件来进行分析，率对比使用McNemar χ2来检验、持续校正χ2的检测与Fisher精确的检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 原发灶与胃镜活检标本HER2状态一致性情况对比

所有标本中，胃镜活检的HER阳性表达率是23.61%，手术标本是13.89%，两者HER-2状态的一致率达86.11%，阴性预测率为83.06%，阳性预测率为65.00%，详见表1。

表1 胃镜活检的标本HER2的状态与原发灶对比/例

2.2 淋巴结转移灶的HER2状态与原发灶一致性情况对比

102例淋巴结转移患者内有30例是原发灶HER2阳性，其阳性表达率是29.41%，转移灶HER2阳性是25例，阳性表达率是24.51%，一致性为75.49%，有25例不一致的患者，阳性表达率为24.51%，见表2。

表2 淋巴结转移灶的HER2状态与原发灶对比/例

2.3 HER-2状态与胃癌病理特征的关系

患者性别、年龄、肿瘤大小和肿瘤位置与HER2状态无关(P>0.05)，患者组织学分级、淋巴结转移、Lauren分型、TNM分期和浸润深度与HER2状态有关(P<0.05)，见表3。

表3 HER-2状态与胃癌病理特征的关系/例

3 讨论

HER2为原癌基因，一般在人类的胎儿期进行表达，在成人组织内低水平的表达，其主要在膀胱癌、胃癌和乳腺癌等上皮的组织肿瘤内表达，在造血系统和神经来源的肿瘤内没有表达[9]。HER2的表达蛋白是跨膜糖蛋白，有络氨酸激酶活性，主要作用在细胞DNA的合成前期和合成期中细胞周期素E上，能够影响到细胞的分化方向和细胞的生长。在细胞二聚化的进程中，HER3和HER2非对成型异源的二聚化比例很高，它能够激活细胞的信号传输，HER2还可以通过自身络氨酸磷酸化的路径来激活细胞信号的传输，从而对细胞生长的过程产生影响[10-13]。

本文研究中胃镜活检标本的HER状态和胃癌的原发灶一致性是86.11%，淋巴转移灶的HER2状态和原发灶一致性是75.49%，两者差异有统计学意义，说明胃癌原发灶和淋巴转移灶的HER2的状态一致性较好，在淋巴的转移灶或者胃镜的活检标本对HER2的状态进行检测可以预测到胃癌原发灶内HER2的状态，特别是患者没有办法得到原发灶病理的结论时，对转移性胃癌患者的靶向治疗提供帮助。虽然淋巴的转移灶和原发灶检测的HER2结果的不同地方没有明显的差异，但在临床的判断中，不能以淋巴的转移灶和活检的标本来替代原发灶HER2的检查结果[14-15]。本文研究中，HER2表达胃癌原发灶和相应淋巴结转移灶具有一致性，但是有学者指出远处转移灶与原发灶的不一致率显著高于区域淋巴结转移灶和原发灶的不一致率。造成这种差异的因素可能是肿瘤进展过程中亚克窿细胞的选择，肿瘤的异质性等，而不是检测方法与结果判读的差异。如果转移性肿瘤发生阳性或者阴性转变，将直接导致治疗方式的彻底改变。机体内HER2在正常情况下处于非激活的状态，当HER2受到某些致癌因素作用以后，其结构或者表达失控而被激活，从而具有肿瘤转化的活性，可促使细胞发生恶性的转化。本文研究显示，患者组织学的分级、淋巴转移、Lauren分型、TNM分期和浸润的深度和HER2的状态对比差异有统计学意义，说明胃癌的产生、进展及转移与HER2有密切联系。

综上所述，在淋巴转移灶中对HER2进行检测可以较好地预测胃癌原发灶HER2的状态；患者的性别、年龄、肿瘤的大小和肿瘤的位置与手术标本HER2的状态没有关联，患者组织学的分级、淋巴转移、Lauren分型、TNM分期和浸润的深度和HER2的状态有关联。