抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗体诊断自身免疫性溶血性贫血的分析

2019-01-19杜汉芳许海军

国际检验医学杂志 2019年1期

杜汉芳，许海军，赵颖

(十堰市太和医院：1.检验科；2.心内科，湖北十堰 442000)

自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是一类由于B淋巴细胞功能亢进而使体内产生抗自身红细胞(RBC)抗体，并通过该抗体激活补体或直接与RBC表明抗原结合导致靶RBC破裂的获得性溶血性疾病[1]。AIHA主要见于青年人群，危险性大，严重者可发生高热、急性心功能衰竭、肾衰竭等并发症[2]。目前，对AIHA的诊断多为排他性诊断，主要检测项目有网织红细胞计数、血红蛋白(Hb)、RBC形态学镜检、乳酸脱氢酶(LDH)和总胆红素(TBIL)等。但因其发病机制尚未明确，且患者临床症状不典型，为疾病的早期诊断及救治带来一定困难。近年来，有研究表明，包括抗髓过氧化物酶(MPO)、抗肾小球基膜(GBM)、抗蛋白酶3(PR3)、抗Ku抗体等多种自身抗体在多种自身免疫性疾病中可被检测到，成为疾病诊断的潜在生物学标志物[3-5]。同时，因多个自身抗体与多种疾病间的网状关联关系，使单独应用某一个标志物作为诊断指标对自身免疫性疾病的早期诊断的难度加大，联合多个指标将显著提高对疾病的诊断效能。本研究收集本院AIHA患者、其他自身免疫性疾病患者和健康体检者血液样本，探讨了血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗体诊断AIHA的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2015年2月至2017年8月本院收治的AIHA患者133例，所有AIHA患者的诊断均符合《血液病诊断及疗效标准》，其中男51例，女82例；原发性AIHA患者94例(原发性AIHA组)，继发性患者39例(继发性AIHA组，其中继发于系统性红斑狼疮16例、类风湿性关节炎17例、甲状腺疾病6例)。选择同期患有其他自身免疫性疾病患者55例(其他自身免疫性疾病组，其中系统性红斑狼疮22例、类风湿性关节炎13例、甲状腺自身免疫病10例、硬皮病4例和其他疾病6例)和健康体检者106例(体检组)。所有研究对象均排除恶性肿瘤、急性与慢性感染、正在接受免疫治疗和妊娠期妇女等。本研究的开展经医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2血液标本收集与处理使用乙二胺四乙酸抗凝采血管采集研究对象静脉血2 mL用于血常规检测；使用含有促凝剂的一次性真空采血管收集研究对象静脉血5 mL，待血清析出后，于3 500 r/min离心15 min后收集血清标本于-20 ℃冰箱储存备用。

1.3实验室指标检测相关血常规指标检测采用DxH800血细胞分析仪(美国贝克曼库尔特公司)完成，相关生化指标检测采用全自动生化分析仪AU5800(美国贝克曼库尔特公司)完成。血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗体检测均采用免疫印迹法，检测试剂均购自欧蒙医学诊断(中国)有限公司。检测过程严格按试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1研究对象的临床特征各组研究对象年龄、性别、吸烟史和饮酒史比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，Hb、RBC、LDH和TBIL比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。与体检组比较，原发性AIHA组患者Hb、RBC和继发性AIHA组患者Hb、RBC水平均显著降低，差异均有统计学意义(t=-5.104、-3.231，-4.643、-2.311；P<0.05)，原发性AIHA组患者LDH、TBIL和继发性AIHA组的LDH、TBIL水平均显著升高，差异均有统计学意义(t=8.809、3.133，7.991、2.959；P<0.05)。与其他自身免疫性疾病组比较，原发性AIHA组患者Hb、RBC和继发性AIHA组患者Hb、RBC水平均显著降低，差异均有统计学意义(t=-4.786、-3.354，-4.576、-2.326；P<0.05)，原发性AIHA组患者LDH、TBIL和继发性AIHA组患者LDH、TBIL水平均显著升高，差异均有统计学意义(t=8.532、3.176，7.881、2.805；P<0.05)。而原发性AIHA组患者Hb、RBC、LDH、TBIL与继发性AIHA组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2各组研究对象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗体检测阳性数比较各组研究对象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体检测结果比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。与体检组比较，原发性AIHA组患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体和继发性AIHA组患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体阳性数均显著升高，差异均有统计学意义(χ2=6.214、4.431、7.001，5.168、9.219、6.111；P<0.05)。与其他自身免疫性疾病组比较，原发性AIHA组患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体和继发性AIHA组患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体阳性数量均显著升高，差异均有统计学意义(χ2=5.677、4.398、6.719，5.104、9.287、6.912；P<0.05)。单独应用抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体诊断AIHA的灵敏度分别为74.4%、45.1%和82.0%，特异度分别为93.3%、95.3%和92.5%。与原发性AIHA比较，继发性AIHA组患者抗GBM抗体阳性数显著升高，差异均有统计学意义(χ2=2.091，P<0.05)。而各组患者抗Ku抗体检测结果比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.3血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体与AIHA临床特征的关系不同性别、年龄，有无吸烟、饮酒史，不同Hb、RBC、LDH、TBIL水平AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体阳性数比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

