卵巢上皮性癌中RBM3及CD146的表达与临床意义

曾丹 华金仁 安云婷

【摘要】 目的：分析总结卵巢上皮性癌中CD146、RNA结合基序蛋白3（RBM3）的表达与临床意义。方法：选取2018年1-12月50例卵巢上皮性癌组织标本、25例卵巢上皮良性肿瘤组织标本、同期因其他手术治疗切除25例正常卵巢组织标本，经免疫组织化学法对所有标本的RBM3及CD146表达水平进行分析。结果：卵巢上皮性癌组织中CD146与RBM3阳性表达率均高于卵巢上皮良性肿瘤与正常卵巢组织（P<0.05）;卵巢上皮性癌FIGO Ⅲ、Ⅳ期RBM3与CD146表达阳性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，中低分化卵巢上皮性癌RBM3与CD146表达阳性率均高于高分化，但差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：RBM3及CD146参与卵巢上皮性癌的形成，临床诊断工作中应引起足够的重视。

【关键词】 卵巢上皮性癌 RBM3 CD146 卵巢上皮良性肿瘤

[Abstract] Objective： To analyze the expression and clinical significance of CD146 and RNA-binding motif protein 3 （RBM3） in epithelial ovarian cancer. Method： From January to December 2018， 50 cases of ovarian epithelial carcinoma tissues， 25 cases of ovarian epithelial benign tumor tissues， and 25 cases of normal ovarian tissues removed due to other surgical treatments during the same period were selected. The expression levels of RBM3 and CD146 in all samples were analyzed by immunohistochemistry. Result： The positive expression rates of CD146 and RBM3 in ovarian epithelial carcinoma tissues were higher than those in ovarian epithelial benign tumors and normal ovarian tissues （P<0.05）. The positive expression rates of CD146 and RBM3 in ovarian epithelial carcinoma tissues FIGO Ⅲ， Ⅳ stage were higher than those in Ⅰ， Ⅱ stage， and the positive expression rates of RBM3 and CD146 in middle and low differentiated ovarian epithelial carcinoma were higher than those in high differentiated， but the differences were not statistically significant （P>0.05）. Conclusion： RBM3 and CD146 are involved in the formation of epithelial ovarian cancer， and should be paid enough attention in clinical diagnosis.

[Key words] Epithelial ovarian cancer RBM3 CD146 Ovarian epithelial benign tumor

First-authors address： Jiangxi Maternal and Child Health Hospital， Nanchang 330006， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.30.037

卵巢癌为一种常见危及女性生命健康的恶性肿瘤，据统计，其发生率逐年升高，其中卵巢上皮性癌最为常见。因卵巢所处位置隐匿，早期确诊难度大，多数患者病情确诊已处于晚期，导致患者5年存活率仅为30%～40%，威胁着女性生命健康[1]。关于该疾病的诊断方法多样，但仪器检测均为侵入性操作，会给患者造成不可避免的应激损伤，而随着临床诊断技术发展，临床提出可采用分子诊断[2]。近些年研究提出，CD146分子、RNA结合基序蛋白3（RBM3）的特异表达与恶性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌等在内的癌症疾病发生密切相关，但关于CD146、RBM3表达在卵巢上皮性癌的研究较少[3]。本次研究中，积极分析CD146、RBM3在卵巢癌组织中的阳性表达，用于指导临床诊治。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1-12月本院住院患者50例卵巢上皮性癌组织标本、25例卵巢上皮良性肿瘤组织标本、同期因子宫脱垂手术切除的25例正常卵巢组织标本。纳入标准：所有标本经HE染色后，需由两名经验丰富的病理医生共同阅片检查，符合卵巢上皮良性肿瘤或卵巢上皮性癌诊断标准。排除标准：合并肝肾功能异常、心肺功能异常等严重内外科疾病者;严重精神疾病、不能配合治疗者;术前未接受内分泌、化疗、放疗治疗者。该研究对象知情同意，且经医学伦理委员会批准同意。

