MMP-9和PTEN蛋白在胶质瘤中的表达特点及意义

褚荣涛 邵国平 惠卫宁 龚铭杰（通讯作者）

（常熟市第二人民医院＜扬州大学第5临床医学院＞神经外科 江苏 常熟 215500）

胶质瘤（glioma）是颅内肿瘤的一种，占颅脑肿瘤的40%～50%，是最常见的颅内恶性肿瘤。年发病率为3～8人/10万人口。如同其他肿瘤一样，胶质瘤也是由于先天的遗传高危因素和环境的致癌因素相互作用所导致。由于其本身具有侵袭性生长特性，导致该肿瘤较难被治愈。MMP-9是金属蛋白酶中具有代表性意义的一种酶，通过金属蛋白酶降解细胞外基质来突破组织屏障从而发生转移；PTEN蛋白是抑癌基因，多数肿瘤俊辉在该蛋白中发生突变[1]。本文主要研究MMP-9和PTEN蛋白表达特点和相关性，分析MMP-9和PTEN蛋白对于胶质瘤的意义，现将研究结果报告如下。

1.资料和方法

1.1 一般资料

选取本院2012年1月—2017年12月胶质瘤患者57例，将其作为观察组。选取同期正常人群33例，将其作为对照组。其中，对照组男女数量比例为21/12，年龄51～66岁，平均年龄（58.7±4.2）岁；观察组男女数量比例为34/23，年龄50～69岁，平均年龄（58.9±4.4）岁，两组患者在基础信息上无差异（P＞0.05），可进行对比。

1.2 方法

1.2.1 组织芯片制备 对肿瘤标本进行常规固定、包埋、切片和染色，通过光学显微镜，寻找目标区域组织，在组织切片上做好标记。

1.2.2 免疫组织化学染色 采用EnVision法。使用MMP-9和PTEN多克隆抗体及PV6001、DAB显色试剂盒（中衫生物技术开发有限公司）。让组织芯片进行脱蜡、水化，在室温条件下3%H2O2封闭内源性过氧化物酶，5min后在100℃高温、pH6.0条件下修复15min，加入试剂进行显色，复染后脱水、透明、封片。

1.3 观察指标

检测人脑组织中MMP-9和PTEN蛋白表达，分析MMP-9与PTEN表达相关性。

1.4 统计学方法

将SPSS18.0统计软件对实验结果进行分析，计数资料使用χ2检验，并用百分比表示，计量资料采用（±s）表示，并用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 免疫组织化学结果

制作研究对象胶质瘤组织芯片，免疫组织化学阳性信号为棕黄色颗粒，并在包浆中发现MMP-9和PTEN蛋白。

2.2 正常脑组织和不同WHO级别胶质瘤PTEN表达情况

在33例正常人群中，PTEN蛋白全部呈阳性反应，阳性率100.00%；在57例胶质瘤患者中，29例呈现PTEN蛋白阳性反应，阳性率为50.88%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。随着WHO分级提升，胶质瘤PTEN蛋白表达下降，见表1。

表1 正常人群与不同WHO级别胶质瘤中PTEN蛋白表达（n）

2.3 正常脑组织和不同WHO级别胶质瘤MMP-9表达情况

在33例正常人群中，27例MMP-9呈阳性反应，阳性率81.82%；在57例胶质瘤患者中，48例呈现MMP-9阳性反应，阳性率为84.21%，差异无统计学意义（P＞0.05）。随着WHO分级提升，胶质瘤MMP-9表达增强，见表2。

表2 正常人群与不同WHO级别胶质瘤中MMP-9表达（n）

2.4 胶质瘤中MMP-9和PTEN蛋白表达相关性

胶质瘤中MMP-9和PTEN蛋白表达无相关性，见表3。

表3 胶质瘤中MMP-9和PTEN蛋白表达关系（n）

3.讨论

胶质瘤源自于人体神经外胚层，其特征明显，不仅会呈现浸润性生长，而且还会存在复发现象[2]。由于该恶性肿瘤此种特性，导致治疗无从进展，直到现在，仍然是神经外科恶性肿瘤治疗过程中的一个重难点课题。但在研究过程中发现[3]，胶质瘤在浸润和转移过程中牵涉多个环节，如肿瘤细胞黏附、细胞迁移、基质降解等，其中，细胞外基质在肿瘤的浸润和侵袭过程中起到关键作用。而且胶质瘤肿瘤细胞能够分泌蛋白水解酶，并使其降解，破坏细胞间质构成的细胞外基质，来促进肿瘤侵袭转移。

MMP-9属于蛋白水解酶的一种，而且在其中具有较大作用。在目前研究中[4]，基质金属蛋白酶（MMPs）涉及恶性肿瘤发展多个过程，不仅包括恶性肿瘤浸润、侵袭，还有转移、血管生成、肿瘤增殖。其中，MMP-9由巨噬细胞、结缔组织和某些肿瘤细胞进行合成和分泌。还有研究提出佐证[5]，在胶质瘤中，MMP-9阳性表达率较高，明显超出正常人群。通过免疫组织化学技术检查，MMP-9会在胶质瘤中进行转录，表达水平也会相应增加，表明胶质瘤的侵袭性与MMP-9表达存在一定联系[6]。

PTEN本身具有磷酸酶活性，具有抑制肿瘤的作用。在研究中表明[7]，人类出现肿瘤时，多数患者均出现PTEN蛋白基因突变。而且PTEN定位于胞浆，N端是其主要功能区，也是酶的催化中心。脂质磷酸酶活性是PTEN蛋白能够抑制肿瘤的主要原因，通过该功能，能够影响细胞增殖、黏附以及细胞迁移。随后有研究发现[8]，PTEN在很多肿瘤中均存在表达缺陷，而且恶性肿瘤患者PTEN蛋白阳性表达率明显低于正常人群，表明PTEN蛋白突变、丢失、灭活等在胶质瘤的发展过程中具有重要作用。而且随着肿瘤逐渐恶化，患者PTEN蛋白阳性表达率会进一步降低也表明PTEN蛋白基因异常与胶质瘤恶化有直接关联。

本文研究表明：在33例正常人群中，PTEN蛋白全部呈阳性反应，阳性率100.00%；在57例胶质瘤患者中，29例呈现PTEN蛋白阳性反应，阳性率为50.88%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。随着WHO分级提升，胶质瘤PTEN蛋白表达下降。胶质瘤中MMP-9和PTEN蛋白表达无相关性。

胶质瘤是一种特殊颅内肿瘤，属于多基因突变疾病，致病原因较多，包括癌基因激活、过度表达、抑癌基因突变等，因此在研究过程中，要结合多基因因素进行考虑。PTEN蛋白会调节多种酶和蛋白，使血管内皮生长因子活性发生改变，进而影响肿瘤细胞生长和侵袭，使细胞局部黏附和运动迁移能力发生变化。但是在本次实验中，无法证明PTEN蛋白对MMP-9有根本性影响，想要进一步验证二者之间的联系，需要进一步扩大研究对象数量，展开深入研究。

综上所述，在胶质瘤中，PTEN蛋白和MMP-9表达无相关性，但MMP-9表达升高和PTEN表达下降表明胶质瘤侵袭性升高。