2.4风险评估血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体与AIHA的发生有关(单因素分析)，在校正了年龄、性别、吸烟、饮酒等因素后血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体仍与AIHA的发生相关(多因素分析)。见表4。

表1 研究对象的临床基本信息

注：与体检组比较，*P<0.05；与其他自身免疫性疾病组比较，#P<0.05

表2 各组研究对象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗体检测阳性数比较[n(%)]

注：与体检组比较，*P<0.05；与原发性AIHA组比较，△P<0.05；与其他自身免疫性疾病组比较，#P<0.05

表3 AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体阳性数与临床特征的关系(n=133)

续表3 AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体阳性数与临床特征的关系(n=133)

表4 血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗体对AIHA的预测价值

3 讨论

发生AIHA时机体自身产生抗RBC抗体导致RBC溶解破裂，使循环中携带氧的RBC数量不足而产生一系列症状，如乏力、黄疸等[6]。国外相关数据显示，AIHA患者占溶血性疾病的30.0%，国内AIHA的发生率占获得性溶血性贫血的第2位，仅次于阵发性睡眠性血红蛋白尿病[7]。

AIHA的发生可由多个不同类别的抗体参与，并以免疫球蛋白G(IgG)和IgM类抗体为主。同时，根据所涉及的自身抗体不同，疾病的病理学表现又会有所不同。目前，对AIHA的诊断多为排他性诊断，大多数患者确诊时体内溶血过程已发生并造成了相应的病理学和功能学改变，有的甚至造成了严重的并发症，如急性肾衰竭、重度贫血，甚至休克等[8-9]。如何早期诊断AIHA并及时采取有效预防措施是临床医生关注的重点之一。

抗MPO、抗PR3抗体均属抗中性粒细胞质抗体，起初研究发现，主要是针对自身中性粒细胞的细胞质成分。抗GBM抗体是由多种组分形成的细胞外基质混合体，主要成分为胶原Ⅳ，最初在肺出血-肾炎综合征患者中被发现。近年来，有研究表明，在原发性和过敏性肉芽肿性血管炎、抗肾小球基底膜疾病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、韦格纳肉芽肿等多种自身免疫性疾病中检测到患者血清抗MPO、抗PR3、抗GBM抗体阳性[10-12]。提示抗MPO、抗PR3、抗GBM抗体在多种自身免疫疾病的发生中均具有重要作用。由于多个自身抗体与多种疾病间的网状关联关系，使单独应用某一个标志物作为诊断指标对自身免疫性疾病的早期诊断的难度加大，联合多个指标将显著提高对疾病的诊断效能。

本研究通过收集本院AIHA患者、其他自身免疫性疾病患者和健康体检者血液样本，探讨了血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗体诊断AIHA的临床价值，结果显示，与体检组和其他自身免疫性疾病组比较，原发性和继发性AIHA组患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体阳性数均显著增加；与原发性AIHA组比较，继发性AIHA组患者抗GBM抗体阳性数显著增加。单独应用抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体诊断AIHA的灵敏度分别为74.4%、45.1%和82.0%，特异度分别为93.3%、95.3%和92.5%。在校正了年龄、性别、吸烟、饮酒等因素后血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体仍与AIHA的发生相关。提示血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗体在AIHA的早期发现中具有潜在价值。