HPLC测定排毒养颜胶囊中番泻苷A、番泻苷B含量
2019-02-14,,,*
, ,,*
(1.成都中医药大学 药学院,四川 成都 611130;2.成都市食品药品检验研究院,四川 成都 610045)
排毒养颜胶囊(原名:通便消痤胶囊)收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册[1],处方由大黄、白术、西洋参、芒硝、枳实、青阳参、小红参、肉苁蓉、荷叶等9味药材组成,现标准只有大黄的薄层鉴别。大黄为多基原中药,作为方中君药,其泻下通便主要活性成分为番泻苷A、番泻苷B,而不同基原、不同产地、不同生长年限、栽培、野生等因素对大黄中番泻苷A、番泻苷B的含量影响较大[2-5]。目前尚未有测定排毒养颜胶囊中番泻苷A和番泻苷B含量的报道,为进一步完善排毒养颜胶囊的质量评价体系,保证其临床用药的有效性,本试验采用高校液相色谱法,对制剂中番泻苷A和番泻苷B两种成分进行了含量测定研究,现报道如下。
1 仪器与材料
Agilent 1260 高效液相色谱仪;ME-204E电子天平;XPE-26电子天平;SK250H超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。番泻苷A对照品(批号:110824-201301,纯度94.7%)、番泻苷B对照品(批号:110825-201502,纯度95.6%)均由中国食品药品检定研究院提供。排毒养颜胶囊由云南盘龙云海药业有限公司提供,规格:0.4g/粒。流动相中乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用Sepax-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-5 mmol/L四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=5.0)(15∶85)为流动相,流速1.0 mL/min;检测波长340 nm;柱温35 ℃;进样量10 μL。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取番泻苷A、番泻苷B对照品各适量,置于100 mL容量瓶中,用0.1 %碳酸氢钠溶液溶解并稀释至刻度,制成混合对照品溶液(番泻苷A和番泻苷B浓度分别为2.635 mg/mL、1.086 mg/mL),色谱见图1。
2.2.2 供试品溶液 精密称取本品内容物5 g,置于具塞锥形瓶中,精密加入0.1 %碳酸氢钠溶液20 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率:250 W,频率:50 kHz)15 min,放冷,称重,用0.1 %碳酸氢钠溶液补足失重,摇匀,过0.45 μm微孔滤膜,即得。色谱见图1。
图1 高效液相色谱
2.3 线性关系考察
精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液0.1、0.25、0.5、1.25、2.5、5 mL分别置于10 mL容量瓶中,加0.1%碳酸氢钠溶液稀释至刻度,摇匀。精密取上述6种不同浓度的对照品溶液各10μL,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。以对照品进样量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归,得到番泻苷A和番泻苷B的回归方程分别为:Y=123.34X-0.936 8(R2=1)、Y=119.7X-0.6324(R2=1),分别在0.002 635~0.131 75μg、0.001 086~0.054 30 μg范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液10 μL,按“2.1”项下色谱条件连续进样6次,记录峰面积,番泻苷A和番泻苷B峰面积平均值分别为3 204.7、1 287.3,RSD分别为0.22%、0.07%,结果表明仪器精密度良好。
2.5 重复性试验
取同一批样品(170321)粉末,每份约5 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样,记录峰面积并计算含量。结果,番泻苷A和番泻苷B含量的平均值分别为1.358 5 mg/g、0.553 7 mg/g,RSD分别为0.83%、0.85%,表明该方法重复性良好。
2.6 稳定性试验
取同一批样品(批号170321)适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,于第0、2、4、8、12、24 h进样,测得番泻苷A和番泻B峰面积的RSD分别为0.86%、0.84%,表明供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。
2.7 加样回收试验
取已知含量的同一批样品(170321)6份,每份精密称取0.2 g,分别加入番泻苷A和番泻苷B对照品适量,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,在“2.1”项色谱条件下测定,计算回收率。结果见表1。
表1 加样回收试验结果
2.8 样品含量测定
取不同批次样品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,每批平行制备2份,在“2.1”项色谱条件下测定。结果见表2。
3 讨论
试验中分别考察了乙腈-5mmol/L四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=5.0)(15∶85)[6]、乙腈-0.1%三氟乙酸(梯度洗脱)、乙腈-0.1%磷酸(梯度洗脱)[7,8]、甲醇-0.1%磷酸(梯度洗脱)[9,10]等多个流动相体系。发现只有在使用乙腈-5mmol/L四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=5.0)(15∶85)作为流动相时,杂质干扰少,供试品分离度好,基线较平稳。
表2 样品含量测定结果 (mg/粒)
本试验虽能适用于排毒养颜胶囊的质量监测,但流动相中的四庚基溴化铵对实验人员、色谱仪器、环境的损害较大,尚需开发一种检测条件温和、环保、色谱分离度高、准确性高的分析方法。