山东省生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的污染状况及耐药性分析

赵效南 苑晓萌 张印 胡明 王文博 刘玉庆

摘要：本研究于2015—2016年从山东省主要乳制品生产城市的生鲜乳罐装车中采集412份生鲜牛乳样品，对其进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定，并采用微量肉汤稀释法对金黄色葡萄球菌进行药物敏感性试验。结果表明，从412份生鲜牛乳中共分离到148株金黄色葡萄球菌，分离率为35.8%;金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率最高，为77.7%，其次为红霉素，耐药率为58.1%，对万古霉素和阿莫西林/克拉维酸的耐药率较低，分别为0.7%和1.4%，所有菌株對利奈唑胺表现为敏感。本研究结果可为山东地区生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的监测与防控，以及养殖场中抗生素的规范使用提供参考。

关键词：金黄色葡萄球菌;生鲜牛乳;污染状况;耐药性

中图分类号：S432.4+2 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2019）12-0096-04

Abstract In the study， four hundred and twelve fresh milk samples were collected from the fresh milk canning trucks in the main dairy production cities of Shandong Province during 2015-2016. The S. aureus was isolated， identified and conducted antibiotic sensitivity tests by micro-broth dilution method. The results showed that 148 strains of S. aureus were isolated with the isolated rate as 35.8%. S. aureus had the highest resistance rate to penicillin as 77.7%， followed by erythromycin with the resistance rate as 58.1%， but had lower resistance rates to vancomycin and amoxicillin/clavulanic acid showing as 0.7% and 1.4%， respectively.All strains were sensitive to linezolid. The results could provide references for the monitoring and prevention of S. aureus in fresh milk， and regulate the use of antibiotics in farms of Shandong Province.

Keywords Staphylococcus aureus; Fresh milk; Contamination Status; Antimicrobial resistance

金黄色葡萄球菌是一种条件性致病菌，常存在于环境以及人和动物的皮肤和粘膜中[1]，可导致多种感染，包括关节炎、尿路感染、乳腺炎和亚临床乳腺炎等，还可引起人体浅表皮肤感染甚至引发严重致命的侵入性疾病[2]，通常由生鲜牛乳和乳制品加工厂中分离得到[3]。

奶牛乳房炎在奶牛养殖业中发生最为普遍，被认为是世界上最昂贵的奶牛疾病之一，通常由微生物引起，而金黄色葡萄球菌是该病最主要的致病菌[4]。患有乳房炎的奶牛通常会将大量细菌带入牛奶供应链中，被污染的牛奶可能含有能够引起食物中毒的致病菌株，从而对公共安全造成危害[5]。目前，抗生素是治疗金黄色葡萄球菌的主要药物，但随着大量使用，耐药菌株不断出现，甚至出现“超级细菌”[6]。近几年，有关生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的耐药性研究相对缺乏。因此，本研究从生鲜牛乳中进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定并对该细菌的耐药性进行分析，旨在为我国奶牛乳房炎治疗选择合适抗生素，同时为动物性食品安全和人类公共健康提供合理的检测数据。

1 材料与方法

1.1 样品采集

2015—2016年，分别从山东省主要乳制品生产城市的生鲜乳罐装车中采集412份生鲜牛乳样品，其中济南市130份、潍坊市114份、日照市14份、泰安市62份、德州市32份、临沂市60份。每辆运输车取样1次，取样前需搅拌生鲜牛乳，将所取样品置于冰盒中，立即带回实验室进行细菌学分析。

1.2 金黄色葡萄球菌的分离与鉴定

分别对412份生鲜牛乳样品进行倍比稀释，再涂布到Baird-Parker琼脂培养基上，35℃需氧培养24～48 h。对于每个样本，取4个具有典型金黄色葡萄球菌外观特征（黑色外观并被透明圈包围）的菌落进行纯化，再通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行确定，并用甘油保存于-20℃。

