皮炎灵搽剂质量标准研究

李 娜，赵娜娜，陈 晴，葛 媛，杨 阳，朱 斌

（中国人民解放军第九七医院药剂科，江苏 徐州 221004）

皮炎灵搽剂为我院非标准自制制剂，由间苯二酚、水杨酸、冰片、醋酸氟轻松等组方，具有抗菌消炎、抗过敏、止痒作用，主治神经性皮炎、慢性湿疹等症，在我院临床应用10余年，疗效确切。前期，本课题组通过家兔及豚鼠皮肤刺激性实验[1]、安全性实验[2]，证实该制剂为较安全的外用制剂。本研究中通过理化鉴别、薄层色谱(TLC)鉴别、相关检查及对该制剂中间苯二酚、水杨酸含量的测定，以期为其质量控制提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：1260型高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器（美国Agilent公司）；AB265S-5型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司，最大载荷220 g，最小分度值0．01 mg）；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号为20160902）。

试药：皮炎灵搽剂（我院药剂科制剂室自制，批号分别为 20150611，20150617，20150625，规格均为每瓶20 mL）；间苯二酚对照品（批号为 100389-201202，纯度为100%），水杨酸对照品（批号为100106-201104，纯度为100%），冰片对照品（批号为110743-200905，纯度为100%），均购自中国食品药品检定研究院；甲醇(德国Merck公司)为色谱纯，其余试剂(国药集团化学试剂有限公司)均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2．1 性状

本品为无色或淡黄色澄明溶液，具有清香气味。

2．2 鉴别

理化鉴别：取样品1 mL，加三氯化铁试液2滴，即显蓝紫色，再加氨试液数滴，即变为棕黄色，符合规定。

TLC鉴别：取冰片5 mg，用75%乙醇溶解至1 mL，即得对照品溶液。取样品2 mL，作为供试品溶液。按皮炎灵搽剂处方和工艺制备缺冰片的阴性对照品溶液。按2015年版《中国药典（四部）》TLC法[3]20试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷 -乙酸乙酯（6∶1，V／V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸溶液，于105℃下加热至斑点显色清晰，日光灯下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1。

图1 薄层色谱图

2．3 相关检查

相对密度：取样品适量，按2015年版《中国药典(四部)》通则0601相对密度测定法[3]73-74测定，结果样品相对密度为1．113。

pH：取样品适量，按2015年版《中国药典(四部)》通则0631pH值测定法[3]77-78测定，结果样品的pH为2．7。

最低装量：取样品5瓶，按2015年版《中国药典(四部)》通则最低装量检查法[3]125测定，结果样品最低装量为（20．08 ± 0．56）mL，符合规定。

微生物限度：取样品适量，按2015年版《中国药典(四部)》通则方法[3]149-151检测。结果，样品细菌数≤100cfu／mL，霉菌数≤10 cfu／mL，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌未检出，均符合规定。

2．4 刺激性试验

取样品适量，涂于手臂内侧，24 h后进行观察[4]。结果未见红肿、水疱等刺激症状。

2．5 含量测定

2．5．1 色谱条件

色谱柱：Dikma Diamonsil C18柱（150 mm× 4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-2% 乙酸溶液（B），梯度洗脱（0～15 min，30% →60%A）；流速：1．0 mL ／min；检测波长：270 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 μL。

2．5．2 溶液制备

取间苯二酚对照品约10 mg、水杨酸对照品约5 mg，精密称定，置同一5 mL容量瓶中，加入初始流动相溶解并定容，制成混合对照品贮备液。取适量，用初始流动相稀释，制成间苯二酚、水杨酸质量浓度分别为0．1 g／L和0．05 g／L的混合对照品溶液。

精密量取样品80 μL，置4 mL容量瓶中，用初始流动相定容，制成供试品贮备液，精密量取200 μL，置2 mL容量瓶中，用初始流动相定容，经0．45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

按样品处方和工艺制备缺间苯二酚、水杨酸的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2．5．3 方法学考察

专属性试验：取 2．5．2项下 3种溶液各适量，按2．5．1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果见图2。阴性对照无干扰，表明方法专属性良好。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密量取2．5．2项下混合对照品溶液 0．2，0．4，0．6，0．8，1．0，1．4，1．6，2．0 mL，置 20 mL容量瓶中，加初始流动相定容，摇匀，制成系列混合对照品溶液，各精密量取 20 μL，按 2．5．1 项下色谱条件进样测定。以待测成分质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得间苯二酚和水杨酸回归方程分别为 Y＝16 451 X＋47．856，r＝0．999 5(n＝8)，Y＝690 X＋0．340 5，r＝0．999 3(n＝8)。结果表明，间苯二酚和水杨酸质量浓度线性范围分别为0．02～0．20 g／L和 0．01～0．1 g ／L。

