Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉与胃癌中的表达意义

周洪涛 李山林 刘学进

胃癌是当前常见的消化系统恶性肿瘤，我国胃癌发病率的增速是世界平均水平的2倍左右，当前每年新发病例接近50万，严重威胁着居民的健康[1-2]。腺瘤性息肉是指胃黏膜局限性良性上皮或间质成分增生形成的病变，通常被认为是胃癌的癌前病变。流行病学调查显示腺瘤性息肉的癌变率比较高，在胃组织的癌变率在50.0%以上[3-4]。腺瘤性息肉与胃癌患者的早期诊断率较低，患者确诊时大多数已经属于中晚期，预后比较差[5]。腺瘤性息肉与胃癌的影像学检查有一定的误差性，病理学检查也存在检查的创伤性、取样部位的误差大、阅片者自身偏倚等不足[6]。随着现代分子生物学技术、现代免疫组织化学的不断发展，通过检测肿瘤细胞特异抗原等来诊断蛋白水平的变化已成为了可能。cyclin D1的扩增和过表达与人体多种肿瘤有关，cyclin D1的过度表达促使细胞过度增殖继而发生恶变[7-8]。TNFR在多种肿瘤的发生、发展中起到了重要作用，TNFR1可促进IL-6的表达、激活NF-KB信号通路，促进成纤维细胞增殖以及细胞程序化死亡，从而参与调控多种肿瘤血管发生相关基因的转录[9-10]。本研究收集相关胃癌病例，对患者的临床特征进行了回顾性研究，并用免疫组织化学法检测Cyclin D1及TNFR1的表达水平，探讨Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉与胃癌中的表达意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

采用回顾性、随机抽样研究方法，选择2011年12月到2016年8月在我院进行诊治的120例胃癌患者与120例腺瘤性息肉患者的组织标本作为研究对象，纳入标准：患者临床病例资料齐全；原发于胃部疾病，非其他部位转移或复发的胃部疾病病例；所有病例均为初次治疗或外院术后治疗不彻底3个月以内；研究得到了医院伦理委员会的批准。排除标准：组织病理学不明确的病例；未行手术或活检病例；妊娠孕妇与哺乳期妇女；精神疾病患者。

1.2 免疫组化分析

所有标本都给予免疫组化分析，采用 Envision法染色两步法，严格按照试剂盒说明书进行操作。兔抗人Cyclin D1、TNFR1多克隆抗体都由英国Abcam公司提供，工作浓度为1∶100。快速免疫组化检测试剂盒由福州迈新生物技术开发有限公司提供，严格按照试剂盒说明书进行操作；英国Abcam公司提供Breast carcinoma作为阳性质控片。95%乙醇、85%乙醇、苏木精、PBS 缓冲液、二甲苯、无水乙醇、蒸馏水、内源性过氧化物酶阻断剂、中性树胶等由本院保存。

由两名高年资病理医师采用双盲法进行染色结果判断，TNFR1阳性表达为细胞膜和细胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒，cyclin D1阳性染色为肿瘤细胞的胞核出现棕黄色颗粒。双盲法随机抽取有代表性的10个连续的高倍视野(×400倍)，每个视野计数100个细胞，TNFR1、cyclin D1阳性染色的肿瘤细胞占所有肿瘤细胞的比例≥20%被视为阳性表达。

1.3 调查分析

选择Microsoft Excel 2010软件收集2组的临床资料信息，进一步调阅胃癌患者的病史，通过查阅随访资料和电话等方式对患者进行随访，记录内容包括患者患病年龄、联系人及联系电话、性别、通讯地址、病理诊断、临床诊断等。

1.4 统计方法

选择SPSS 20.00软件进行分析，TNFR1、cyclin D1腺瘤性息肉与胃癌组织间表达差异的比较采用卡方分析检验，TNFR1、cyclin D1和患者临床病理资料间的关系采用卡方分析检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 一般资料对比

在120例胃癌患者中，男性68例，女性52例；年龄35～83岁，平均年龄(54.22±12.49)岁；Dukes分期：A期+B期48例，C期+D期72例；淋巴结转移：有60例，无60例；分化程度：高分化60例，中分化40例，低分化20例；黏液癌：有20例，无100例；浸润深度：<肌层40例，≥肌层80例。