1.3 药敏试验

采用美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute， CLSI）推荐的微量肉汤稀释法，对试验分离鉴定的金黄色葡萄球菌进行18种抗菌药物最小抑菌浓度的测定。抗菌药物包括：青霉素、阿莫西林/克拉维酸、红霉素、克林霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、头孢噻呋、头孢西丁、磺胺异恶唑、苯唑西林、万古霉素、复方新诺明、多西环素、氟苯尼考、泰妙菌素、替米考星、庆大霉素、利奈唑胺。以大肠埃希菌ATCC25922作为药敏试验质控菌株，结果判定及质量控制按2018年CLSI标准进行[7]，将所有金黄色葡萄球菌分为S（敏感）、I（中度敏感）和R（耐药）。本试验抗生素判定标准见表1。

1.4 数据分析

采用Microsoft Excel 2016软件对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 金黄色葡萄球菌的分离鉴定结果

经鉴定，412份生鲜牛乳中共分离出148株金黄色葡萄球菌，分离率为35.9%（表2）。

2.2 药敏试验结果

本试验采用微量肉汤稀释法，对148株金黄色葡萄球菌进行了18种抗生素药物敏感性检测。结果（表3）显示，金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率最高，为77.7%;其次为红霉素，耐药率为58.1%;对克林霉素和磺胺异恶唑的耐药率均为37.8%;对万古霉素和阿莫西林/克拉维酸的耐药率较低，分别为0.7%和1.4%，而所有菌株均对利奈唑胺表现为敏感。

3 讨论与结论

金黄色葡萄球菌对牛群和生鲜牛乳的污染是乳制品生产环节中的一个重要问题[8]。Hennekinne等[9]认为乳品厂原料乳中金黄色葡萄球菌的存在，是乳制品食品链的潜在威胁，污染严重可导致食源性疾病的爆发。Asao等[10]报道的史上最大的食源性疾病爆发的起因就是食品中细菌的污染，涉及13 420名感染者。此外，乳品业的成本负担巨大，牛群动物的乳房炎会导致产奶量显著下降，相关的兽医和治疗成本也会大大增加，在某些情况下需要宰杀病牛[9]。因此，本研究对生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的分离鉴定和药物敏感性检测结果，可在一定程度上了解生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的污染情况和耐药性，为生产中药物使用提供帮助，具有一定的现实意义。

本研究生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的分离率为35.9%，高于杜琳等[11]报道的从内蒙古自治区等五省区牛乳中金黄色葡萄球菌12.1%的分离率，但低于田会丽等[12]报道的石河子地区的70.83%的分离率，与吴星星等[13]报道的乌鲁木齐地区生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌33.7%的分离率结果相当。而国外生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的分离情况希腊西北部为40%[14]，意大利为53.5%[15]，美国为62.0%[16]，巴西为56.0%[17]。因此，金黄色葡萄球菌分离率的不同可能跟样本量大小、样品储存方法、分离方法、地区和季节等因素有关。

本研究中，148株金黄色葡萄球菌对大部分抗生素呈现不同程度的耐药性。它们对青霉素的耐药率最高，为77.7%，低于阚秋琪等[18]研究的江苏省某奶牛场金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率（100%），但高于McMillan等[19]报道的维多利亚地区对青霉素15.4%的耐药率，这可能与奶牛养殖过程中青霉素使用量或使用不合理有关;对红霉素的耐药率为58.1%，稍高于吴星星等[13] 研究的对红霉素40.0%的耐药率，但低于邱梅等[20]报道的对红霉素100%的耐药率;对利奈唑胺、万古霉素和阿莫西林/克拉维酸耐药率较低，与王秋冬等[21]的检测结果一致，这与养殖场中较少使用这些抗生素有关。

综合分析可知，山东地区生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌污染比较严重，并且该菌耐药性存在差异，因而建议生产上应根据实际情况合理使用抗生素，同时加强对生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的监控。

参 考 文 献：

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