miR-155与类风湿关节炎相关性Meta分析

杨国梅 宁耀贵，2 钱红燕 陈世菊

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以慢性、进行性、多发性、侵袭性，以关节滑膜炎和关节外病变为主要临床表现的自身免疫性疾病，严重时导致患者功能障碍[1]。微小RNA（miRNA）是一种内源性、长度约22个核苷酸小型非编码单链RNA，通过抑制信使RNA的翻译起到转录后调节功能，参与机体重要的生理病理过程[2]。miR-155异常表达影响先天和适应性免疫反应，从而导致免疫性疾病的发展。本文针对类风湿关节炎人群中miR-155进行Meta分析，分析miR-155与RA发生风险。

1 资料与方法

1.1 文献检索

以 类 风 湿 关 节 炎、Rheumatoid Arthritis、microRNA155、microRNA-155、miRNA-155、miR-155、hsa-mir-155及 miR-155-5p为检索词，在Pubmed、Embase、CNKI、万方、维普数据库、中国学位论文全文数据库和中国重要会议论文全文数据库检索。检索时间从建库至2018年1月。同时手工搜索检索文献的参考文献。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准 同时符合以下条件的发表于英文期刊或者中文期刊的研究被纳入。（1）研究对象：①患者满足1987年American College of Rheumatology（ACR） 或 者 2010年 American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism（ACR/EULAR）类风湿关节炎分类标准；②对照组为健康人群。两组不论患者年龄、性别等。（2）研究类型：①病例对照试验；②评价miR-155与RA的相关性。

1.2.2 排除标准 （1）研究对象非RA人群；（2）对照组非健康人群；（3）数据重复文献；（4）综述类文章；（5）统计方法不恰当；（6）数据不全。

1.3 数据提取

由2名评价者独立提取，资料提取表格内容主要包括：第一作者姓名、出版年份、病例组及对照组年龄、性别、检测样本类型、种族、RA诊断标准、miR-155检测方法及扩增参照物。两位评估者检查提取的数据，并对所有数据达成了一致意见。2名评价者独立提取资料，并进行交叉核对，遇不同意见与第3名评价者讨论解决。

1.4 数据处理

采用Cochrane系统评价软件RevMan5.3进行Meta分析。本文对数据使用标准平均差（standardized mean difference，SMD）及其95%置信区间（confidence interval，CI）效应量表示。采用Z检验，P＜ 0.05为差异有统计学意义。采用I2统计检验确定各研究之间的统计异质性。当研究具有明显异质性（I2＞50%）时，采用随机效应模型进行Meta分析[3]。通过敏感性分析评价各研究对结果稳定性的影响。绘制漏斗图来判断发表偏倚，同时采用Egger检验评价报告偏倚。

2 结果

2.1 文献基本情况

初检共获得文献194篇，其中PubMed（n=29），Embase（n=138），万方数据库（n=6），维普数据库（n=12），和CNKI数据库（n=9）。文献检索过程见图1。排除87篇重复文献后剩余107篇，进一步排除15篇无关研究，43篇综述、摘要类文献，以及14 篇动物实验，最后35篇文献查找全文进一步筛查。排除27 篇文献，其中26篇无法提取数据或数据不足，1篇研究的对照组为非健康人群，最后Meta分析共纳入8篇文献[4-11]，包括2篇英文文献及5篇中文文献，共计273例RA患者和183例对照人群。7项研究数据来自中国，包括1个维吾尔族和6个汉族，只有1项研究是来自高加索人群。有2项研究同时检测了外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）和血浆样本中miR-155表达[6-7]。纳入文献基本特征见表1。

2.2 Meta分析结果

MiR-155与RA相关性的Meta分析结果见图2～4。不同的研究检测miR-155水平时使用了不同的检测标本，包括外周血PBMC、WBC、血清和血浆。其中有2个研究[6-7]文中提到使用的外周血单核细胞，文中细胞提取方法提取的应为外周血WBC，因此Meta分析时上述两个研究样本类型认为是WBC。基于检测样本的不同，进行亚组分析。

