家用便携式凝血检测仪的一致性分析

2019-01-19蔡培培周连群严茹红朱红楠

国际检验医学杂志 2019年1期

蔡培培，张威，周连群，严茹红，朱红楠△

(1.南京医科大学附属苏州科技城医院检验科，江苏苏州 215153；2.中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，江苏苏州 215153)

活化部分凝血活酶时间(APTT)是临床凝血四项检测中的一项，是内源凝血系统缺陷筛查实验和普通肝素抗凝治疗中抗凝效果的重要指标[1-2]，临床医学也将其视作监测凝血功能的重要指标之一[3-4]。目前，对APTT的检测主要是利用光学全自动凝血检测仪，虽然其具有检测精度高，但体积大、价格昂贵、检测时间长，无法实现类似床旁检测血糖仪设备那样让患者时刻了解自身凝血状况[5]。本研究采用派瑞林修饰石英晶体微天平(P-QCM)芯片的家用便携式凝血检测仪(简称P-QCM凝血仪)对APTT进行了检测，分析其重复性和稳定性，并与全自动凝血检测仪Sysmex CS 2000i(简称Sysmex CS 2000i凝血仪)临床实测进行了对比，旨在判断其临床可靠性，为实现床旁检测凝血提供依据。

1 资料与方法

1.1标本来源收集2017年1月南京医科大学附属苏州科技城医院收治的17例健康孕妇血液，其中10例上午空腹采血2.7 mL加入含3.8%枸橼酸钠0.3 mL的真空试管中，立即混匀，分离血浆待测。另外7例作为血浆和全血检测样本，其中血浆样本制备方法如前所述，全血样本无需处理，直接进行检测。

1.2仪器与试剂 Sysmex CS 2000i凝血仪及其配套APTT试剂(希森美康公司)，P-QCM凝血仪及其配套芯片和试剂(中国科学院苏州生物医学工程技术研究所提供)，KDC-2046低速冷冻离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)，APTT激活剂、APTT起始剂 25 mmol CaCl2(上海太阳公司)等。

1.3方法

1.3.1P-QCM凝血仪检测在进行APTT检测前空室进行频率测定。将50 μL APPT激活剂放入37 ℃水浴中孵育2 min，然后与50 μL血浆样本在微离心管中混匀，37 ℃孵育3 min。采用移液枪将100 μL混合液滴加到检测室，整个芯片完全覆盖且无气泡。然后，添加50 μL 25 mmol的CaCl2溶液进行混凝反应，且整个检测过程中均保持在37 ℃条件下。另外，全血样本检测无需进行前处理，直接将其滴加到检测室进行检测。

1.3.2Sysmex CS2000i凝血仪检测按仪器设定检测参数自动测定并报告APPT，试剂全部为该检测仪配套试剂。

1.4统计学处理采用SPSS17.0统计软件对数据进行分析，并对2台仪器的检测结果进行线性回归分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1P-QCM凝血仪检测的稳定性和重复性以10例健康孕妇的新鲜血液进行P-QCM凝血仪的频率波动数据检测，其频率CV%为2.58%，表明所采用的P-QCM凝血仪具有相对的稳定性。同时，以同一样本进行10次APTT检测，其CV%为1.24%，具有良好的重复性。见表1。

表1 P-QCM凝血仪的频率波动和APTT检测结果

续表1 P-QCM凝血仪的频率波动和APTT检测结果

2.2临床实测结果比较 P-QCM在APTT检测方面的结果与目前实验室所用SYSMEX CS 2000i凝血仪具有良好的线性拟合，线性回归决定系数(R2)达0.983，表明P-QCM凝血仪可用于APTT的检测。见图1。

图1 P-QCM凝血仪检测与Sysmex CS 2000i凝血仪检测的检测结果对比

P-QCM凝血仪检测全血(s)血浆(s)136.05528.14236.05528.32336.05528.10437.01028.60536.05528.11635.65027.21736.05528.12CV(%)1.151.51

图2 P-QCM凝血仪全血与血浆APTT曲线导数对比

2.3P-QCM凝血仪检测的全血检测结果以7例血液样本进行全血和血浆检测，血浆APTT点比全血APTT点少8 s，全血和血浆的CV%分别为1.15%和1.51%，表明P-QCM能实现对全血APTT的稳定性检测。见表2。同时，P-QCM凝血仪全血与血浆APTT对比曲线导数拟合也进一步佐证了上述的时间差。见图2。

3 讨论

POCT是对目前实验室检测的有效补充，而血液方面的快速检测，更能对某些疾病提供有效的监控和预防。现有的POCT凝血仪主要是采用电化学类传感器[6-7]，其需要配套的试剂或试纸条，成本相对较高，而压电传感器具有更高的检测灵敏度、响应速度也更快，且能实现免离心[8-9]。

本研究结果显示，以10例健康孕妇的新鲜血液进行P-QCM凝血仪的频率移动数据检测，其频率CV%为2.58%，表明P-QCM凝血仪具有良好的稳定性。但频率也表现出一定的降低，可能由于可溶性纤维蛋白原转化成了纤维蛋白，凝聚在了生物材料表面上，而这种在生物材料表面形成的纤维蛋白网与之前文献报道的凝血因子Ⅻ有着直接的联系。因此，接触点的激活对生物材料相关凝聚物的激活是一个重要的因素[10-11]。同时，以同一样本进行10次APTT检测，其CV%为1.24%，比常规医院检验科对凝血实验重复性要求的CV%为4.0%存在明显的差异[12]，甚至比目前临床在用的POCT凝血仪检测结果的CV%小[13-14]。表明本研究所用的P-QCM凝血仪具有较高的重复性。

本研究以10例健康孕妇的新鲜血液进行APTT检测，每次测定10次，P-QCM凝血仪检测的结果与医院检验科室Sysmex CS 2000i检测仪所测得的结果进行线性回归拟合，R2=0.983，表明本研究所用的家用式的P-QCM凝血仪能用于对APTT的检测，甚至比目前在用的POCT凝血仪在APTT检测方面具有更好的拟合性[14]。此外，后续采用7例血液样本进行了全血和血浆检测，血浆APTT点比全血APTT点少8 s，全血的CV%为1.15%，表明本研究所用的P-QCM凝血仪能实现对全血APTT的稳定性检测。曲线导数图拟合表明，该仪器全血APTT比血浆APTT多8 s，与前面所测定的数据点差值相符，表明本研究所用的P-QCM凝血仪能适用于全血检测。

P-QCM凝血仪采用压电传感器检测具有较好的重复性、稳定性及拟合性，能替代目前医院所用全自动凝血分析仪检测结果，但由于方法原理的差异，APTT 检测需通过确定其医学决定水平和参考范围才可用于临床，进而实现POCT的凝血检测。这不仅能为家庭凝血检测提供方便性，也能为临床医生快速、准确地提供监测报告。但同时看到，本研究所用的样本量相对较少，也未进行相应的Bland-Altman分析[15]，后续将针对这方面的不足继续进行研究，以期完善P-QCM凝血仪在实际POCT应用中的数据支持。