新城疫免疫效果监测和免疫程序的完善

贺 薪

（江苏省徐州市畜牧兽医站，江苏 徐州 221000）

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 免疫监测鸡群 （1）A蛋鸡场，第一批鸡，2015.10.21进鸡，2017.3.10淘汰，2.5万只；第二批鸡，2017.3.20进鸡，2.5万只。（2）B蛋鸡场，第一批鸡，2015.11.10进鸡，2017.3.28淘汰，2万只；第二批鸡，2016.10.18进鸡，2万只。（3）C蛋鸡场，第一批鸡，2016.3.1进鸡 2017.7.15淘汰，2.5万只；第二批鸡，2016.6.15进鸡，2017.10.25淘汰，2.5万只。

1.1.2 试验用病毒抗原 用于新城疫抗体监测的标准参考抗原购自于维科生物。新城疫参考毒株尿囊液购自哈尔滨兽医研究所。

1.2 方 法

1.2.1 免疫程序 针对之前的免疫和鸡群疾病发生情况，我们对养殖场所用免疫程序进行了适当调整，试验鸡群及对照鸡群免疫程序如下：

（1）实验组鸡群免疫程序：7日龄用新支H120弱毒苗2羽份点眼、滴鼻；28日龄用新支H120弱毒苗2.5羽份点眼、滴鼻；60日龄用新城疫IV系苗3羽份饮水；110日龄用新城疫IV系苗3羽份饮水，同时用新支减三联苗1mL肌肉注射；以后每2个月用新城疫IV系苗饮水一次。

（2）对照组鸡群免疫程序：5日龄用新支H120弱毒苗2羽份点眼、滴鼻；12日龄用新支H120弱毒苗2.5羽份点眼、滴鼻；60日龄用新城疫IV系苗3羽份饮水；110日龄用新城疫IV系苗3羽份饮水，同时用新支减三联苗1mL肌肉注射；以后每3～4个月用新城疫IV系苗饮水一次。

1.2.2 完善免疫效果监测 根据监测方案，从2016年5月起每场每月监测100份血样，对新城疫抗体进行监测，到2017年11月共监测样品1800份。

1.2.3 监测分组及采样情况 将每一批鸡对半分成试验组和对照组，从2016年5月开始采样监测，每个鸡场每月分别各采取100份血样（试验组和对照组各50份），被采样的一批鸡淘汰后，接着更换另一批鸡采样，连续采样监测18个月。

1.2.4 监测时间及免疫情况 选择A、B、C三个蛋鸡场各2个批次的鸡群，其中A蛋鸡场的第一批、B蛋鸡场的第一批、第二批、C蛋鸡场的第二批等4个批次的鸡群从产蛋期开始监测，A蛋鸡场的第二批鸡从育雏期开始监测，C蛋鸡场的第一批鸡从育成期开始监测。

1.2.5 血凝试验和血凝抑制试验

1.2.5.1 血凝试验 取新城疫标准参考毒株尿囊液测定血凝价，实验操作程序如下：（1）取96孔V形微量反应板，用微量移液器在 1～12孔没孔加 0.025mL PBS；（2） 吸取0.025mL病毒悬液加入第1孔中，吹打3～5次充分混匀；（3）从第1孔中吸取0.025mL，混匀后的病毒悬液加到第2孔，混匀后吸取0.025mL加入到第3孔，依次进行系列倍比稀释到第11孔，最后从第11孔吸0.025mL弃之，设第12孔位 PBS 对照；（4） 每孔再加 0.025mL PBS；（5） 每孔加入0.025mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液；（6）震荡混匀反应混合液，室温37℃下静置10min后观察结果，PBS对照孔的红细胞成明显的纽扣状沉到孔底时判定结果。

1.2.5.2 血凝抑制试验 用来源于哈尔滨研究所的针对新城疫的标准阳性血清及监测血清样品与参考病毒进行HI实验。（1）根据血凝试验结果配制4个血凝单位（4HAU）抗原，以能引起100%血凝的病毒最高稀释倍数代表1个血凝单位。（2）取96孔V形微量反应板，用微量移液器在1孔～11孔每孔加0.025mL PBS，第12孔加0.05mL PBS；（3）在第一孔加入0.025mL新城疫标准阳性血清，充分混匀后移出0.025mL至第2孔，依次类推，倍比稀释至第10孔，第10孔弃去0.025mL，第11孔位阳性对照，第12孔为PBS对照。（4）在第1～11孔各加入0.025mL含4HAU抗原轻扣反应板，是反应物混合均匀，室温下静置不少于30min，4不少于60min。（5）每孔加入0.025mL体积分数为1%的红细胞悬液，震荡混匀反应混合液，室温37℃下静置10min后观察结果，PBS对照孔的红细胞成明显的纽扣状沉到孔底时判定结果。

2 结果

对试验鸡群在不同阶段采集血样分离血清，对新城疫的抗体水平采用血凝抑制试验进行监测。

对A蛋鸡场第一批鸡从产蛋期开始采血样进行监测，第二批鸡从育雏期开始采血样监测，A鸡场实验组和对照组鸡群监测结果及强化免疫时间（见表1）。

表1 A蛋鸡场鸡群抗体监测结果及强化免疫日龄

对B蛋鸡场试验鸡群从产蛋期开始采血样进行监测，B鸡场实验组和对照组鸡群监测结果及强化免疫时间（见表2）。

表2 B蛋鸡场鸡群抗体监测结果及强化免疫日龄

对C蛋鸡场第一批鸡从育成期开始采血样进行监测，第二批鸡从产蛋期开始采血样监测，C鸡场实验组和对照组鸡群监测结果及强化免疫时间（见表3）。

表3 C蛋鸡场鸡群抗体监测结果及强化免疫日龄

3 分析与讨论

本研究中，新城疫抗体监测结果显示：育雏期和育成期对照组，原免疫程序在5日龄首免，12日龄二免，60日龄强化免疫，60日龄前免疫抗体已降到4log2以下，二免和强化免疫间隔时间过长，出现了免疫空白期。一般认为对7日龄前的雏鸡，新城疫母源抗体即能起到保护性作用错误！未找到引用源。7日龄后，雏鸡虽然体内还有母源抗体，但已不能有效保护。试验组在7日龄进行新城疫首免，28日龄强化免疫一次，60日龄左右进行第3次免疫，育成期免疫抗体监测结果比对照组高出1个滴度以上，且能有效保护整个育雏期和育成期。产蛋期对照组鸡群，在110日龄以后每3～4个月用新城疫Ⅳ系苗饮水一次，抗体监测结果显示强化免疫间隔3个月时有部分鸡已没有免疫保护力。试验组鸡群在110日龄以后每2个月用新城疫Ⅳ系苗饮水一次，平均抗体效价可维持在5log2以上，保护力加强。建议对新城疫弱毒疫苗的强化免疫，间隔2个月效果较好，对新城疫灭活疫苗的强化免疫，间隔4个月效果较好，而新城疫弱毒疫苗配合新城疫灭活疫苗进行强化免疫，间隔6个月效果较好。

本研究结果表明，实时监测，调整和完善免疫程序，能有效提高免疫效果。