温阳解郁颗粒薄层鉴别方法学研究

孟 霜，冯振宇，常剑敏，周晓荣，赵 杰

（1.山西中医学院中西医结合医院，山西 太原030013； 2.山西中医药大学，山西 晋中030619）

温阳解郁颗粒为我院制剂，是由桂枝、附子、乌梅、甘草、生姜、大枣等组成，具有温肾助阳、开郁安神等功效。方中附子辛热，能补坎中真阳，真阳为君火之种，补真火即是补君火也，同时上助心阳，中温脾阳，桂枝、生姜通心阳，疏肝气，温肝阳，补肝用；炙甘草、大枣甘缓其中，合辛甘化阳、酸甘化阴之意，诸药合用，复肾阳、补肝阳、暖心阳、运脾阳，收纳微阳于肾，伏虚火于中，以达治疗抑郁之效。为了更好地控制温阳解郁颗粒的质量，本文对制剂中的桂枝、甘草、附子的薄层鉴别进行了方法学研究，建立了薄层鉴别方法，进而保障临床用药的有效性和安全性。

1 实验材料

CAMAG TLC VISUALIZER 全自动成像仪（瑞士）；CAMAG LINOMAT 5 半自动薄层点样仪（瑞士）；LRH-250-YG 药物稳定性试验箱（韶关市泰宏医疗器械有限公司）；BSA224S-CW 万分之一电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；BPX-162 型电热恒温培养箱（Shanghai Boxun Industry& Commerce Co.，Medical Equipment Factory）；KQ-800KDE 型高功率数控超声波清洗器（220W，昆山市超声仪器有限公司）；HHS 型电热恒温水浴锅（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；BCD-251WBCY 恒温制冷箱；薄层层析硅胶G 板（青岛海洋化工厂、青岛永海硅胶有限公司）。试验中所用试剂均为分析纯，桂枝对照药材（批号：121191-201605），甘草对照药材（批号：120904-201620），黄芪甲苷（批号：110781-200613）以上均购自中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1 桂枝的薄层鉴别

2.1.1 供试品溶液制备 取本品3 g，研细，加乙酸乙酯20 mL，加热回流提取30 min，冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL 使溶解，作为供试品溶液［1］。

2.1.2 对照药材溶液的制备 取桂枝对照药材1 g，按“2.1.1”项下供试品溶液的制备方法，制成对照药材溶液。

2.1.3 阴性对照液的制备 取桂枝的阴性样品3 g，按“2.1.1”项下供试品溶液的制备方法，制成桂枝阴性对照溶液。

2.1.4 专属性实验 照薄层色谱法（《中国药典》2015 版4 部0502 法）［2］实验，吸取上述3 种溶液各8 μL，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水（5∶3∶0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。结果见图1。

图1 专属性试验薄层色谱图

2.1.5 薄层方法学验证 影响薄层鉴别效果的因素较多，如薄层板厂家、温度、湿度、点样效果等等。因此，本文对桂枝的薄层鉴别进行了方法学考察。

2.1.5.1 不同薄层板的考察［3］选取青岛海洋化工厂硅胶G 板和青岛永海硅胶G 板，分别按“2.1.4”项下方法进行实验。结果表明两种薄层层析硅胶板均可以达到较好的分离效果。结果见图2。

图2 不同薄层板的薄层色谱图

2.1.5.2 不同温度的考察［4］取点样后的青岛海洋化工厂所制的薄层硅胶G 板，分别在4 ℃和40 ℃的温度环境下展开，结果表明该方法在4 ℃、40 ℃条件下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点。结果见图3。

图3 不同温度的薄层色谱图

2.1.5.3 不同相对湿度的考察［5］取点样后的青岛海洋化工厂所制的薄层硅胶G 板，分别在相对湿度为45%和75%的条件下展开，结果表明在45%、75%湿度条件下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点。结果见图4。