在120例腺瘤性息肉患者中，男性65例，女性55例；年龄32～84岁，平均年龄(54.11±9.78)岁。2组性别、年龄对比无显著差异(P>0.05)。

2.2 Cyclin D1及TNFR1表达对比

胃癌组织的Cyclin D1及TNFR1阳性表达率分别为75.0%和65.0%，腺瘤性息肉组织分别为3.3%和15.0%，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 胃癌与腺瘤性息肉组织的Cyclin D1及TNFR1阳性表达率对比(例，%)

2.3 Cyclin D1及TNFR1表达的相关性

120例胃癌组织中有75例Cyclin D1及TNFR1蛋白的表达同时呈阳性，腺瘤性息肉组织中只有3例同时呈阳性，Spearman等级相关分析显示Cyclin D1及TNFR1蛋白在胃癌中的表达呈正相关(γ=0.563,P=0.002)。

2.4 胃癌组织Cyclin D1及TNFR1表达与临床特征的相关性

Cyclin D1及TNFR1在胃癌组织中的阳性率与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、黏液癌、Dukes分期呈正相关(P<0.05)，与肿瘤的分化程度呈负相关(P<0.05)。见表2。

表2 胃癌组织Cyclin D1、TNFR1阳性表达率与临床特征的相关性(例，%)

3 讨论

胃癌的发生与发展是由多因子参与调控的复杂过程，早期症状不明显，多由腺瘤性息肉发展而来，病情发现时多为癌症中晚期，因此死亡率一直居高不下[11-12]。

目前胃癌与腺瘤性息肉发病机理尚未完全了解，与其它肿瘤一样，胃癌与腺瘤性息肉的发生归因于基因与环境的相互作用，正是这些基因多态影响或“修饰”不同个体对环境因素作用的敏感性[13]。不同基因的表达在息肉形成、癌变过程中的作用及其胃癌发生、发展之间的关系当前被广泛深入分析与研究[14]。

细胞周期调控紊乱是导致肿瘤发生的重要环节，Cyclin D1是细胞周期调控因子，是癌基因，有正性调节作用[15]。有研究表明cyclin D1随着胃黏膜病理变化加重，Cyclin D1阳性表达率显著增加[16]。TNFR1是分子量为55 kD的Ⅰ型跨膜糖蛋白，广泛分布于正常细胞膜与肿瘤细胞表面。TNFR1在引起细胞凋亡、抗肿瘤和抗病毒感染中发挥重要作用，也参与自身免疫性疾病[17]。本研究显示胃癌组织的Cyclin D1及TNFR1阳性表达率分别为75.0%和65.0%，腺瘤性息肉组织分别为3.3%和15.0%，对比有显著性差异(P<0.05)；Spearman等级相关分析显示Cyclin D1及TNFR1蛋白在胃癌中的表达呈正相关(γ=0.563,P=0.002)。相关研究也表明TNFR1也可以介导细胞活化信号和增殖信号，诱导一氧化氮合成酶和白介素-8的活性，活化核转录因子和激活蛋白[18]。cyclin D1基因的扩增是重要的胃癌促发因素，可能发生在胃黏膜上皮癌变的早期阶段，可作为一个潜在的胃癌早期诊断分子标志物[19]。

生长在人体黏膜表面上的赘生物统称为息肉，也是指人体组织表面长出的多余肿物。腺瘤性息肉是胃癌的癌前状态之一，也决定着胃癌的发生与发展。cyclin D1基因既是细胞周期G1/S期转换的正向调节因子，也是G1期细胞增殖信号的关键蛋白[20]。临床研究表明在头颈部鳞状细胞癌、结直肠癌、肺癌、肝细胞癌、乳腺癌、食管癌等多种恶性肿瘤中存在cyclin D1基因扩增、重排及过表达[21-22]。

TNFR1引起的作用比较广，包括杀细胞活性、抗病毒活性等。本研究显示Cyclin D1及TNFR1在胃癌组织中的阳性率与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、黏液癌、Dukes分期呈正相关(P<0.05)，与肿瘤的分化程度呈负相关(P<0.05)。有研究表明在胃癌的不同分化程度上，Cyclin D1及TNFR1表达的差异均无统计学意义，但是Cyclin D1及TNFR1的表达呈正相关，提示两者在腺瘤性息肉与胃癌的发生中可能具有协同作用[23]。然而本研究也存在缺陷，没有在腺瘤性息肉与胃癌组织中针对Cyclin D1及TNFR1做动态的检测，将在下一步进行深入分析。

总之，Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉与胃癌中都呈现过表达状况，与腺瘤性息肉与胃癌的发生发展密切相关，两者的早期检测可为进一步提高胃癌的诊治水平提供思路。