葱、蒜粗提取液对贮藏期梨黑斑病的防治研究

高小宽

（衡水学院生命科学系，河北衡水 053000）

梨黑斑病是由丝孢纲丝孢目链格孢属真菌（Alternaria kikuchiana）引起的梨树主要病害之一，采收期发病最为严重，贮运期还可能继续发病。采前烂果率可达30%～50%，在贮藏后期该病的发病率可达37%[1]。

大蒜提取液中的抑菌活性成分是大蒜在粉碎过程中产生的，主要为大蒜酶酶解蒜氨酸产生的大蒜素和大蒜素进一步分解产生的其他含硫化合物，其成分多达18种以上，且易挥发成分抑菌活性最好[2]。目前，采用大葱、大蒜提取物对梨黑斑病的抑制尚未见报道。

本试验选用不同浓度的大蒜、大葱粗提取液，分别通过体内提取物对梨黑斑病抑制的最佳浓度，以期为大蒜、大葱提取物防治梨黑斑病提供依据，为新型生物防腐剂的开发提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

梨黑斑病菌为梨储藏期黑斑病，采自衡水旧城村梨园带病梨果，经储藏15d后取病组织分离得到梨黑斑病菌，40℃保存。新鲜的大蒜、大葱从市场购买获得。

将从室外购回的大蒜、大葱（去外表皮）分别在无菌的环境中，用75%的酒精棉球擦拭其表面，晾干。用灭菌的解剖刀和镊子去除表皮（注意不要污染内部组织），挑取内部组织0.1g，放入灭菌的研钵中加1mL无菌水充分研磨，静置。

1.2 方法

1.2.1 孢子悬浮液制备。取出预先培养好的备用病原菌参照方中达方法[3]，在无菌条件下，往培养好的菌种培养基上加入含有0.01%Tween80的无菌水10mL，用已消毒的毛笔将互隔交链孢孢子从培养皿上轻轻刮下，制成浓度为1×106CFU/mL的孢子悬浮液，悬浮液孢子计数采用在10×10倍显微镜下每视野30～35个分生孢子。

1.2.2 体内损伤接种试验。在无菌条件下，分别量取4、8、12、16、20mL葱、蒜粗提取液，分别加入100mL的PDA培养基中（PDA培养基制备参照方中达方法[3]进行），震荡摇匀后趁热倒入直径90mm的培养皿内。用灭过菌的直径为6mm的打孔器在菌落边缘钻取菌饼，用接种环挑取菌饼接种于含有杀菌剂的PDA培养基的中央，菌丝面向下，每个处理3次。把接好的培养皿倒置放在25℃光照培养箱中，共连续培养观察6d，记录并分析试验结果。

1.3 处理已经记录的试验数据

采用Microsoft Excel2010软件处理。

2 结果与分析

2.1 离体条件下两种植物粗提取物对梨黑斑病菌生长的影响

2.1.1 两种植物提取物对梨黑斑病菌丝的抑制作用。由表1可知，大蒜粗提取液对菌丝生长速率的影响大，在40mL/L浓度下菌落直径生长约20mm，在最大200mg/L浓度下仅生长约7mm。大葱粗提取液对菌丝生长速率的影响小，在最大200mg/L浓度下生长约45mm。

在浓度200mL/L蒜粗提取液的抑制率高达90.65%，同时在 40、80、120、160mg/L 的质量浓度下，抑制率均大于70%。而葱粗提取液在处理浓度下抑制率均小于40%，抑制效果不显著，不同浓度之间抑制率差异不显著。

表1 2种植物粗提取液对梨黑斑病菌丝生长的影响

2.1.2 2种植物粗提取液对病原菌丝的的毒力测定。由表2可知，大蒜粗提取液对病原菌的毒力最强EC50为6.304mg/L，大葱粗提取液对病原菌的毒力最强EC50为669.031mg/L，抑制作用最明显的是大蒜粗提取液。

表2 2种植物粗提取液对苹果斑点落叶病菌丝的室内毒力测定

综上所述，大蒜粗提取液对梨黑斑病菌丝生长的抑制率明显高于大葱粗提取液的抑制率。

2.2 大蒜粗提取液对贮藏期梨黑斑病的抑制

2.2.1 体内损伤接种试验的抑菌率。由表3可知，大蒜粗提取液在各个浓度下抑制率均大于50%。浓度为200 mL/L时抑制率最高为70.97%。

表3 大蒜粗提取液对梨黑斑病病斑生长的影响

通过表1和表3可知，大蒜粗提取液对梨黑斑病菌有直接抑制作用，大蒜粗提取液体内损伤接种试验抑制率相比离体培养试验的抑制率降低。

2.2.2 体内损伤接种的毒力测定。大蒜粗提取液的EC50为47.319 mg/L。

表4 大蒜粗提取液对梨黑斑病菌菌丝生长的毒力值

3 结论与讨论

大葱粗提取液和大蒜粗提取液对梨黑斑病的菌落生长、菌丝伸长和梨果实病斑扩展均具有不同程度的抑制作用，随着浓度的增加抑制作用越强。其中，对菌落生长抑菌效果最好的为200mL/L大蒜粗提取液的抑制率高达90.65%，对病原菌的毒力最强EC50为6.304mg/L。大蒜粗提取液体内损伤接种试验中200 mL/L的大蒜粗提取液抑菌作用最好，抑菌率为70.97%，毒力最强EC50为47.319mg/L。而大葱粗提取液在试验所选浓度下抑制率均小于40%，抑制效果不显著。

大葱粗提取液的抑制效果不如大蒜粗提取液的抑制效果明显，主要原因可能是大葱中大蒜素其类似物的含量不及大蒜中大蒜素的含量，或者是二者的最适温度不同（该试验是在相同的温度下进行的）。大葱和大蒜中能抑制梨黑斑病的有效成分及其作用环境（温度，pH值等因素）目前尚不明确，有待深入研究。