miR-146a、miR-375联合AFP检测在诊断原发性肝癌中的应用

陈泽衍 陈晓静 郑文斌 黄汉莲 兰希 吴云风 马雯

【摘要】 目的：探究微小核糖核酸146a（miR-146a）、微小核糖核酸375（miR-375）联合甲胎蛋白（AFP）检测在诊断原发性肝癌中的应用价值。方法：选取2017年2月-2019年4月在本院治疗的53例原发性肝癌患者作为肝癌组，将本院同期收治的53例肝脏良性疾病患者作为良性组。检测所有患者的血清AFP含量及miR-146a、miR-375相对表达量。比较两组血清AFP含量及miR-146a、miR-375相对表达量。对肝癌组miR-375、miR-146a及AFP检测结果进行ROC曲线分析，根据ROC曲线得miR-375、miR-146a的最佳临界值。对肝癌组进行miR-375、miR-146a、AFP检测及联合检测，比较各个检测方法的敏感度、特异度和ROC曲线下面积（area under curve，AUC）。结果：肝癌组miR-146a、miR-375相对表达量及AFP含量均高于良性组（P<0.05）;联合检测敏感度均高于miR-146a与AFP检测，且特异度高于miR-375检测（P<0.05）;联合检测AUC大于AFP、miR-146a及miR-375检测（P<0.05）。结论：miR-146a、miR-375联合AFP检测在诊断原发性肝癌中具有较高的敏感度、特异度。

【关键词】 微小核糖核酸146a 微小核糖核酸375 甲胎蛋白 原发性肝癌

[Abstract] Objective： To explore the value of detection of microRNA 146a （miR-146a）， microRNA 375 （miR-375） and alpha fetoprotein （AFP） in the diagnosis of primary liver cancer. Method： A total of 53 patients with primary liver cancer treated in our hospital from February 2017 to April 2019 were selected as the liver cancer group， and the 53 patients with benign liver diseases admitted to our hospital during the same period were selected as the benign group. The serum AFP content and the relative expression of miR-146a and miR-375 were detected in all patients. The serum AFP content and relative expressions of miR-146a and miR-375 in the two groups were compared. ROC curve analysis was performed on the detection results of miR-375， miR-146a and AFP in the liver cancer group， and the optimal critical values of miR-375 and miR-146a were obtained according to the ROC curve. Result： The relative expressions and AFP content of miR-146a and miR-375 in the liver cancer group were higher than those in the benign group （P<0.05）. The sensitivity of combined detection were higher than those of miR-146a and AFP detection， and the specificity was higher than that of miR-375 detection （P<0.05）. The AUC of combined detection were higher than those of AFP， miR-146a and miR-375 detection （P<0.05）. Conclusion： The detection of miR-146a and miR-375 combined with AFP have high sensitivity and specificity in the diagnosis of primary liver cancer.

[Key words] miR-146a miR-375 AFP Primary liver cancer

First-authors address： Shenzhen Hospital of Southern Medical University， Shenzhen 518110， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.36.033

原發性肝癌是常见的恶性肿瘤之一，多发于40～50岁人群，男性多于女性，早期症状不明显，一经发现已是中晚期。有研究指出，早期肝癌患者手术治疗的效果及预后远高于中晚期，因此提高早期原发性肝癌的诊断准确率至关重要[1]。临床上常采用血清甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）诊断原发性肝癌，但AFP诊断的敏感性仅为40%～60%[2]。微小核糖核酸146a（miR-146a）、微小核糖核酸375（miR-375）属于非编码RNA，可调控肿瘤细胞的增殖、分化，与肿瘤细胞的发生、发展密切相关。目前，国内虽有关于miR-146a、miR-375诊断原发性肝癌的报道，但对miR-146a、miR-375联合AFP诊断原发性肝癌的报道较少。因此本研究采用miR-146a、miR-375联合AFP检测诊断原发性肝癌，旨在探究联合检测在原发性肝癌诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年2月-2019年4月在本院治疗的53例原发性肝癌患者作为观察组，将本院同期收治的53例肝脏良性疾病患者作为良性组。纳入标准：（1）符合《原发性肝癌规范化病理诊断指南》中关于原发性肝癌的诊断[3];（2）均属于首次发病;（3）临床资料完整者;（4）未接受过化疗及放疗治疗。排除标准：（1）存在其他恶性肿瘤及转移癌者;（2）严重心、肾功能异常者;（3）妊娠期或哺乳期妇女;（4）酒精肝及其他类型肝脏疾病者。所有患者及家属均知情同意并签署知情同意书，本研究已经医院伦理委员会批准。

