某规模化猪场主要猪繁殖障碍性传染病抗体检测及分析

宋 敏，吴圆圆，屈勇刚*，于会举，杨慧敏,2，任 敏，魏 其，谷思颖

（1.石河子大学动物科技学院 ，新疆 石河子 832000；2.石河子市添元生物科技有限公司，新疆 石河子 832000）

随着新疆畜牧业的迅速发展，南疆养殖的规模也在逐年扩大，在生猪养殖数量日益增多的同时，猪只流动频繁，疫病发生的条件变得愈加复杂。猪群的感染发病受诸多因素的影响，必须严密结合猪场生产状况、发病特点和时间等具体情况进行免疫程序的制定或调整，科学制定的免疫程序需要依靠血清抗体水平的监测[1]来配合。南疆某规模化猪场生猪存栏2.8万头，其中母猪存栏共2 400头。为了掌握猪群常见繁殖障碍性传染病的整体抗体水平，采集307份血清样品进行常见繁殖障碍性传染病的抗体检测和分析，以期为制定合理的免疫程序或调整免疫程序提供依据，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 血清样品

血清样品共307份，其中0～10日龄仔猪12份、14日龄仔猪29份、25日龄保育猪29份、53日龄保育猪28份、103日龄育肥猪30份、145日龄育肥猪30份、妊娠30～60日母猪30份、妊娠90日母猪30份、哺乳母猪30份、后备母猪30份、种公猪29份。采血后自然凝固，分离血清，置4 ℃冰箱保存待测。

1.2 检测试剂盒

实验采用的诊断试剂盒分别为99-43220猪瘟病毒（CSFV）ELISA抗体检测试剂盒（批号：H931）、99-40959猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ELISA抗体检测试剂盒（批号：J051）、99-09836猪伪狂犬病gI（PRV-gE）抗体检测试剂盒（批号：KM818），99-09732猪伪狂犬病 gB（PRV-gB）抗体检测试剂盒（批号：HM634）均购自北京爱德士元亨生物科技有限公司。

1.3 检测方法与结果判定

1.3.1 检测方法

按照上述ELISA试剂盒说明书对307份血清进行CSFV、PRRSV抗体水平的检测，从所采集各类别猪群血清样本中抽取20%进行PRV-gB和PRV-gE蛋白抗体水平的检测。

1.3.2 结果判定

1.3.2.1  抗体阳性率测定

对于CSFV，计算阻断率，阻断率=（阴性对照OD450nm平均值-样品OD450nm值）÷阴性对照OD450nm平均值×100%。对于PRRSV，计算S/P值，S/P=（样品OD650nm值-阴性对照OD650nm平均值）÷（阳性对照OD650nm平均值-阴性对照OD650nm平均值），S/P≥0.40判为阳性；S/P＜0.40判为阴性。对于PRV-gB及PRV-gE，计算S/N比值，S＝样品孔OD650nm值，N＝阴性对照孔平均OD650nm值，若S/N比值≤0.35，样品判为阳性；S/N比值＞0.4，判为阴性；S/N介于0.35和0.4之间，判为可疑。以上述判定标准对CSFV、PRRSV、PRV-gB三项抗体检测结果进行判定。

1.3.2.2  离散度计算

各类别猪群抗体水平的离散度通过变异系数来反映，用SPSS 软件对数据进行统计分析，计算平均数x-、标准差SD，变异系数C·V=（标准差SD÷平均数x-）×100%。

2 结果

2.1 该猪场4种抗体检测结果

307份血清样品中猪瘟病毒抗体阳性率为81.11%（249/307），阴性率为12.70%（39/307）， 可 疑 率 为 6.19%（19/307），阻断率平均值为65.06%，离散度为37.69%。307份血清样品中猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率为90.23%（277/307），阴性率为 9.77%（30/307），S/P平 均 值 为 1.64， 离散度为52.69%。63份血清中猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体阳性率为95.24%（60/63），阴性率为0%（0/63），可疑率为4.76%（3/63），检测平均S/N值为0.088，离散度为161.30%；63份血清中猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体阳性率为69.84%（44/63），阴性率为28.57%（18/63）， 可 疑 率 为 1.59%（1/63），检测平均S/N值为0.35，离散度为103.59%，结果见表1。

表1 某规模化猪场猪常见传染病抗体检测结果

2.2  该猪场不同猪群的抗体水平检测结果

2.2.1 不同猪群血清中CSFV抗体水平（75.27±13.32）%、（57.15±27.88）%、（31.19±22.43）%、（63.26±20.06）%、（55.37±24.75）%、（68.44±18.06）%、（77.88±13.09）%、（75.21±20.50）%、（88.18±6.59）%、（68.42±15.46）%；抗体水平离散度分别为83.72%、17.7%、48.78%、71.92%、31.7%、44.69%、26.39%、16.81%、27.26%、7.48%、22.6%。实验统计结果见表2。

