子宫内膜异位症患者子宫上皮Survivin和Ki67的表达与细胞凋亡的相关性

2019-01-19杜二球李咏梅纪道华

国际检验医学杂志 2019年1期

尚丽,杜二球△,李咏梅,纪道华,李斌

(1.湖北省十堰市人民医院/湖北医药学院附属人民医院产科，湖北十堰 442000；2.湖北省十堰市郧阳区胡家营镇卫生院，湖北十堰 442539；3.湖北医药学院，湖北十堰 442000)

子宫内膜异位症(EMS)是一种具有侵袭、种植和复发等生物学行为的妇科常见病，育龄妇女发病率达14.0%，可引起痛经、不孕等，严重影响患者身心健康[1-2]。EMS发病机制尚未明确，目前，在EMS中关于增殖指数(Ki)67和存活素(Survivin)的研究已有相关文献报道[3]。Survivin和Ki67可调控肿瘤相关的众多信号级联反应，并调节与肿瘤转移、生长及浸润相关的信号通路，并在促进肿瘤血管生成中也具有重要作用[4-5]。正常子宫内膜的增生和脱落具有周期性，是通过细胞的增殖和凋亡完成的，在分泌晚期及月经期细胞发生凋亡。在宫腔外，异位内膜细胞也能被种植及存活，与其凋亡特性发生变化有关[6-8]。Survivin是细胞凋亡抑制蛋白(IAP)家族新成员，也是当前作用最强的IAP[9-10]。本研究探讨了EMS患者子宫上皮Survivin和Ki67的表达与细胞凋亡的相关性，希望为早期预防EMS提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2013年9月至2017年2月在十堰市人民医院收治的进行妇科手术且术后病理检查证实的EMS患者60例作为观察组，均符合EMS的诊断标准，年龄36～78岁，平均(54.22±4.19)岁；平均体质量指数(22.76±5.22)kg/m2；Ⅰ期19例，Ⅱ期21例，Ⅲ期14例，Ⅳ期6例。同期选择60例子宫肌瘤行手术治疗(排除EMS)得到正常子宫内膜的患者作为对照组，年龄31～79岁，平均(54.31±3.82)岁；平均体质量指数(22.11±4.82)kg/m2。两组患者年龄、体质量指数等资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。两组患者术前3个月内均未接受激素治疗，均无内科合并疾病，均在同1个月经周期手术。本研究得到了两组患者的知情同意与十堰市人民医院伦理委员会的批准。

1.2Survivin和Ki67的免疫组织化学检测将两组患者子宫上皮组织使用4%甲醛固定标本，进行石蜡包埋，以厚度4 μm进行切片。对S-P法免疫组织实施化学染色，根据试剂盒说明书操作，采用二氨基联苯胺显色，以苏木素复染，采用磷酸盐缓冲液作为阴性对照。Ki67和Survivin阳性产物位于细胞核，颜色为棕黄色，细颗粒状。利用显微镜观察5个高倍镜视野，记录阳性染色细胞百分比，按染色范围即强度计分：<5%计0分，5%～<20%计1分，20%～<50%计2分，≥50%计3分；无色计0分，淡黄计1分，棕黄计2分，棕褐计3分；累积0～1分为阴性，≥2分为阳性。

1.3凋亡细胞判定在显微镜下，分泌期及增生期的细胞核存在的棕褐色或棕黄色颗粒就是凋亡细胞，选取5个高倍视野，统计其中的子宫内膜细胞、凋亡细胞及间质细胞，凋亡指数=凋亡细胞数/(子宫内膜细胞数+间质细胞数)×100%。

2 结果

2.1两组患者子宫上皮Survivin和Ki67阳性率比较观察组患者子宫上皮的Survivin和Ki67阳性率均显著高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者子宫上皮Survivin和Ki67阳性率比较[n(%)]

2.2两组患者增生期和分泌期凋亡指数比较观察组患者增生期和分泌期凋亡指数均显著低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者增生期和分泌期凋亡指数比较

表3 观察组患者子宫上皮Survivin和Ki67阳性率与细胞凋亡的相关性(n=60)

2.3观察组患者子宫上皮Survivin和Ki67阳性率与细胞凋亡的相关性观察组患者子宫上皮Survivin和Ki67阳性率与增生期、分泌期凋亡指数均呈显著负相关 (r分别为-0.354、-0.452,-0.482、-0.413；P分别为0.018、0.005，0.003、0.009)。见表3。Survivin阳性率与Ki67阳性率呈显著正相关(r=0.672,P=0.000)。

