保心宁胶囊质量标准提升研究

何玉涛1 林凡友* 卞常芝 秦承盟

1.仁和堂药业有限公司，山东 临沂 276600；2.翔宇药业股份有限公司，山东 临沂 276023

保心宁胶囊是由丹参、当归和枳壳的干浸膏及三七4味药组成，具有活血化瘀、行气止痛之功效。临床上用于心绞痛、心律失常，改善冠心病症状等[1]。本产品执行标准为卫生部药品标准中药成方制剂第十一册药品标准，检验项目极其简单，没有含量检测等定量控制指标。为了更好地控制该产品的质量，定量定性检测有效成分，特对质量标准进行提高。研究表明丹参具有较强的药理作用[2-3]，多以治疗心血管系统疾病为主，主要成分为丹参酮IIA、丹参素等，为准确控制药品质量，用甲醇提取有效成分，高效液相检测，进行丹参含量测定。三七、枳壳分别增加薄层鉴别检查项，定性检测其成分，为控制产品质量提供更有效措施。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪，MS105DU型电子天平。丹参对照药材(批号120923-201615)；枳壳对照药材(批号120981-201605)；丹参酮IIA对照品(批号110766-201721)；人参皂苷Rg1对照品(批号110754-201324)；三七皂苷R1对照品(批号110745-201318)对照品均来源于中国食品药品检定研究院，甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。保心宁胶囊样品来源于翔宇药业股份有限公司提供，批号为150101、150302、150401、150402、150403、150902、160503、161001、161102、170302。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 三七 取本品内容物，研细，称取1.0g，加甲醇15mL，超声处理1h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1对照品、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1mL各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水(2∶4∶1∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟。供试品色谱图中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点，而阴性供试品溶液在相应位置无斑点。

2.1.2 丹参 取本品内容物，研细，称取4.0g，加甲醇40 mL，加热回流提取1 h，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取丹参酮IIA 1.0 g、丹参对照药材1.0 g，同法制成对照品及对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(95∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。供试品色谱图中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性供试品溶液在相应位置无斑点。

2.1.3 枳壳 取本品内容物，研细，取约0.5 g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取枳壳对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105 ℃加热约5 min，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性供试品溶液在相应位置无斑点。见图1。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱为 thermo C18柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-乙腈-水=(325∶100∶125)，检测波长270 nm，流速1.0 mL·min-1，柱温为室温25 ℃，进样量为10 μL。理论板数按丹参酮IIA峰计不低于3000。

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1 供试品溶液的制备 取本品内容物适量，研细，称取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理(功率140 W，频率42kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2.2 对照品溶液的制备 取丹参酮IIA对照品适量，精密称定，加甲醇制成高浓度的对照品储备液，取对照品储备液适量再加甲醇稀释至每1 mL约含15 μg的溶液，即得对照品溶液。

2.2.2.3 阴性供试品溶液制备 取除丹参外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺丹参的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺丹参的阴性样品溶液。

2.2.3 专属性试验 分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪中测定。结果表明理论板数按丹参酮IIA峰计算大于3000，丹参酮IIA和样品中其它组分峰可基线分离，且与其相邻色谱峰的分离度大于1.5；阴性供试品溶液对主峰检测无干扰，表明该方法专属性良好。如图2所示。

2.2.4 线性试验 精密吸取丹参酮IIA对照品溶液储备液适量，分别加甲醇稀释成浓度为3.62 μg·mL-1、7.24 μg·mL-1、14.48 μg·mL-1、18.1 μg·mL-1、21.72 μg·mL-1、28.96 μg·mL-1的溶液，分别精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：A=60.395C-20.83，r=0.9998。结果表明丹参酮IIA在3.62～28.96 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 取对照品溶液重复进样6次，测定峰面积。结果表明：丹参酮IIA的峰面积的RSD为0.22%，表明该方法的系统精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 将150402批供试品溶液于室温条件下放置12h，分别于0、1、2、4、6、8、12h精密量取10μL注入液相色谱仪测定。结果表明，在室温条件下放置12h内，所得丹参酮IIA的峰面积的RSD为0.29 %，供试品溶液在12h内稳定性良好，保心宁胶囊的丹参酮IIA含量为0.22mg·粒-1。

2.2.7 回收率试验 取同一批样品(批号：150402，含量为0.22 mg·粒-1，每粒0.45g)，设计高、中、低3个不同浓度，高、中、低浓度丹参酮IIA对照品加入量与所取供试品中待测定成分量之比控制在1.5∶1、1∶1、0.5∶1，各分别制备3份供试品溶液进行测定。结果见表1，丹参酮IIA的平均回收率为98.81%，RSD为2.55%。

表1 回收率测定结果 (n=9)

2.2.8 耐用性试验 分别使用正常色谱条件，不同柱温(25±5)℃、不同波长(270±2)nm、不同流速(1.0±0.1) mL·min-1、不同流动相比例、不同色谱柱thermo C18 (250 mm × 4.6 mm，5 μm)、Agilent C18 (250 mm × 4.6 mm，5 μm)进行测试，分别计算对丹参酮IIA含量进行考察。结果所有丹参酮IIA含量的RSD为1.54%，含量耐用性较好。

2.2.9 样品含量测定 测定10批保心宁胶囊，依次吸取对照品溶液和供试品溶液10 μL，注入高相液相色谱检测丹参酮IIA含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

从以上10批保心宁胶囊样品的含测结果可知，每粒样品中丹参酮IIA的含量范围为0.19～0.29 mg，考虑到丹参药材产地、采收季节、工业大生产中有效成分转移率、有效成分稳定性等因素对样品中丹参酮IIA含量的影响，为保证产品在有效期内有效成分含量符合质量标准要求，暂定每粒样品中含丹参以丹参酮IIA计不得少于0.12 mg。

3 讨论

3.1 TLC鉴别 在保心宁胶囊原有标准中，鉴别项仅规定了最大吸收波长及一个显色鉴别，不能准确控制产品有效成分，经查阅文献及实验研究，对保心宁胶囊中的三七、丹参和枳壳都增加了TLC鉴别项。分别查阅不同文献[4-6]研究不同的展开剂对鉴别的影响，考察高温高湿等条件对TLC方法进行耐用性验证，制定最有效的鉴别方法，经考察阴性供试品对样品的定性鉴别无干扰，该方法的专属性较强。

3.2 含量检测 丹参为方中君药，主要成分为丹参酮IIA、丹参素等，因此将丹参中丹参酮IIA作为本品质量控制的指标成分。本文以甲醇为提取剂，采用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA含量。采用紫外分光光度计对丹参酮IIA溶液进行全波长扫描，结果在270nm波长处有最大吸收，故选择270nm作为本品的测定波长。分别考察甲醇-乙腈-水(325∶100∶125)、甲醇-水(75∶25)为流动相，结果以甲醇-乙腈-水(325∶100∶125)为流动相时，丹参酮IIA峰形对称，分离度大于1.5，理论板数大于3000，故确定甲醇-乙腈-水(325∶100∶125)为流动相。该方法经方法学验证，丹参酮IIA在3.62～28.96μg·mL-1范围内线性关系良好，平均回收率为98.81%，耐用性RSD为1.54%，对10批样品含量进行检测结果稳定，说明该方法准确度高，耐用性强，能有效控制保心宁胶囊的质量。

综上所述，采用高效液相色谱法对保心宁胶囊中丹参酮IIA含量进行检测，专属性好，准确度高；并对处方中的三七、丹参和枳壳都增加了鉴别项进行定性控制，能有效控制保心宁胶囊的质量，对保心宁胶囊质量标准的制定有一定提升作用。