1.2 方法 对各组织上的RBM3与CD146表达，经免疫组化技术定位、定性检测，主要免疫组化技术实验步骤：（1）筛选蜡块。登记每个病例的玻片号，在玻片库中，找到具体病例玻片，于显微镜下筛选最佳适合实施免疫组化玻片，并将所选择的玻片登记具体的信息。根据登记玻片信息，从蜡块库中挑选对应蜡块，制作组织切片。（2）高压抗炎修复操作：常规组织切片经二甲苯进行脱蜡处理以及梯度酒精水化处理后，浸泡在蒸馏水中，留作待用。取pH值6.0柠檬酸盐缓冲液（800～1 500 mL）放入压力锅中，大火加热处理，直至沸腾，脱蜡水化后，组织切片放入耐高温或不锈钢切片架上，加入已经沸腾缓冲液中。盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热直至喷气。自开始喷气计时，1～2 min后，拿开压力锅，冷却到室温下，将玻片取出，经蒸馏水冲洗2次，用PBS冲洗2次，冲洗时间3 min/次。（3）免疫组化染色步驟：切片脱蜡处理后进行冲洗，安装固定好塑料栏，并用蒸馏水冲洗。将柠檬酸液加入塑料栏中，之后放入微波炉中进行抗原修复。之后取出冷却15 min，倒掉柠檬酸液，再次经蒸馏水冲洗，玻片放入到试剂盒画圈，画圈后经PBS冲洗。冲洗后，加入过氧化氢，于室温下进行孵育，孵育时间10 min。PBS至少冲洗3遍后，去掉PBS，将一抗分别加入到增强剂中，于室温下孵育至少20 min。PBS冲洗3遍后，加入二抗，于室温下孵育30 min。PBS冲洗3遍后，甩去PBS液，将新调配好的DAB液体加入到每张切片上，PBS冲洗3次，冲洗时间3 min/次。采用自来水或蒸馏水冲洗，利用苏木素进行复染，采用0.1%盐酸分化，并用自来水冲洗，PBS冲洗变蓝。自来水冲洗，切片经梯度酒精进行脱水干燥处理后，采用中性树胶进行封片操作。

1.3 观察指标与判定标准 （1）比较不同卵巢组织中CD146、RBM3的表达。（2）比较卵巢上皮性癌不同FIGO分期中CD146、RBM3的表达。（3）比较卵巢上皮性癌不同病理分级CD146、RBM3的表达。由资深病理医生采用双盲法记录试验结果，CD146的阳性表现为细胞质或细胞膜显示为棕黄色颗粒，RBM3染色显示细胞核出现棕黄色颗粒而判定为阳性细胞。分别对肿瘤细胞染色强度、阳性范围评分进行评价。染色强度评分：0分无色，1分浅黄色，2分黄色，3分棕褐色[4-5]。阳性细胞染色范围：于高倍镜下显示每张切片随机选5个视野，染色范围<25%则0分（-），染色范围25%～50%则为1分（+），染色强且染色范围超过75%为3分（+++），（+）～（+++）为2分。染色强度与染色范围两种评分相乘之积≥1则为阳性表达。

1.4 统计学处理 采用SPSS 20.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 50例卵巢上皮性癌标本，黏液性囊腺癌20例、浆液性囊腺癌30例;年龄36～79岁，平均（57.0±6.2）岁;病理分级：高分化15例，中低分化35例;根据国际妇科联盟（FIGO）标准分期：Ⅰ、Ⅱ期38例，Ⅲ、Ⅳ期12例。25例卵巢上皮良性肿瘤组织标本黏液性囊腺瘤12例、浆液性囊腺瘤13例，年龄27～62岁，平均（56.8±6.0）岁。25例正常卵巢组织标本，年龄35～77岁，平均（56.5±5.7）岁。

