康太旨颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠降脂保肝作用的实验研究

陈学明 张佳信 杨婉婷 叶新苗#

1 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

2 浙江省浦江县中医院 浙江 浦江 322200

康太旨颗粒是叶新苗教授治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）验方，前期研究证实其具有降血脂、改善肝功能、改善肝脏炎症、减少肝脂肪变及纤维化等作用[1]。为进一步研究康太旨颗粒对肝功能异常及脂质代谢紊乱的影响，本实验通过建立NAFLD大鼠模型，研究其降脂保肝的作用及抗氧化作用机制。

1 实验材料

1.1 动物及饲料：SPF级别SD大鼠62只，雄性，6周龄，体重200±20g，许可证号：SCXK（浙）2014-0001，由浙江省实验动物中心提供。动物饲养环境设置：室温24℃，湿度45%～75%。基础饲料由浙江中医药大学动物实验中心提供。高脂饲料购自江苏南通特洛菲饲料科技有限公司。

1.2 药物及试剂：康太旨颗粒（由生葛根、桑叶、煅牡蛎、生玉竹各12g，炒槐花9g，桑椹子15g，制木瓜6g组成，浙江安贝特药业有限公司，批号20170715、20170808、20171015） ；辛 伐 他 汀 片 （Merck Sharp&DohmeB.V.公司，进口药品注册证号：H20130146，批准文号：国药准字J20130068）；总胆固醇（CHOL，批 号 ：20170724）、甘 油 三 酯（TG，批 号 ：20170328）、低密度脂蛋白（LDL-C，批号：20161021）、高密度脂蛋白（HDL-C，批号：20171229）、谷丙转氨酶（ALT，批号：20161107）、谷草转氨酶（AST，批号：20160612）、载脂蛋白A1（APO-A1，批号：20160503）、载脂蛋白-B（APOB，批号20161027）、丙二醛(MDA，批号：20170921）、超氧化物歧化酶(SOD，批号：20170219）。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

2 实验方法

2.1 分组与造模：SD大鼠适应性喂养7天后，随机分为6组：正常对照组，模型对照组，辛伐他汀组，太旨颗粒低、中高剂量组。模型对照组12只，其余每组10只。正常对照组给予普通饲料喂养，其余各组大鼠给予高脂饲料（普通饲料中添加10%猪油，4%胆固醇，0.5%胆盐，0.4%丙基硫氧嘧啶，5%蔗糖）。造模4周，4周后模型组随机处死3只，其余组随机处死1只，行肝脏HE染色判断造模是否成功。

2.2 给药：造模成功后，空白对照组、模型对照组10ml/kg·d生理盐水灌胃；康太旨颗粒高、中、低剂量组分别予生药量12、6、3g/kg配制成混悬液10ml/kg·d灌胃；辛伐他汀组用辛伐他汀片碾磨成粉配制成0.008g/kg混悬液，10ml/kg·d，连续给药6周。

2.3 标本处理：实验第10周所有大鼠禁食12h（不禁水)后，称重，各组大鼠用3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔内注射麻醉后，腹主动脉取血，离心，分装，送实验室测各项血清指标，并迅速摘取肝脏并称重，计算肝脏指数。另取肝叶组织浸泡10%的福尔马林液中固定，制作HE染色的病理切片；其余肝脏组织放入冻存管于-80℃冰箱备用。

2.4 统计学方法：应用SPSS24.0进行统计学处理，组间比较采用单因素方差分析，数据用均数±标准差（-x±s)表示。P＜0.05为具有统计学意义。

3 实验结果

3.1 各组大鼠血清APOA1、APOB比较：造模4周后，模型组血清APOA1、APOB水平较正常组显著降低（P＜0.01）；治疗6周后，与模型组比较，辛伐他汀组、康太旨颗粒低、高剂量组血清APOA1、APOB水平显著升高（P＜0.01）；中剂量组对APOB有升高趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 各组大鼠APOA1、APOB水平比较（-x±s，mmol/L)

3.2 各组大鼠血清血脂水平比较：造模4周后，与正常组比较，模型组血清CHOL、TG、LDL-C、HDL-C水平显著升高（P＜0.01），HDL-C水平显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，治疗6周后，辛伐他汀组、康太旨颗粒三剂量组血清CHOL、TG、LDL-C、HDL-C水平显著降低（P＜0.01），HDL-C水平显著升高（P＜0.01）。见表2。

表2 各组大鼠血清 TG、LDL-C、HDL-C 、CHOL水平比较（-x±s，mmol/L)

3.3 各组大鼠血清肝功能指标比较：造模4周后，与正常组比较，模型组血清ALT、AST水平显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，治疗6周后，辛伐他汀组、康太旨颗粒三剂量组血清ALT、AST水平显著降低（P＜0.01）。见表3。

表3 各组大鼠血清AST、ALT水平比较（-x±s，mmol/L)

