药物及生物样品中氨曲南的荧光分析新方法探讨

2019-02-11胡伟光

质量安全与检验检测 2019年6期

胡伟光

（山东省禹城市辛店镇中心卫生院山东禹城 251206）

1 前言

氨曲南是一种特殊类型的抗生素药物，其对需氧革兰阴性菌感染有较好的应用效果，但对革兰阳性菌感染治疗效果较差，即氨曲南的抗菌谱较窄[1]。通过对药物以及生物样品中氨曲南水平进行检测，能够进一步规范氨曲南的临床使用，保证患者的用药安全[2]。目前，可用于氨曲南检测的方法较多，如原子吸收法、液质联用法、紫外可见分光光度法，不同方法在具体应用方面均有一定的局限性[3]。本文通过罗丹明B和氨曲南建立新的荧光分析方法，取得了较好的实验效果。

2 仪器设备与相关试剂

上海雷磁精密酸度计pHS-3C；日立F-7000荧光分光光度计；氨曲南（中国食品药品检定研究院），质量分数为96.9%，简写为ATN，批号为：130507-201303；样品：市面上出售的氨曲南药物（无片剂型）；尿液。

标准溶液为435.4mg/L的贮备液，选取氨曲南对照品并完成准确称量，称量后在样品中加入少许甲醇，对照品完成溶解后，将其倒入100 mL容量瓶中，完成定容，并在4℃条件下保存备用，最终操作液质量浓度：43.54mg/L。罗丹明B（成都贝斯特试剂有限公司）的质量分数为99%，具体浓度：1.00×10-4mol/L。三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液：其中，三羟甲基氨基甲烷（Tris）浓度为 0.20mol/L，盐酸浓度为 0.10mol/L，盐酸与Tris混合后通过酸度计使其形成pH3.0～9.5的一系列溶液。选择二次蒸馏水作为实验用水。

3 实验过程

3.1 样品预处理

分别购买市面上销售且不同规格的1支注射用氨曲南，记作1#和2#。不同烧杯中放置样品，加少量甲醇，溶解氨曲南，转入1 000 mL容量瓶中，用水稀释达到刻度位置，选择10 mL 1#稀释液与5mL 2#稀释液，均通过水定容达到100 mL，分别记作1#待测液、2#待测液。

3.2 实验方法

于10 mL具塞比色管中移入2 mL罗丹明B溶液，然后加入Trip-盐酸溶液，pH=6.55，再加入适量标准液，通过蒸馏水完成定容，充分混合，在（20±2）℃条件下放置15 min，通过荧光光度计在激发波长/发射波长=556 nm/583 nm下对体系、空白试剂以及相关样品的荧光强度F和F0进行检验。所有操作均由经验丰富人员完成，并记录相关数据。

4 实验结果与讨论

4.1 氨曲南-罗丹明B光谱激发与发射

通过对氨曲南-罗丹明B激发光谱、发射光谱研究与分析，对最大激发波长扫描发射光谱与最大发射波长扫描激发光谱对应反应结果分析[4]，激发峰与发射峰在λex=556nm、λem=583nm的情况下较为稳定且有最大值（图1和图2），所以将上述参数作为测定波长。通过对激发与发射光谱分析，氨曲南固有荧光很微弱，罗丹明B在水溶液中能够发射出玫瑰红荧光，通过在罗丹明B溶液中加入pH=6.55的Tris-盐酸溶液以及氨曲南溶液，整个体系出现荧光猝灭现象，即一定浓度的氨曲南同整个体系荧光猝灭存在较好的相关性，说明整个新体系能够用于氨曲南的测定[4]。

图1 氨曲南-罗丹明B光谱激发与发射

图2 氨曲南-罗丹明B发射光谱示意图

4.2 不同试剂加入顺序分析

整个实验体系中包括多种试剂，如氨曲南、罗丹明B、Tris-盐酸，通过对不同试剂加入先后顺序分析与评价，研究证实最佳顺序为：（1）罗丹明 B；（2）Tris-盐酸；（3）氨曲南。根据上述顺序加入试剂，可保证整个检测体系具有较高的灵敏度以及较大的荧光猝灭。

4.3 反应时间分析以及形成缔合物的稳定性

反应时间长短也会影响整个检测体系灵敏度以及荧光反应猝灭，按照实验数据分析，溶液混合后最初15 min内，荧光反应并不完全；反应超过15 min后，荧光度变化基本稳定，证实已经完成了反应，后续1 h内整个体系缔合物基本稳定，综合时间分析，可在不同溶液混合15 min后实施测定。

4.4 共存物质影响分析

氨曲南溶液浓度为4.35mg/L时，分析糖类、阳离子、阴离子、氨基酸等对整个体系的影响。研究分析显示，如果相对误差不超过±5.00%，以下分子或离子均不会影响体系的检验结果：（1）200倍的蔗糖、葡萄糖、氯离子、麦芽糖、铵根离子、钠离子、钾离子、L-亮氨酸；（2）100倍的碘离子、镁离子、硫酸根例子、铅离子；（3）50倍的铁离子、钙离子、汞离子、淀粉、尿素；（4）20 倍的银离子、锡离子；（5）10 倍的三价铁离子、铝离子。证实整个体系应用范围较广。