2.2.1 PBMC中miR-155与RA相关性 5个研究采用外周血PBMC细胞检测miR-155表达水平[4，6-9]，共有179例RA患者及127例正常对照。异质性检验提示研究间存在统计学异质性（I2=93%，P＜0.000 01），采用随机效应模型进行合并效应量估计。Meta分析结果显示RA患者PBMC中miR-155水平高于正常人群[MD = 1.10，95%CI（0.15，2.06）]，差异具有统计学意义（P=0.02）（图2）。

2.2.2 WBC细胞中miR-155与RA相关性 有2个研究采用WBC细胞检测miR-155表达水平[9-10]，共有60例RA患者及40例正常对照。异质性检验提示研究间有统计学异质性（I2=80%，P=0.03），采用随机效应模型分析。Meta分析结果提示WBC中miR-155表达水平不增加RA的发生风险[MD = 0.34，95%CI（-0.65，1.34）]，差异没有统计学意义（P=0.50）（图3）。

2.2.3 血浆miR-155与RA相关性 有2个研究同时检测了血浆中miR-155[6-7]；共有77例RA患者及45例正常对照。异质性检验提示研究间有统计学异质性（I2=87%，P=0.006），采用随机效应模型分析。结果显示血浆miR-155表达水平不增加RA的发生风险[MD = 0.24，95%CI（-0.83，1.31）]，差异没有统计学意义（P=0.66）（图4）。仅有一篇文献检测血清中miR-155表达水平。

2.2.4 敏感性和发表偏倚分析 通过敏感性分析评价各研究对SMD和95% CI的影响，相应的SMD无显著性变化。通过Begg漏斗图（P=0.858）或Egger回归（P＞0.1）没有发现miR-155与RA易感性之间的相关性存在发表偏倚（图5）。

表1 纳入文献基本特征

表1 续表

图1 文献筛选流程图

图2 PBMC中miR-155与RA风险Meta分析森林图

图3 WBC中miR-155与RA风险Meta分析森林图

图4 血浆miR-155与类风湿性关节炎风险Meta分析森林图

图5 miR-155与RA相关性漏斗图

3 讨论

miRNA参与炎症疾病致病机制，miR-155无疑是其中研究最为热门的miRNA之一，对疾病的诊断和预测具有巨大的潜在价值[12]。功能分析显示过表达miR-155或miR-155敲低都会导致自身抗体和促炎细胞因子产生异常[13]，与关节炎的发病机制相关。因此荟萃分析不同标本来源的miR-155与RA的相关性有助于探讨何种形式的miR-155是RA的风险因素，以及建议其作为一种诊断性生物标志物的合适检测标本。

本文Meta分析273例RA病例和183例健康对照组中miR-155与RA的关系。根据检测样本不同，我们分别进行PBMC、WBC和血浆亚组分析，仅PBMC 中miR-155与RA风险相关，提示其是RA的危险因素。WBC、血浆标本结果提示二者均没有相关。miR-155异常表达于RA患者外周血多种样本中，Meta结果提示检测PBMC中的miR-155结果可能更为稳定，外周血PBMC中miR-155可作为合适的检测标本。细胞外血浆容易受到凝血过程影响，从而影响血浆miRANs谱[12]，这可能部分解释了血浆miR-155与RA之间的阴性关系。此外不同研究采用miR-155表达方式和内参计算方法存在差异，也可能改变miRNA-155与RA相关性。本文纳入研究样本量少可能是另一个更为重要原因，今后需要更多的样本来进一步验证本文结论。

本人纳入文献研究对象主要是中国人群，包括汉族和维吾尔族，只有一项研究为高加索人。西方国家RA研究表明，miR-155在全血、血清、血浆、PBMC和Tregs表达均增高。有研究表明不同种族miRNA表达谱与循环miRNA浓度有关，这意味着miRNA谱特征在不同种族之间存在差异。

本文Meta分析存在一定局限性。首先纳入研究数量偏少，样本量也较小。亚组分析时血浆和WBC文献少，仅一项研究检测血清miR-155，无法得出相应结论，理解WBC和血浆的阴性结论也需谨慎。其次，本文纳入的研究以中文文献为主，因此结论外推到其他种族时需谨慎理解。总之本文Meta分析结果提示外周血PBMC中miR-155是RA的危险因素，今后需样本量更大、种族更多的研究来进一步验证二者风险关系。