表2 不同类别猪群CSFV免疫抗体阳性率检测结果

2.2.2 不同猪群血清中PRRSV抗体水平

对该猪场不同类别猪群的CSFV抗体水平进行分析发现，0～10日龄仔猪、14日龄仔猪、25日龄保育猪、53日龄保育猪、103日龄育肥猪、145日龄育肥猪、妊娠30～60日母猪、妊娠90日母猪、哺乳母猪、后备母猪、公猪的抗体阳性率分别为：41.67%、96.55%、72.41%、21.43%、83.33%、76.67%、90%、100%、90%、100%、93.1%；阻断率平均值分别为（31.57±26.43）%、

对该猪场不同类别猪群的PRRSV抗体水平进行分析发现，0～10日龄仔猪、14日龄仔猪、25日龄保育猪、53日龄保育猪、103日龄育肥猪、145日龄育肥猪、妊娠30～60日母猪、妊娠90日母猪、哺乳母猪、后备母猪、公猪的抗体阳性率分别为：50%、86.21%、72.41%、100%、100%、100%、90%、93.33%、86.67%、100%、93.1%；S/P平均值分别为1.15±1.18、0.88±0.39、0.74±0.53、2.35±0.28、2.34±0.53、2.38±0.62、1.42±0.65、1.32±0.69、1.16±0.69、2.59±0.29、1.41±0.59；抗体水平离散度分别为103%、44.2%、70.83%、11.86%、22.87%、25.92%、45.71%、52.31%、59.28%、11.18%、41.65%。统计结果见表3。

2.2.3 不同猪群血清中PRV-gB蛋白抗体水平

对该猪场不同类别猪群的PRV-gB蛋白抗体水平进行分析发现，0～10日龄仔猪、14日龄仔猪、25日龄保育猪、53日龄保育猪、103日龄育肥猪、145日龄育肥猪、妊娠30～60日母猪、妊娠90日母猪、哺乳母猪、后备母猪、公猪的抗体阳性率除145日龄育肥猪抗体阳性率为66.67%外，其余猪群抗体阳性率均为100%；S/N 平 均 值 分 别 为 ：0.036±0.007 6、0.029±0.030、0.030±0.0011、0.11±0.11、0.17±0.11、0.37±0.31、0.036±0.014、0.030±0.0012、0.031±0.0019、0.067±0.023、0.031±0.0019；抗体水平离散度分别 为：20.82%、104.55%、3.78%、100.7%、62.12%、83.08%、38.69%、3.99%、6.21%、33.56%、6.12%。 实验统计结果见表4。猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体水平曲线图见图1。

2.2.4 不同猪群血清中PRV-gE蛋白抗体水平

对该猪场不同类别猪群的PRV-gE蛋白抗体水平进行分析发现，0～10日龄仔猪、14日龄仔猪、25日龄保育猪、53日龄保育猪、103日龄育肥猪、145日龄育肥猪、妊娠30～60日母猪、妊娠90日母猪、哺乳母猪、后备母猪、公猪的阳性率分别为：100%、100%、100%、83.33%、0%、0%、100%、66.67%、66.67%、100%、83.33%；S/N平均值分别为：0.18±0.081、0.13±0.12、0.33±0.12、0.42±0.25、0.88±0.11、0.92±0.090、0.061±0.015、0.30±0.38、0.36±0.43、0.15±0.070、0.20±0.36；抗体水平离散度分别为：45.19%、91.19%、35.31%、59.29%、12.59%、9.71%、23.99%、126.2%、117.84%、45.63%、180.3%。实验统计结果见表4。猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体水平曲线图见图2。

3 分析与讨论

3.1 该猪场4种抗体检测结果

从整体看猪群CSFV、PRRSV、PRV-gB蛋白抗体水平阳性率较高，免疫防控效果较好，均在80%以上，大于吴群等检测的粤西地区3种猪病病毒的平均合格率[2]，根据具体情况应对阴性猪只或抗体水平低的猪只进行补免。PRV-gE蛋白抗体阳性率为69.84%，离散度较高，提示猪群可能存在PRV野毒感染；猪场应对猪伪狂犬病野毒防控引起重视，从图1可以看出猪群部分猪只抗体低影响了猪群抗体整齐度，应时刻观察仔猪、保育猪有无站立时后肢打颤，明显麻痹症状伴抽搐、癫痫等[3]症状。

