简述纳他霉素生产菌种摇瓶液的两种检测方法

李 梅

(浦城县投资开发公司,福建 浦城 353400)

纳他霉素是一种无臭、无味、低剂量且安全性高的食品防腐剂。既可以广泛有效的抑制各种霉菌，酵母菌的生长，又能抑制真菌毒素的产生，可广泛用于食品防腐保鲜以及抗真菌治疗[1-2]。

在纳他霉素产生菌的菌种选育中，需要建立一种对纳他霉素组分和含量的快速检测方法。由于干扰纳他霉素分析的因素较多，本文主要选择生物分析法和色谱分析法。

1 纳他霉素生产菌种摇瓶液的制备

(1)摇瓶种子瓶配方：玉米淀粉2%,G糖0.8%,黄豆饼粉1%；酵母粉0.8%,蛋白胨0.5%,碳酸钙0.2%。

(2)摇瓶发酵瓶配方：玉米淀粉6%,G糖0.75%,黄豆饼粉1.7%；酵母粉1.0%,碳酸钙0.2%。

(3)纳他霉素生产斜面菌种接种入种子瓶培养16h至摇瓶液无染菌种子液颜色变黄，有挂壁菌丝后，转接入摇瓶发酵瓶培养2天下摇床进行检测。

2 纳他霉素生产菌种摇瓶液生物分析法和色谱分析法

2.1 纳他霉素效价的生物检测法

2..1.1 含有摇瓶液的琼脂培养基制备

吸取不同的菌号的1mL摇瓶液到琼脂培养基中倒平皿备用。每个菌号3～5个重复。

2.1.2 制备酵母菌肉汤培养液

2g的酵母粉倒入25mL的肉汤培养液中40℃培养30min，肉眼可看肉汤培养中产生大量的气泡，肉汤变浑浊。

2.1.3 将制备好的酵母菌肉汤培养液倒入含有摇瓶液的琼脂培养基平皿中28℃培养24h。

2.1.4 观察抑菌圈的大小

用游标卡尺测量抑菌圈的大小，同一菌号的抑菌圈加和取平均值。选择抑菌圈大的菌株进行重复上摇瓶。

生物分析法利用抗生素在琼脂培养基中的扩散渗透作用，将已知浓度的标准溶液和未知浓度的样品在含有敏感性摇瓶液的琼脂表面进行扩散渗透，由于对被试菌的抑制作用而产生抑菌圈，抑菌圈的大小和抗生素的浓度之间有一定的比例关系。生物分析法利用抗生素抑制敏感菌的特点，适用于生产菌种的选育的实际情况。

2.2 纳他霉素效价的高效液相色谱法(HPLC)

纳他霉素效价的高效液相色谱法(HPLC)具有操作简单、精密度高等优点，已广泛应用于检测纳他霉素效价。大部份采用C18反相柱，纳他霉素在303nm左右有最大吸收峰，故检测器采用UV检测器。

2.2.1 摇瓶液的前处理

把摇瓶液稀释100倍。

2.2.2 进高压液相色谱仪

吸取0.1UL的摇瓶液入高压液相色谱仪，每个菌号做3～5个重复，直接测定读数。求平均值选择效价高的菌株进行进行重复上摇瓶

3 结语

纳他霉素分析干扰因素较多，生物分析法较为直观，操作不复杂，较适用于生产菌种大批量的筛选；高压液相色谱法测定的结果较为准确，一次性设备投资较大。