1.2 方法 于清晨抽取患者静脉血3 mL，对血样进行离心处理，取血清标本。（1）miR-375、miR-146a检测：用Rneasy MiNi Kit（50）总RNA提取试剂盒取血清中总RNA，用试剂盒合成cDNA，以GAPDH抗体为内参，采用2-△△Ct表示miR-375、miR-146a相对表达量，采用荧光定量PCR法检测两组血清miR-375、miR-146a相对表达量[4]。（2）AFP检测：采用放射免疫法检测血清AFP含量，据《原发性肝癌规范化病理诊断指南（2015年版）》中显示，AFP≥400 μg/L即可诊断为原发性肝癌。（3）联合检测：三种指标联合检测时其中任何一种指标大于正常参考上限即可诊断为原发性肝癌。

1.3 观察指标（1）比较两组血清miR-375、miR-146a相對表达量及AFP含量。（2）对检测结果进行ROC曲线分析，比较miR-375、miR-146a、AFP单独检测及联合检测的敏感度、特异度和ROC曲线下面积（AUC）。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验;对三种检测方法及联合检测制作ROC曲线，进行ROC曲线分析，计算AUC，AUC>0.5代表该检测方法具有检测价值;采用Z检验比较AUC的差异性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 肝癌组男27例，女26例;年龄40～75岁，平均（61.74±5.39）岁;肿瘤直径平均（4.21±1.05）cm。良性组男33例，女20例;年龄42～78岁，平均（59.32±6.08）岁。两组性别、年龄一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组血清miR-375、miR-146a相对表达量及AFP含量比较 肝癌组miR-375、miR-146a相对表达量及AFP含量均高于良性组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 各检测方法对原发性肝癌的诊断价值比较 据ROC曲线得miR-375、miR-146a的最佳临界值分别为12.55、3.86;AFP检测的AUC均低于联合检测（P<0.05）;联合检测敏感度均高于miR-146a、AFP检测，特异度高于miR-375检测（P<0.05），见表2、图1。

3 讨论

早期原发性肝癌患者一般无明显不适感，等患者感受到疼痛时已进入中晚期，但中晚期治疗效果不佳，晚期肝癌患者5年存活率不足10%，因此，提高原发性肝癌的早期确诊率是延长患者存活时间的关键[5]。AFP是一种糖蛋白，主要由胎儿肝细胞及卵黄囊合成，AFP在胎儿血清中具有较高的浓度，胎儿分娩后AFP含量迅速下降，到出生后2～3月AFP会完全被白蛋白替代，故在成人血清中含量极低。AFP因与多种肿瘤的发生密切相关，并在肝脏肿瘤中含量较高，是临床上诊断原发性肝癌的检测标志物[6-8]。有研究指出，大多数原发性肝癌患者体内AFP含量远高于正常个体及其他肝脏疾病患者[9]。本研究中，肝癌组血清AFP值高于良性组（P<0.05），说明原发性肝癌患者体内AFP含量远高于其他肝脏疾病患者，与上述研究一致[10]。微小核糖核酸是一条长约22nt的非编码RNA，能与mRNA相结合，阻碍蛋白编码基因的表达，抑制蛋白翻译过程miR-375、miR-146a基因属于基因间型的miRNA，其位于Cryba2基因和Ccdc108基因之间，与肿瘤的增殖分化密切相关，并参与肿瘤发生、发展等过程[11-12]。有研究显示，miR-146a、miR-375与肝癌等恶性肿瘤关系密切，能进入线粒体控制其基因表达，且肝癌患者体内miR-146a、miR-375表达水平均高于正常个体[13]。本研究中，肝癌组miR-375、miR-146a相对表达量高于对良性组（P<0.05），说明原发性肝癌患者体内miR-375、miR-146a表达水平高于肝脏良性疾病患者。

国外有研究指出，miR-375、miR-146a检测对多种恶性肿瘤疾病均具有较高的敏感度，但仍存在原发性肝癌患者体内miR-375、miR-146a表达呈正常水平的情况[14-15]。有相关研究表明，AFP对早期原发性肝癌患者的敏感度较低，有近40%的早期肝癌患者AFP检测呈阴性，因此寻求对早期原发性肝癌敏感度高的血清诊断方法越来越有必要[16-18]。较为理想的肿瘤标志物不仅对晚期肿瘤具有较高的特异度，并能将早期肝癌与肝炎等肝脏良性疾病区分开。有研究表明，采用AFP检测及微小RNA联合诊断原发性肝癌敏感度、特异度较高[19]。本研究中，联合检测敏感度均高于miR-146a、AFP检测，特异度高于miR-375检测（P<0.05），说明联合检测诊断原发性肝癌具有较高的敏感度和特异度。黄述婧等[20]采用miR-375、miR-146a联合AFP诊断原发性肝癌，证实了联合诊断具有较高的敏感度和特异度，与本研究结果相同。在ROC曲线分析中，联合检测的AUC均大于miR-375、miR-146a、AFP单独检测，可认为在对原发性肝癌的诊断中，联合检测价值高于单独检测，与文献[21]研究一致。