3.2 该猪场不同猪群的抗体水平分析

3.2.1 不同猪群血清中CSFV抗体水平分析

0～10日龄仔猪阳性率只有41.67%，离散度为83.72%，14日龄阳性率为96.55%，说明有部分刚出生仔猪获得母乳抗体较少，需加强饲养管理，多关注抢不到奶头的小猪，若临床有仔猪发病需及时隔离处理。有研究表明，提升母猪分娩时的抗体含量可提高仔猪母源抗体水平[4]。25日龄时，抗体阻断率从14日龄的（75.27±13.32）%下 降 到（57.15±27.88）%， 说 明首免时间定在此时间段后，较为合适，避免母源抗体干扰[5]；53日龄猪群阳性率为21.43%，阻断率下降至（31.19±22.43）%，离散度较大，说明抗体水平整齐度低，需配合保健增强抵抗力，尽快进行猪瘟二免提高猪群抗体水平；育肥猪阳性率分别为83.33%、76.67%均保持较高水平；阴性猪只是否存在漏免现象，需结合临床情况具体分析，对于抗体水平较低的猪只可进行补免，1个月后再次采血检测抗体，仍为阴性进行淘汰[6]；后备母猪、公猪猪瘟的免疫防控效果良好，整齐度高。

表3 不同类别猪群PRRSV免疫抗体阳性率检测结果

表4 不同类别猪群PRV抗体阳性率检测结果

3.2.2 不同猪群血清中PRRSV抗体水平分析

本次检测中，53日龄保育猪、育肥猪、后备母猪免疫抗体阳性率最高，为100%，离散度相对稳定，但S/P值＞2.5的比例也相对较高，应根据临床观察是否有PRRSV毒血症等症状发生；妊娠30～60日母猪、妊娠90日母猪、哺乳母猪的阳性率分别为90%、93.33%、86.67%，产后母源抗体呈下降趋势，离散度分别为45.71%、52.31%、59.28%逐渐增大；0～10日龄仔猪的PRRSV抗体阳性率最低，只有50%，其中S/P值＞2.5的样品份数占25.00%，离散度为103%，14日龄仔猪和25日龄保育猪阳性率分别为86.21%、72.41%，S/P平均值较低分别为0.88±0.39、0.74±0.53，抗体水平整齐度不佳，表明在采样时，疫苗免疫后仔猪群体内抗体水平尚未上升到稳定水平，经过保健等综合防控措施，53日龄后的猪群中抗体达到稳定水平；后备母猪100%，S/P值为2～2.5样品数为30.00%，S/P值＞2.5的样品份数占66.67%，离散度为11.18%，抗体整齐度较高，说明后备母猪经过入群前驯化达到理想效果，抗体水平稳定于可抵御猪蓝耳病野毒的较高水平，但仍需加强饲养管理，密切关注高抗猪群日常生长状况[7]；公猪群阳性率为93.1%，离散度为41.65%，需对抗体较高猪只进行重点观察，必要时对其精液进行病毒抗原检测[8]，避免因精液中带有病毒，导致相互感染传播[9]。对抗体较低猪只进行补免。由于间接ELISA只能检测出抗体水平高低，却不能鉴别是疫苗毒与野毒，需时刻关注S/P值＞2.5的猪只生长状况，并通过日常饲养管理，减少病毒传播可能。

图1 某规模化猪场猪伪狂犬病毒gB蛋白抗体水平

图2 某规模化猪场猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体水平

3.2.3 不同猪群血清中PRV-gB蛋白抗体水平分析

猪伪狂犬病毒只有一种血清型，越早让仔猪进行滴鼻免疫，疫苗毒会抢先与机体的天然靶位产生“占位效应”，降低野毒感染风险[10]。0～10日龄仔猪、14日龄仔猪、母猪和公猪的S/N平均值维持在0.1以下，且抗体整齐度较高表明免疫效果较好；14日龄仔猪、53日龄保育猪、育肥猪阳性率较高，但离散度较大，其中145日龄猪阳性率为66.67%，需加强免疫。

3.2.4 不同猪群血清中PRV-gE蛋白抗体水平分析

从本次抽检结果看，该猪场PRV-gE蛋白抗体阳性率较高，公猪阳性率为83.33%，母猪中后备母猪与妊娠30～60日母猪阳性率为100%，妊娠90日母猪及哺乳母猪阳性率为66.67%，提示野毒感染比较普遍，有研究表明[11-13]各省份猪场PRV-gE蛋白抗体阳性率呈逐年上升趋势。本次检测哺乳仔猪与母猪PRV-gE蛋白抗体阳性率较接近，0～25日龄仔猪阳性率为100%、53日龄为83.33%、之后育肥猪阳性率为0%，PRV-gE蛋白抗体逐渐降低，这与段群棚等[14]调查结果相符，其原因很可能是来自母猪感染野毒后的母源抗体在仔猪群内随时间逐渐消失。免疫缺失疫苗后猪群临床无明显发病症状，这与左玉柱曾表示“如果母猪gE抗体阳性，仔猪在7～8周龄之前为阳性，其后逐渐转阴性，说明仔猪伪狂犬病疫苗免疫是有效的，使仔猪没有再感染伪狂犬野毒”结论一致[1]。