不同种类牛奶的致龋性研究

罗彦妮

九江学院附属口腔医院,江西省九江市 332000

龋病是口腔的常见病多发病，并已经成为严重危害人类健康及生活质量的疾病。牛奶在儿童成长过程中扮演着重要的一角，牛奶中有些成分产生一定的防龋作用，但牛奶含有乳糖，现已经报道了牛奶中含有的乳糖存在一种潜在的致龋性，虽然乳糖比蔗糖的致龋作用要小，但是最近一项体外研究表明，牛奶具有与单独乳糖相当的致龋水平，鉴于牛奶成分的复杂性，有可能推测其中一些成分的变化可能导致其致龋性[1]。尽管现在市面上有各种各样牛奶类型，但是关于每种牛奶的致龋效果或牛奶当中的成分和其致龋性如何变化的科学证据都很少，有关报道表示脂肪水平的变化也可能导致牛奶致龋性的变化，因为脂肪和脂肪酸具有一定的抗龋作用，对防龋效果会产生一定影响，但不同浓度脂肪的牛奶具体致龋效果如何大多是未知的[2]。因此，本研究选取2017年1—4月我院收治的45例正畸儿童口中被拔除的前磨牙100颗为研究对象，比较市售不同脂肪浓度的牛奶在离体牙齿模型中的致龋性，并评估其对变形链球菌生物膜的影响，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1—4月我院收治的45例正畸儿童口中被拔除的前磨牙100颗为研究对象。45例患儿中，男24例，女21例，年龄12～16岁，平均年龄(13±1.2)岁。将100颗前磨牙按照随机数字表法分为脱脂牛奶组、半脱脂牛奶组、全脂牛奶组、10%蔗糖添加牛奶组、0.9%氯化钠组共5组，每组20颗。患儿纳入标准：(1)儿童无龋齿；(2)家属具有较强的预防保健意识。排除标准：(1)患有口腔溃疡疾病的儿童；(2)患有心、肝、肾功能衰竭等疾病；(3)患有自闭症的儿童。

1.2 研究方法

1.2.1 实验材料：选用因正畸而拔除的健康前磨牙，无菌消毒玻璃器皿，培养皿，便携数字pH计(HI9126-02,Hanna仪器)耦合的微电极(HI 1083)恒温箱，脱脂牛奶、半脱脂牛奶和全脂牛奶各50ml，添加10%的蔗糖牛乳、0.9%的氯化钠溶液，次氯酸钠消毒液，环氧乙烷消毒平板，金刚石盘，抛光盘，片切机，离心机，24孔板等。

1.2.2 实验方法：使用牙釉质牙本质平板培养变形链球菌UA159的生物膜。每天将平板/生物膜暴露3次，以商业脱脂、半脱脂、全脂牛奶和10%蔗糖添加牛奶作为正面对照，以0.9%氯化钠作为负面对照，分析生物膜的细菌数量、生物量、蛋白质和多糖产量，通过表面显微硬度的损失和培养基pH值测量生物膜的酸性来评估板坯的脱矿值。

1.2.3 实验步骤：取牙齿片切成4mm×7mm×1mm的模型，再50g力下进行压痕，先用唾液浸泡形成生物膜，再放入变形链球菌培养，取牙釉质、牙本质，再放入牛奶液中浸泡，每次浸泡5min，再测定变形链球菌的数量，牙釉质的脱矿程度以及细菌数。具体步骤为：(1)板坯制备：牙齿储存好并用次氯酸钠消毒，用金刚石盘、片切机、抛光盘获得牙釉质、牙本质板(4mm×7mm×1mm)，初始SH通过3个相互间隔100μm的knop压痕，以50g的力在ve秒下测定，为了保持相同的初始SH，只有SH为(361.51±11.17)kg/mm的牙釉质和(58.04±6.24)kg/mm的牙本质才选用。测量板坯最终的SH值，以估计整个实验期间产生的脱矿量，SH的损失已被用广泛用作评估脱矿值的可靠方法。环氧乙烷消毒平板，再用超滤10.22微型混合人工唾液覆盖30min，以便在牙釉质上形成获得性薄膜利于细菌初始黏附。(2)生物膜变球练链菌在牙釉质平板上生长5d，并在牙本质的平板上生长4d，因为牙本质相对牙釉质更容易产生酸溶，出于这个原因，实验的长度，牙本质缩短了24h，较长的牙本质暴露时间会使得不能作为显微硬度评估。为了模拟儿童常见的牛奶摄入的时间模式，每天使用3次，上午8：30，中午12：30，下午4：30，每次使用时间为5min，培养基每天换2次，第1次处理上午8点前，第2次处理为下午5点，实验阶段后，将生物膜与平板分离，并分析细菌的干重，可溶性的多糖，不可溶性的胞内胞外多糖产生，再测定板坯中的SH与初始评估进行比较，以获得表面显微硬度损失百分比(%SHL),通过每天2次培养基的pH测量，评估生物膜的产酸性。

