拐枣水提液对酒精性急性肝损伤小鼠保护作用研究

李传俊，张勇

（ 漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462000）

0 引言

拐枣(H.dulcis)属鼠李科(Rhamnaceae)拐枣属(Hovenia)植物，拐枣系鼠李科枳椇属植物枳椇干燥成熟的种子，学名枳椇子，又名鸡爪果万寿果、木蜜、鸡距子等，主要分布于湖北、陕西、广东、福建、浙江等省，目前处于野生或半野生状态。

拐枣在1500多年前我国已作为药用，载于《唐本草》，药用部分为带有肉质果柄的果实或种子。至近现代，药用部位从枝木及花序轴发展到果实和种子，而功效基本一致[1]。《本草纲目》中记述:拐枣性干、平、无毒，止渴除烦，去膈上热，利大小便，功用同蜂蜜；可解酒毒，辟虫毒。拐枣的树皮、叶、根、果实、种子均可药用。

随着经济的发展，人民生活水平的提高，饮酒已是人们生活中普遍现象。目前，酒精性肝病成为仅次于病毒性肝炎的第二大类肝脏疾病[2-3]，肝脏是机体乙醇代谢的主要场所，长期大量饮酒可使乙醇在体内慢性蓄积，酒精性肝损伤有爆发的势头[4]。天麻多糖[5]、北五味子藤茎总三萜[6]、葛花[7]、栀子油[8]、桑葚[9]、木犀草素[10]、葡萄籽原花青素[11]均具有抗酒精性肝损伤的作用。

本文通过建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，观察给予拐枣水提物灌胃急性酒精性肝损伤模型小鼠生化指标的变化，研究拐枣水提物对急性酒精性肝损伤模型小鼠的保护作用，为因饮酒导致的肝损伤者提供具有保肝护肝功效的食物。

1 实验材料与仪器

1.1 试剂

拐枣水提液:低剂量（0.5mg/mL）、中剂量（1mg/mL）、高剂量（2mg/mL）；50%乙醇，分析纯，郑州市化工厂；生理盐水，华润双鹤药业股份有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)测试试剂盒、丙二醛(MDA)测试试剂盒、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测试试剂盒、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测试试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司。

1.2 动物

购买实验动物，昆明种雄性小鼠，在漯河医学高等专科学校动物房饲养，温度20～26℃，相对湿度为35%～70%。饲养期间小鼠活动及饮食正常，皮毛光滑色泽鲜亮。

1.3 仪器

BLOBASE-EL10A多功能酶标仪，济南高奎医疗器械有限公司；Happy-TL16台式离心机；全自动组织脱水机；超净工作台等。

2 方法

2.1 实验方法

2.1.1 拐枣水提液

拐枣粉碎成粗粉，加8N纯化水浸提24h,过滤，滤液保存待用；滤渣分别加3N纯化水煎煮1.5h、1h,过滤合并水煎滤液、浸提液为拐枣水提液，加热浓缩为拐枣浓缩液备用。取适量拐枣浓缩液加纯化水分别稀释成含生药0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL水提液，备用。

2.1.2 急性酒精性肝损伤实验

选取年（月）龄、体重、健康状况比较无显著差异的雄性小鼠40只，体重（20±2）g，随机分成五组，拐枣水提液低、中、高剂量组、模型组、和正常组，每组8只。除正常对照组外，其他组按照齐慧慧等[12]建模方法，按6g/kg剂量用50%乙醇一次性给予小鼠灌胃。急性酒精性肝损伤模型建模成功，拐枣水提液低、中、高剂量组分别用0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL的拐枣水提液罐胃，1次/天,0.5mL/次，连用7天；正常组和模型组生理盐水罐胃，1次/天,0.5mL/次，连用7天。最后一次罐胃后，等2h开始进行生化指标检测实验。

2.2 实验指标及检测方法

2.2.1 实验指标

选取小鼠血清谷草转氨酶（AST）含量、谷丙转氨酶（ALT）含量、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性为本实验的生化指标。

2.2.2 实验指标检测

摘除小鼠眼球取血，静止放置，离心15min后取出血清，采用酶法测定血清中 AST 和 ALT 水平。按试剂盒说明书要求操作，定量测定各组小鼠谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性，结果详见表1、表2。

2.3 统计学处理

3 结果与分析

表1、表2表明:模型组与对照组比较，生化指标ALT、ATS、MAD有非常显著差异（P值均小于0.01）；SOD指标具显著差异（P＜0.05）。ALT、ATS、MAD与SOD四指标表明急性酒精性肝损伤建模成功。

