牛的人工授精操作和妊娠鉴定

赵高峰

（周口市动物疫病控制中心，河南 周口 466000）

1 精液的收集和处理

可使用假阴道或电刺激射精法（即电刺激精囊和壶腹部）来采集公牛的精液。只要样本的质量较高，精子耐冻性和受胎率都应当正常。但对由于基因问题不能通过自然交配使母牛受孕的公牛，不应采用这种技术。

目前牛的人工授精大多数采用冷冻精液。冷冻精液可保质数年。单次采集精液后使用精液稀释液可以增加输精剂量、延长精液受胎率的保持时间、保护精子细胞使之免受温度或pH突然改变造成的影响，并延长精子的存活时间。精液的稀释一般都采用在柠檬酸盐缓冲卵黄稀释液或经热处理的脱脂乳中，加入甘油、糖、酶和抗生素。在冷冻时，最终将精液稀释、分装为每管0.5 mL，内含有2 000～3 000万个精子。精液稀释液一般都包含有A液和B液。

精液稀释的第一步是在相同温度下，如30℃，使用A液进行稀释。然后将稀释后的精液在40～50 min或更长时间内冷却至5℃。将稀释后的精液在该温度下保持3～4 h，以保证A液中的抗生素在被冷冻保护剂甘油抑制之前能够完全发挥作用。B液中含有甘油（如14%），在5℃下按同等体积加入至稀释后的精液中。每个人工授精中心有其标准稀释液和操作程序。在以牛乳为基础的稀释液中可加入甘油（11%～13%）。在冷冻之前应当将精液置于5℃下保持4～18 h。

为进行冷冻，通常将公牛精液分装在有适当标识的塑料管中（0.25或0.5 mL）。许多类型的细胞都已知有最佳冻存速率，而精子细胞可耐受的冻存速率比较宽泛。在生产实践中，首先将稀释后的精液置于液氮蒸汽进行冷冻，然后再放入液氮中（-196℃）。精液可以在液氮罐中安全贮存＞20年，在运输时也要将精液置于液氮罐中。必须对液氮罐中液氮量加以注意，以免在液氮罐损坏或液氮逐渐蒸发时出现精子死亡。由于精子细胞在解冻后存活时间较短，因此最好精液解冻后应立即使用。精液解冻应尽快进行以避免因过热而造成精液损失。在生产实际中，可以将冻精管放在温水中（35～36.5℃）≥30 s，进行解冻，然后立刻将精液输入母牛生殖道内。应遵循处理精液的人工授精中心提供的操作规范。

2 人工输精技术

用一次性毛巾彻底清洗外生殖器，然后一只手戴上手套后插入直肠内，握住子宫颈。将装有精液的输精管通过外阴和阴道直接插入子宫颈外口。通过子宫颈上的操作，随着轻轻按压输精管尖端，即可将输精管穿过子宫颈皱襞进入宫颈口与子宫的交界处。应当缓慢输注精液（5 s），以避免造成精子死亡。最佳授精时间是发情期的后半期到随后的6 h之内。

虽然高受孕率与除精液之外的许多因素相关，但如果在人工授精时出现受孕问题，就应当对精液进行检查。解冻后精子的运动力是一个重要指标。在人工授精时注入足够数量的活精子细胞是至关重要的。检查精子细胞的形态也有助于评估不孕症中精子的作用。在牛群内，对使用可疑精液和使用其他公牛精液的妊娠鉴定情况进行比较是十分有用的。发情鉴定仍然是影响人工授精效率的最重要因素。最先检查的应当是发情鉴定，其他的检查包括解冻温度、实际输精时的解冻时间、从解冻到输精的温度变化、输精的部位和速度，以及卫生消毒程序。如果采购的精液来源于信誉良好的供应商，不孕通常不会是由于精液质量问题造成的。

3 妊娠鉴定

要实现繁殖效率的最大化，建议进行妊娠鉴定。以肉牛为例，肉牛群的理想繁殖期（无论采用自然交配，还是人工授精）应固定在60～70 d。在此期间，一般母牛都会有2～3次配种妊娠的机会。应当鉴别出未妊娠或仍然需要配种的母牛；如果将这些牛仍然饲养在牛群中，以后还可能会产犊。这些母牛的维持成本很高但很重要，且不同牛场和不同年份差异很大。

肉牛的妊娠鉴定应当在配种期结束后立即（如45～60 d）进行。如果配种期是在6月1初开始、8月初结束，那么就应在9月下旬开始进行妊娠鉴定，此时牛群还在继续享用丰盛的夏季牧草。然后，可能会在昂贵的冬季饲养开始前出售未妊娠的母牛。先对奶牛进行检查以确定其妊娠状态，以及是否要使用前列腺素F2α对未妊娠母牛进行同期发情，或定时进行人工授精。对未妊娠母牛或尚未进行发情检查的母牛，则通过评估卵巢中的黄体、卵泡和卵巢囊肿来决定使用哪种激素来诱导发情。妊娠鉴定和卵巢检查最常用的方法是直肠触诊。而最近应用更为普遍的一种替代方法是超声检查法。超声检查法具有以下优点：可以较早检查出非妊娠母牛（配种后28～32 d），也可以获得卵巢和子宫状态的诊断信息。可以评估胚胎或胎儿的活力。可以更容易检查到双胞胎。可以确定胎儿的性别。可以更准确地确定胎儿月龄。可以显示妊娠牛的孕体。

在对母牛进行妊娠鉴定时，可考虑同时进行牛群的其他健康检查。这些检查项目包括评估体况、生殖道、乳头和乳房、腿部和蹄部、口腔的早期病变。此时还可以进行疫苗免疫接种、体内和体外寄生虫的控制以及肉用牛犊的处理。