1.3 观察指标 在相同条件的前提下，通过对变形链球菌的培养，计算实验后牙釉质脱矿程度指数，测定变形链球菌生物膜ΔpH值(产酸水平)、变形链球菌生长情况(OD600)来分析脱脂牛奶、半脱脂牛奶和全脂牛奶三种不同种类牛奶致龋性。

2 结果

结果显示，各组均对牙釉质脱矿和变形链球菌产酸有不同程度的影响，从全脂组到半脱脂组，再到脱脂组、再到蔗糖组，牙釉质和牙本质脱矿程度指数逐渐升高，且均高于对照组，每组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。变形链球菌生物膜ΔpH值和OD600逐渐升高，且均高于对照组，每组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。具体见表1。

表1 牙釉质、牙本质脱矿程度指数、变形链球菌生物膜ΔpH值及其生长情况比较

3 讨论

根据我国2015年第四次口腔流行病学调查报告显示，12岁儿童恒牙龋病患病率为34.5%，比十年前上升了7.8个百分点，5岁儿童的乳牙龋的患病率为70.9%，比十年前升了5.8个百分点，其中农村地区高于城镇[3]。有报道指出，牛奶中的许多成分具有抗龋功能，包括钙、磷酸盐、脂肪、维生素、铁、硼化物、碘化物和酶,同样牛奶中白蛋白也具有抗龋作用[4]，这些蛋白质导致口腔生物膜内钙和磷酸盐增加，除白蛋白外，乳铁蛋白、溶菌酶和乳中存在的抗体也具有抗龋作用。

鉴于牛奶成分的复杂性，有可能推测其中一些成分的变化可能导致其致龋性。尽管现在市面上有各种各样牛奶类型，但是关于每种牛奶的致龋效果或牛奶当中的成分和其致龋性如何变化的科学证据都很少，有关报道表示脂肪水平的变化也可能导致牛奶致龋性的变化，因为脂肪和脂肪酸具有一定的抗龋作用，对防龋效果会产生一定影响[5-6]。

因此，本研究的目的是比较市售不同脂肪浓度的牛奶在离体牙齿模型中的致龋性，并评估其对变形链球菌生物膜的影响，结果显示，各组均对牙釉质脱矿和变形链球菌产酸有不同程度的影响，从全脂组到半脱脂组，再到脱脂组、再到蔗糖组，牙釉质和牙本质脱矿程度指数逐渐升高，且均高于对照组，每组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。变形链球菌生物膜ΔpH值和OD600逐渐升高，且均高于对照组，每组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。尽管牛奶中有些成分产生一定的防龋作用，但牛奶含有乳糖，现已经报道了牛奶中含有的乳糖存在一种潜在的致龋性牛奶效应，虽然乳糖比蔗糖的致龋作用要小，但是一些体外研究表明[7-8]，牛奶具有与单独乳糖相当的致龋水平。乳糖可能促进变形链球菌生物膜的形成并促进变形链球菌生长，并降低对变形链球菌的产酸抑制作用，使ΔpH值升高。调味牛奶具有致龋性，蔗糖本身就具有致龋作用，再结合牛奶中的乳糖则加强了致龋性。因此提倡食用普通牛奶，并劝阻食用对牙齿有害的致龋饮料。无乳糖牛奶使得牙釉质和牙本质中发生低脱矿量，pH值保持在脱矿预值以上，由于这些产品被人们高度消费，尤其是儿童，这些调查结果可能会引起口腔人士和公众的高度关注。

目前国内外的研究大多是研究各种菌类、糖类、氟制剂等对龋病的致病性和抑制性的研究，对于脂肪含量不同的牛奶的致龋性研究相关报道较少[9]。含益生菌是一种活的微生物，当其用量足够时，可为宿主带来健康益处，儿童使用益生菌改善口腔健康可以使非致病菌取代致龋细菌，有益生菌的牛乳可有效预防龋齿。不添加糖的乳制品可以推荐为餐后甜点，特别是给儿童，这有助于降低龋齿的发生率[10]。

综上所述，脂肪水平的变化也可能导致牛奶的致龋性的变化，与脱脂牛奶相比，全脂牛奶具有一定抗龋效果，另外，与没有添加蔗糖的牛奶相比，添加了蔗糖的牛奶有一定的致龋性。所以应提倡使用含脂牛奶，并劝阻使用对牙齿有害的致龋饮料。