图4 不同相对湿度的薄层色谱图

2.2 甘草的薄层鉴别方法

2.2.1 供试品溶液制备［6］取本品4 g，研细，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL 使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2 次，每次30 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照药材溶液制备 取甘草对照药材1 g，按“2.2.1”项下供试品溶液的制备方法，制成对照药材溶液。

2.2.3 阴性对照溶液制备 取阴性样品4 g，按“2.2.1”项下供试品溶液的制备方法制备，制成甘草阴性对照溶液。

2.2.4 专属性实验照薄层色谱法（《中国药 典》2015 版 4 部0502 法）实验，吸取上述3 种溶液各3 μL，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）的下层溶液为展开剂，分别点于同一硅胶G 薄层板上，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（366 nm）下检视。供试品色谱中，在对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。结果见图5。

图5 专属性试验薄层色谱图

2.2.5 薄层方法学验证

2.2.5.1 不同薄层板的考察 选取青岛海洋化工厂硅胶G 板和青岛永海硅胶G 板，分别按照“2.2.4”项下方法进行试验。结果表明两种薄层硅胶板均可以达到较好的分离效果。结果见图6。

图6 不同薄层板的薄层色谱图

2.2.5.2 不同温度的考察 取点样后的青岛海洋化工厂所制的薄层硅胶G 板，分别在4 ℃和40 ℃的温度环境下展开，结果表明该方法在4 ℃、40 ℃条件下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图7。

图7 不同温度的薄层色谱图

2.2.5.3 不同相对湿度的考察 取点样后的青岛海洋化工厂所制的薄层硅胶G 板，分别在相对湿度为45%和75%的条件下展开，结果表明在相对湿度为45%、75%湿度条件下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图8。

图8 不同相对湿度的薄层色谱图

2.3 附子的薄层鉴别方法

2.3.1 供试品溶液制备［7］取本品内容物8 g，研细，加入3 mL 氨试液使其润湿，再加乙醚30 mL，超声处理（功率200 W，频率40 kHz）30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1 mL 使溶解，作为供试品溶液。

2.3.2 对照药材溶液制备 取附子对照药材1 g，按“2.3.1”项下供试品溶液制备方法，制成对照药材溶液。

2.3.3 阴性对照溶液制备 另取附子阴性样品8 g，按“2.3.1”项下供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。

2.3.4 专属性实验 照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部0502）实验，吸取上述3 种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇（6.4∶3.6∶1）为展开剂，置氨蒸气饱和20 min 的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，立刻在日光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图9。

图9 附子专属性试验薄层色谱图

2.3.5 薄层方法学验证

2.3.5.1 不同薄层硅胶板的考察 选取青岛海洋化工厂硅胶G 板和青岛永海硅胶G 板，分别按照“2.3.4”项下方法进行实验。结果表明两种薄层硅胶板均可以达到较好的分离效果。结果见图10。

图10 不同薄层硅胶板色谱图

2.3.5.2 不同温度的考察 取点样后的青岛海洋化工厂所制的薄层硅胶G 板，分别在4 ℃和40 ℃的温度环境下展开，结果表明该方法在4 ℃、40℃温度条件下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图11。

图11 不同温度的薄层色谱图

2.3.5.3 不同相对湿度的考察 取点样后的青岛海洋化工厂所制的薄层硅胶G 板，分别在相对湿度为45%和75%的条件下展开，结果表明在相对湿度为45%、75%湿度条件下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图12。

图12 不同相对湿度的薄层色谱图

3 讨 论

经上述系统的方法验证考察，结果表明，两种不同薄层层析硅胶G 板对处方中桂枝、甘草、附子的薄层鉴别，均达到了较好的分离效果，在不同温度、湿度条件下，斑点分离效果较好，分离度符合要求，仅仅Rf 值有稍许变化，但不影响处方中桂枝、甘草、附子的薄层鉴别结果。

因此，认为本方法稳定性、耐用性良好。样品经过多次验证实验，表明该方法重现性良好，阴性对照无干扰，可以作为温阳解郁颗粒中桂枝、甘草、附子的薄层鉴别方法，为温阳解郁颗粒的质量控制提供必需的基础保障。