3.1 拐枣水提液对急性酒精肝损伤小鼠血清ALT、AST影响

表1表明:不同剂量组与模型组组间比较，低剂量组ALT、ATS指标P值均大于0.05，与模型组差异无统计学意义；中剂量组ALT（P＜0.01）与模型组差异有非常显著统计学意义，ATS（P＞0.05）与模型组差异无统计学意义；高剂量组ALT（P＜0.01）与模型组差异有非常显著统计学意义，ATS（P＜0.05）与模型组差异有显著统计学意义。

表1 拐枣水提液对急性酒精肝损伤小鼠血清ALT、AST影响（±s）

表1 拐枣水提液对急性酒精肝损伤小鼠血清ALT、AST影响（±s）

注：与正常对照组比较，*表示差异显著(P＜0.05)，**表示差异极显著(P＜0.01)；与模型组比较，#表示差异显著(P＜0.05)，##表示差异极显著(P＜0.01)。

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3.2 拐枣水提液对急性酒精肝损伤小鼠血清MAD、SOD影响

表2表明:不同剂量组与模型组组间比较，低剂量组MAD、SOD指标P值均大于0.05，与模型组差异无统计学意义；中剂量组MAD（P＜0.01）与模型组差异有非常显著统计学意义，SOD（P＞0.05）与模型组差异无统计学意义；高剂量组MDA（P＜0.01）与模型组差异有非常显著统计学意义，SOD（P＜0.05）与模型组差异有显著统计学意义。

表2 拐枣水提液对急性酒精肝损伤小鼠血清MAD、SOD影响（±s）

表2 拐枣水提液对急性酒精肝损伤小鼠血清MAD、SOD影响（±s）

注：与正常对照组比较，*表示差异显著(P＜0.05)，**表示差异极显著(P＜0.01)；与模型组比较，#表示差异显著(P＜0.05)，##表示差异极显著(P＜0.01)。

组别 n 剂量（mg/mL） MAD（mmol/mg） SOD（u/mg）正常组 8 / 8.60±0.46 329.25±7.21模型组 8 / 15.39±1.66** 278.44±31.71*低剂量组 8 0.5 13.21±1.05 290.65±13.31中剂量组 8 1 9.47±0.69## 292.45±9.28高剂量组 8 2 8.79±0.48## 339.25±5.20#

4 讨论

4.1 生化指标选取及动物建模

酒精进入体内会引起机体内谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）含量升高[13-14]。因正常血清中ALT、AST含量很低，只有当肝损伤，肝细胞内ALT、AST才会释放入血，导致ALT、AST含量升高，所以本实验选取血清ALT、AST含量作为检测肝损伤的生化指标[15]。

肝脏是机体酒精代谢的主要场所，酒精进入肝脏，会导致肝细胞膜脂质过氧化，影响肝功。因丙二醛（MDA）作为肝细胞膜脂质过氧化的终末产物之一，其含量可以间接反映肝损伤的受损程度[16]。超氧化物歧化酶（SOD）可以阻止肝损伤，及时修复损伤是肝细胞，SOD活性能反映肝损伤的速度及修复受损肝细胞的能力[17]。所以本实验选取MAD含量、SOD活性作为检测肝损伤的生化指标。

模型组与正常对照组比较，生化指标ALT、ATS、MAD有非常显著差异（P值均小于0.01）；SOD指标具显著差异（P＜0.05）。ALT、ATS、MAD与SOD四指标表明急性酒精性肝损伤建模成功。

4.2 拐枣水提液对酒精性急性肝损伤小鼠保护作用

本实验中各剂量组与模型组组间比较，拐枣水提液低剂量组对ALT、AST、MDA、SOD无统计学差异（P＞0.05）；拐枣水提液中剂量组降低ALT含量具有非常显著的统计学意义（P＜0.05），降低MDA的产生非常显著的统计学意义（P＜0.01），对AST、SOD无统计学差异（P＞0.05）；拐枣水提液高剂量组对降低ALT、AST含量有非常显著的统计学意义（P＜0.01），降低MDA的产生有非常显著的统计学意义（P＜0.01），对SOD活性的提升有显著统计学差异（P＜0.05）。

综上得出结论:拐枣水提液中剂量组、高剂量组对酒精性急性肝损伤具有保护作用，拐枣水提液高剂量组护肝效果更明显。拐枣水提液高剂量组提升SOD活性，加速受损肝细胞的修复，有利于保护长期饮酒者肝细胞，加速受损肝细胞的修复，值得在实际生活中运用。