精密度试验：取2．5．2项下混合对照品溶液适量，按2．5．1项下色谱条件连续进样6次，结果间苯二酚和水杨酸峰面积的 RSD分别为0．42%和0．56%（n＝6），表明日内精密度良好。按2．5．1项下色谱条件连续3 d进样测定，每天测定3次，结果间苯二酚和水杨酸峰面积的 RSD 分别为 0．45% 和 0．59% （n＝9），表明日间精密度良好。

稳定性试验：取2．5．2项下同一供试品溶液（批号为 20150617）适量，分别于室温下放置 0，1，2，4 h 后按2．5．1项下色谱条件进样测定。结果间苯二酚和水杨酸峰面积的 RSD 分别为 0．20% 和 1．01% （n＝4），表明供试品溶液室温放置4 h内基本稳定。

重复性试验：精密称取样品（批号为20150617）适量，依法制备供试品溶液，再按2．5．1项下色谱条件连续进样5次，测定，记录峰面积并计算含量。结果，间苯二酚和水杨酸平均含量分别为 31．56 g／L和 30．85 g／L，RSD 分别为 1．42% 和 1．98%（n＝5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量样品（批号为20150611）适量，共 6 份，每份 0．6 mL，分别加入低、中、高质量浓度的间苯二酚、水杨酸对照品，依法制备供试品溶液，再按2．5．1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n＝9)

2．5．4 样品含量测定

取3批样品各适量，依法制备供试品溶液，再按

2．5．1项下色谱条件进样测定，平行测定3次，记录峰面积并计算含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（s，n＝3）

表2 样品含量测定结果（s，n＝3）

注：相对含量指测定值与标示量的比值。

批号 间苯二酚 水杨酸20150611 20150617 20150625含量（g／L）30．30 ± 0．01 29．71 ± 0．03 30．10 ± 0．04相对含量（%）101．00 99．03 100．33含量（g／L）30．44 ± 0．10 31．67 ± 0．63 31．76 ± 0．11相对含量（%）101．47 105．57 105．85

3 讨论

皮炎灵搽剂处方由间苯二酚（30 g）、水杨酸（30 g）、冰片（10 g）、醋酸氟轻松（0．25 g）等药物组方。其中，水杨酸具有软化角质、止痒消炎的作用；间苯二酚能杀灭细菌和真菌，同时也有止痒和溶解角质的作用[5]；冰片能消肿止痛且有抗菌作用；醋酸氟轻松可抗炎、止痒、抗过敏，辅以皮肤助渗剂二甲基亚砜可增强药效；同时使用甘油可减少药物刺激且湿润、保护皮肤。考虑间苯二酚在乙醇或水中极易溶解，水杨酸在乙醇中易溶、水中微溶，冰片在乙醇中易溶，醋酸氟轻松在乙醇中微溶、水中不溶，故选择75%乙醇作为溶剂，一方面保证处方中各药物能全部溶解，另一方面75%乙醇也是临床常用的消毒剂。

前期，我院主要采用滴定法测定间苯二酚和水杨酸的含量，但该方法受人为操作影响因素较大。为改进和提升质量标准，本研究中采用高效液相色谱法测定间苯二酚和水杨酸的含量。经方法学验证，该方法简便快捷、灵敏准确、重复性好，适用于皮炎灵搽剂的质量控制。

测定间苯二酚和水杨酸含量时，220，230，254，270，276 nm均可作为检测波长[6-10]。预试验表明，在220，230，254，276 nm波长处，色谱图杂峰较多；而在270 nm波长处，间苯二酚与水杨酸分离度均较好，色谱图杂峰较少，且对测定无干扰。因此，确定检测波长为270 nm。

本研究中参考文献[11-14]，考察了流动相为甲醇-磷酸二氢钾溶液（0．1 mL NaOH 调 pH 至 6．14）（35 ∶65、40 ∶60、20 ∶80，V／V），甲醇 -0．05%磷酸溶液（20 ∶80、30 ∶70、50 ∶50，V／V），甲醇 -2%乙酸溶液（25 ∶75、20∶80、35 ∶65、30 ∶70，V／V）时等度和梯度洗脱对色谱行为的影响，结果表明，流动相为甲醇-2%乙酸溶液、梯度洗脱时间为15 min时，各色谱峰分离良好，无拖尾。