3.4 各组大鼠肝指数及肝MDA、SOD水平比较：造模4周后，与正常组比较，模型组肝指数及肝MDA水平显著升高（P＜0.01），SOD水平明显降低（P＜0.01）；与模型组比较，治疗6周后，辛伐他汀组、康太旨颗粒三剂量组大鼠肝指数及肝MDA水平显著降低（P＜0.01），SOD水平明显升高（P＜0.01），除辛伐他汀组以外其他组TC水平显著降低（P＜0.01）。见图1、2，表4。

图1 各组大鼠SOD水平

图2 各组大鼠MDA水平

表4 各组大鼠肝脏指数比较（-x±s）

3.5 各组大鼠肝脏病理变化：正常组大鼠肝小叶结构完整，边界清晰，以中央静脉为中心呈放射状排列紧密的肝细胞未见肿胀及脂肪变性病变，汇管区无炎症细胞浸润；模型组大鼠肝脏细胞肿胀呈脂肪变性，出现脂肪空泡，核位移，有脂肪堆积，小叶炎症，肝小叶边界不清晰，细胞排列混乱。汇管区及肝窦出现炎症反应，肝窦消失，组织间质也有炎症反应，局部有淋巴细胞浸润；康太旨颗粒各个剂量组大鼠肝细胞脂肪变程度明显减轻，脂肪滴空泡减少，肝细胞膨胀减少且排列紧密，肝小叶炎症减轻，细胞接近于正常形态。见图3。

图3 HE染色光光镜下观察各组大鼠肝脏组织的结构（200×）

4 讨论

中医学并无脂肪肝病名,但根据其病因、病机应属“肥气”“胁痛”“积聚”“胀满”“痰浊”等范畴。康太旨颗粒主治脾胃运化失调，肝肾津亏，气机不畅，血气瘀滞而致的非酒精性脂肪肝。方中生葛根解肌退热，透疹，生津止渴，升阳止泻，为君药，现代药理研究其有降血糖，降血脂，保护心血管系统等作用；桑叶疏散风热，清泻肝热，其提取的桑叶总多糖有显著的降血糖作用；槐花善清湿热，凉血止血，现代研究表明其可降血脂；桑椹滋阴补血，补肝益肾，生津止渴；玉竹滋补气阴，有生津止渴，为臣药；煅牡蛎平肝潜阳，软坚散结，收敛固涩，现代药理具有强肝解毒，净化瘀血之效，为佐药。每种中药都具有广泛的药理活性，诸药合用能够运化脾胃，改善肝肾津亏，调节气机，促进气血，达到调节血脂，保肝护肝和代谢作用。

本研究结果表明，高脂饮食所致的NAFLD大鼠模型与正常组比较，血脂水平、肝脏的MDA水平明显升高，SOD水平明显降低（P＜0.01）。康太旨颗粒灌胃后，可明显改善模型组血清中的AST、ALT、CHOL、TG、LDL-C、HDL-C等表达水平，以及肝脏中MDA、SOD的表达水平。本实验中康太旨颗粒组分别设有高、中、低剂量组，但是各个指标的组间差异并不明显，实验结果也未呈现出与剂量大小间的正相关，这可能与各剂量组用药梯度太小有关。ALT、AST水平升高与脂肪性肝炎炎症和肝纤维化损伤呈明显的相关性[2]，这两个酶是衡量肝功能的重要指标。实验结果显示康太旨颗粒各剂量组可显著降低NAFLD模型大鼠ALT、AST水平，表明康太旨颗粒具有改善肝脏炎症和肝功能的作用。同时肝脏病理切片的结果也显示康太旨颗粒能减轻肝脏脂肪性病变以及炎症细胞浸润，有效改善肝脏受损程度。预测其机制可能与抑制炎症和清除脂毒性有关。MDA是脂质过氧化的产物，判断脂质过氧化损伤程度的高低是根据MDA含量来衡量的。SOD是肝脏抗氧化系统之一，可清除自由基和过氧化产物。实验结果显示康太旨颗粒可显著降低NAFLD模型大鼠肝脏MDA含量，提高肝脏SOD含量，提示康太旨颗粒能够加强机体对肝脏代谢过氧化物的能力，减轻肝脏脂质过氧化损伤程度，但其详细的机制有待进一步深入研究。综上所述，康太旨颗粒可以降低NAFLD大鼠血清AST、ALT、CHOL、TG、LDL-C的含量，升高HDL-C的含量，减轻炎症水平，减少脂质沉积，减缓肝脏脂肪变性。这可能与其改善肝脏中MDA、SOD的表达，降低肝脏脂质的过氧化反应有关。

5 参考文献

[1]叶新苗,杨寅,叶肖琳,等.太旨黄特型绍兴黄酒降血脂的实验研究[J].中华中医药杂志,2012(6)：1655-1658.

[2]Lebeaupin C,Vallée D,Rousseau D,et al.Bax Inhibitor-1 protects from Non-Alcoholic Steatohepatitis by limiting IRE1 α signaling[J].Hepatology,2018,68（2）：515-532.