综上所述，采用miR-375、miR-146a联合AFP诊断原发性肝癌敏感度、特异度高，具有较高的临床价值。

参考文献

[1]於琳，张开炯，柴利，等.原发性肝癌患者癌组织、血清miR-202表达变化及其意义[J].山东医药，2017，57（7）：1-4.

[2]王攀，莫经刚，朱杰，等.微滴数字PCR检测血清miR-21和miR-4429在肝癌诊断中的应用[J].浙江医学，2017，39（3）：170-172.

[3]丛文铭，步宏，陈杰，等.原发性肝癌规范化病理诊断指南（2015年版）[J].解放军医学杂志，2015，21（6）：833-839.

[4]赵文淘，韩留鑫，夏加伟，等.血清miR-26a、miR-122、AFP联合检测对肝癌的诊断效能[J].山东医药，2018，58（7）：73-75.

[5]何伯圣，石伟湘，龚沈初，等.外周血miR-122检测联合MRI扩散加权成像评价肝癌射频治疗的疗效[J].中华实用诊断与治疗杂志，2017，31（10）：998-1001.

[6]刘冲，唐浩，邓霖，等.血清miRNA-186，miRNA-30 c在肝细胞性癌中诊断价值的研究[J].现代检验医学杂志，2016，31（6）：44-47.

[7]陈浩宇，嘉红云，吴晓蔓.肝细胞癌患者外周血中miR-26b的表达及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志，2016，30（12）：1215-1216.

[8]任雪维，张吉才.肝细胞肝癌患者血浆miR-29a水平的变化及其临床意义[J].现代检验医学杂志，2017，32（32）：35-36.

[9]毛玉环，谭黎明，李建英，等.血清壳多糖酶3样蛋白1和甲胎蛋白及铁蛋白检测在原发性肝癌诊断中的应用评价[J].实用预防医学，2018，25（4）：401-404.

[10]黄裔程.AFP、AFU、GGT、D-D联合检测对原发性肝癌的诊断价值[J].检验医学与临床，2018，15（10）：38-40.

[11]郑园园，郭传勇，周莹群，等.微小核糖核酸调控通路基因多态性与原发性肝癌相关性的研究进展[J].世界临床药物，2017，40（7）：489-495.

[12]杨永飞，孙运秀，蔡钧.肝细胞癌患者血清miR-301表达变化及意义[J].山东医药，2018，58（24）：72-74.

[13]郜艳芳，尹金明，王进.磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP联合检测对原发性肝癌的诊断价值[J].河北医学，2015，21（4）：687-689.

[14] He X X，Chang Y，Meng F Y，et al.MicroRNA-375 targets AEG-1 in hepatocellular carcinoma and suppresses liver cancer cell growth in vitro and in vivo[J].Oncogene，2012，31（28）：3357-3369.

[15] Zhang Q，Zhi Y，Shan J，et al.MicroRNA-449a maintains self-renewal in liver cancer stem-like cells by targeting Tcf3[J].Oncotarget，2017，8（66）：110187-110200.

[16]吴存造，王涌，彭承宏.甲胎蛋白信使核糖核酸与原发性肝癌（文献综述）[J].国际外科学杂志，2002，29（5）：265-267.

[17]赵之聪，王健东.微小RNA与肝癌肝移植术后肿瘤复发的研究进展[J].器官移植，2017，8（3）：238-241.

[18]翟璐.血清AFP联合GP73、Vimentin、SCCA-IgM IC对HBV相关早期HCC的诊断价值[D].天津：天津医科大学，2014.

[19]马军朋，卢伟，陈军丽，等.数字减影血管造影与超声对微小肝癌诊断价值的比较研究[J].医疗卫生装备，2019，40（1）：66-68.

[20]黃述婧，姜菲菲，王颖，等.AFP与PIVKA-Ⅱ联合检测在原发性肝癌诊断中的应用研究[J].标记免疫分析与临床，2016，23（10）：1134-1138，1128.

[21]甘雨，于新发，周成宇，等.甲胎蛋白在原发性肝癌的诊断和预后判断中的临床价值[J].海南医学，2016，27（6）：891-894.

（收稿日期：2019-6-19）（本文编辑：田婧）