2.2 不同卵巢组织中CD146、RBM3的表达 卵巢上皮性癌CD146、RBM3阳性表达率均高于卵巢上皮良性肿瘤与正常卵巢组织，差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 卵巢上皮性癌不同FIGO分期中CD146、RBM3的表达 Ⅲ、Ⅳ期的RBM3、CD146表达阳性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，但差异均无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.4 卵巢上皮性癌不同病理分级CD146、RBM3的表达 卵巢上皮性癌中低分化RBM3、CD1467阳性表达率均高于高分化，但差异均无统计学意义（P>0.05），见表3。

3 讨论

卵巢癌为女性生殖系统常见多发的恶性肿瘤，根据其组织来源不同，可分为转移性肿瘤、生殖细胞肿瘤、性索间质肿瘤、卵巢上皮性肿瘤，其发生率在妇科恶性肿瘤中高居首位，备受临床重视[6-7]。但因卵巢位置处于盆腔中，再加上其发病过程中相对隐匿，患者病情早期无明显症状，增加早期诊断难度，再加上当前临床并无特异性强、敏感性高的筛查方法，诊断难度大，多数卵巢癌患者病情确诊已经为FIGO Ⅲ、Ⅳ期，而且卵巢癌具有病情早期转移、化疗耐药以及复发的特点，临床诊治难度大[8-9]。因当前临床对卵巢上皮性癌的发生机制、转移机制尚未明确，临床并无确切有效的疾病筛查方法，为提高疾病的诊断率，临床需要高特异性、敏感性的生物标记物指导临床诊断、治疗以及预后[10-11]。

CD146是16个外显子共同组成单拷贝基因，编码为单链跨膜性糖基化蛋白。CD146可通过增强细胞与细胞间、细胞与细胞外基质之间相互作用，促细胞局部聚集、骨架重构，维持细胞形态、侵袭转移、调节细胞游走等发挥显著作用[12-14]。而且其还可参与多种病理生理过程，增强细胞间联系、维持组织形态、细胞间通讯等作用。临床研究发现，在黑色素瘤、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜癌、尿路上皮癌等多种恶性组织中，CD146均表现为高表达，且与临床分期高低、病理分级、组织学分化程度等病理特征密切相关，这表明CD146水平与肿瘤发生发展、复发转移以及转归等密切相关[15-17]。这些均表明CD146可以作为卵巢上皮性癌的诊断、靶向治疗以及预后的重要评估分子。

RBM3可通过改变细胞中微小RNA水平，而控制蛋白质表达，影响肿瘤病情的发展。而且临床认为RBM3为潜在原癌基因，分析原因：RBM3表达水平与肿瘤分期相关，这表明RBM3水平影响着肿瘤发生;RBM3沉默会增加G2/M期细胞数量，导致细胞最终凋亡;RBM3可提高血管内皮生长因子mRNA、IL-8、环氧化酶的稳定、翻译[18-20]。其中mRNA翻译水平变化在肿瘤发生、细胞转化中发挥着重要作用，RBM3可与mRNA直接结合，而改变mRNA二级结构，影响核糖体亚基与起始因子的访问，并调节激酶潜在活性。

本次研究中，针对卵巢上皮性癌检测CD146、RBM3这两项分子指标，结果表明，CD146、RBM3指标在卵巢上皮癌组织中阳性表达均明显高于卵巢上皮良性肿瘤、正常卵巢组织（P<0.05），而且FIGO Ⅲ、Ⅳ期的RBM3、CD146表达阳性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，中低分化RBM3、CD146表达阳性率均高于高分化，但差异均无统计学意义（P>0.05）。可能与本研究样本量较少有关，但这表明RBM3、CD146分子参与卵巢癌发生发展，与上述理论研究内容基本相符，临床可根据这两项分子指标对卵巢上皮性癌进行诊治，临床在今后的诊治工作中，应对这两项指标引起足够的重视。

綜上所述，CD146、RBM3的高表达与卵巢上皮性癌的发生发展密切相关，可用于指导临床诊治的重要参考指标，应用价值显著。

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（收稿日期：2019-07-01） （本文编辑：田婧）