HBV-DNA实时荧光定量检测程序的测量不确定度评估及分析

2019-01-19刘伟平杨新春殷明刚

国际检验医学杂志 2019年1期

刘伟平，杨新春，殷明刚

(自贡市第一人民医院检验科，四川自贡 643000)

测量不确定度是一个与测量结果相联系的参数，其表征合理地赋予被测量之值的分散性[1-2]。国际标准化组织(ISO)15189：2012《医学实验室质量和能力的专用要求》明确指出，实验室应为检验过程中用于报告患者样品被测量值的每个测量程序确定测量不确定度。实验室应规定每个测量程序的测量不确定度性能要求，并定期评审测量不确定度的评估结果[3]。因此，进行测量不确定度评估对实验室具有重要意义。检验项目的不确定评定可通过实验室的室内质量控制和室间质量评价数据计算出来[4-7]。本研究采用实验室室内质量控制的中间精密度和卫生部室间质量评价结果，计算了乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量项目的测量不确定度。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 StrataGene Mx3005P实时荧光定量PCR仪购自美国Agilent公司，HBV-DNA荧光定量检测试剂盒购自湖南圣湘生物科技有限公司，室内质控品为自制质控品。

1.2方法

1.2.1检测程序每年定期对StrataGene Mx3005P实时荧光定量PCR检测系统进行校准，同时，每年对HBV-DNA荧光定量检测试剂盒进行性能评价，每批次试剂均进行留样再测比对，确定检测试剂盒的性能达到要求。自制HBV-DNA室内质控品，保存于-70 ℃超低温冰箱，使用前进行全面性能评价，稳定性好。

1.2.2中间精密度测定收集2016年10-12月获得的相同批号室内质控结果，计算批间变异系数(CV%)，其数值等于实验室内测量重复性引入的相对测量不确定度[urel(Rw)]。

2 结果

2.1偏倚引入的测量不确定度评估结果通过2014-2016年卫生部室间质量评价结果计算所得HBV-DNA偏倚引入的相对测量不确定度为5.27%。见表1。

2.2实验室内测量重复性引入的测量不确定度评估结果质控数据均值为4.03，实验室内测量重复性引入的相对测量不确定度(urel)为3.45%。见表2。

表1 偏倚引入的测量不确定度评估结果

表2 HBV-DNA的中间精密度测定结果(n=40)

2.3HBV-DNA的相对扩展不确定度由表1、表2计算得到相对合成标准不确定度(ucref)为6.3%；相对扩展不确定度为12.6%(K=2)。

3 讨论

医学实验室认可已成为我国三级甲等医院检验科提升检验质量和能力的重要途径。ISO15189实验室认可明确要求实验室要评估定量项目的测量不确定度。测量不确定度与检验总误差概念和意义有一定区别[7]。

评定测量不确定度评定的意义主要体现在以下2个方面：(1)确认患者结果是否符合实验室设定的质量目标，确定将患者结果与之前相同类型的结果或临床决定值进行比对时其变化或波动值在多大范围内有意义。(2)实验室在解释测量结果量值时应考虑测量不确定度。通过对不确定度的评价,可提高实验室的检测水平，有助于临床医生更好地理解、使用检验结果[8]。HBV-DNA定量已广泛用于乙型肝炎患者临床疗效判断和预后评估，测量不确定度结果可作为检验结果质量的参考依据[9-10]。

测量不确定度可在中间精密度条件下通过测量质控物获得的量值进行计算，这些条件包括测量程序标准操作中尽可能多而合理的常规变化。评定偏倚的测量不确定度主要通过测量有证参考物质、利用室间质评等获得[11-12]。

本研究采用弱阳性水平HBV-DNA质控品获得的中间精密度和室间质量评价结果评定了HBV-DNA在该水平上的不确定度。实际测量过程相关联的不确定度分量应从接收样品启动测量程序开始，至输出测量结果终止。按本方法计算所得测量不确定度不确定来源上主要包含了分析测量阶段中各种影响组分(如操作人员、仪器、试剂、校准品、质控品、环境条件等)的变异。但未包括与分析前和分析后阶段相关的测量不确定度分量，也未包括由于人群生物学变异而产生的测量不确定度。

每个实验室应建立自己的目标不确定度，以评价各检验指标是否满足临床要求[13-14]。目前，尚未有检验程序的测量不确定度的国家标准或性能规范，据文献报道，扩展不确定度若大于10%，需改善检测系统性能及稳定性，提高检测的准确度和精密度[15]。本实验室根据实验室自身的条件，制定HBV-DNA的目标不确定度为10%。而本研究评定得到的相对不确定度(12.6%)略高于实验室设定的目标不确定度，提示应从检测人员、检测仪器、检测试剂和方法、所使用的校准品和质控品、环境温湿度条件等方面入手，采取加强人员培训、提高试剂质量、变更方法、加强仪器检定和校准、严格控制环境温湿度，逐步改进检验质量，以缩小测量不确定度，为临床疾病的诊治提供更有价值的参考依据。