3 讨论

EMS是临床常见疾病，指的是存在于子宫内膜外的活性子宫内膜组织，也是育龄妇女经常发生的一种良性病变，发病率为14.0%。EMS能引起慢性盆腔痛、不孕等，对患者的生活质量产生严重影响[11]。EMS具有组织侵袭、复发、局部播散、远处转移等恶性行为，但其具体的发病机制尚不太明确。

Survivin是迄今为止克隆出的最小的IAP，为一个由142个氨基酸组成的胞浆蛋白。Survivin半衰期仅30 min，过于依赖细胞周期，通常是在细胞周期G2/M期中表达[12]。有研究表明，Survivin在正常和增生期子宫内膜均有表达，且增生的子宫内膜表达明显升高，同时，在正常月经周期中，随着内膜从增生到分泌，Survivin表达量也不断增加[13-14]。有研究表明，在EMS子宫内膜组织中，Survivin存在着过度表达，使异位内膜细胞可躲避外界多种刺激引起的细胞凋亡，从而诱发EMS的发生、发展[15]。

Ki67作为增殖细胞的标记物，其应用范围极为广阔，在G0期与G1早期无表达，于G1中、晚期表达，在S、G2期表达逐渐增加，到M期达峰值。Ki67在静止的细胞中很少表达，只表达于增生细胞[16]。有研究表明，在EMS阶段，异位内膜上皮细胞出现明显异型性，缺乏间质侵犯，核浆比例增大，病灶可见乳头状结构；Ki67表达不但阳性率提升到100%，且表达强度也显著增强[17]。

本研究结果显示，观察组患者子宫上皮Ki67和Survivin阳性率均显著高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。从机制方面分析，在EMS患者中，子宫上皮组织氧浓度降低使活性氮细胞水平也随之降低，进而使Fas基因激活，促使Survivin进入细胞，与细胞中CDK4结合，激活CDK2/CyclinE及Rb磷酸化，使G1/S期进程缩短，对DNA复性具有促进作用；与正常内膜组织比较，在位于异位内膜组织中异常增生细胞具有更强的生长能力，破坏了正常细胞的凋亡与增殖之间的平衡，对Survivin基因加以诱导，使其在子宫异位内膜中呈高表达。异位内膜细胞中的C-myc基因与bcl-2的高表达，使异位内膜细胞继续存活、种植，诱导子宫异位内膜组织中Survivin的表达，促进细胞增殖[18]。因Ki67只在增殖细胞中的细胞核表达，所以，也常被当做判定癌症患者预后的重要指标，Ki67的表达强度与细胞增殖活性明显相关，也与EMS的恶性进展有关[19]。

凋亡是由基因调控的主动而有序的细胞死亡，是由体内、外因素触发细胞内原定的死亡程序。正常子宫内膜的增生与脱落呈周期性，是通过细胞的增殖和凋亡完成的，在分泌晚期及月经期细胞发生凋亡[20]。正常子宫内膜的细胞凋亡指数也具有周期性，经期与分泌晚期的凋亡指数比分泌早期及增殖期高得多，有利于内膜修复和功能恢复。有研究表明，凋亡通过对细胞增生及死亡的平衡进行调控，从而在子宫内膜生理功能方面发挥重要作用，且导致EMS发生的一个重要因素可能是内膜组织对细胞发生的凋亡不敏感。且EMS患者子宫上皮还存在着众多巨噬细胞，在促进异位内膜组织增生方面具有重要意义[21]。

本研究结果显示，观察组患者增生期与分泌期凋亡指数均显著低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。表明在子宫内膜中，细胞凋亡是影响周期性结构及生理功能的重要因素，因EMS患者子宫内膜对细胞凋亡的敏感性明显下降，故导致凋亡指数降低。

本研究Pearson直线相关分析结果显示，观察组患者子宫上皮Survivin和Ki67阳性率与增生期、分泌期凋亡指数均呈显著负相关 (r分别为-0.354、-0.452,-0.482、-0.413；P分别为0.018、0.005，0.003、0.009)。Survivin阳性率与Ki67阳性率呈显著现正相关(r=0.672,P=0.000)。对细胞凋亡进行抑制的过程中，Ki67和Survivin阻断线粒体细胞色素C的释放，直接抑制含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶7(Caspase-7)，从而抑制细胞凋亡，利用有丝分裂对转化细胞异常增殖具有促进作用[22]。作为凋亡抑制因子，Survivin蛋白在EMS患者子宫上皮高表达抑制细胞凋亡可能是其逆流入腹腔的子宫内膜能种植与存活的机制之一[8]。