荷青花全草有机成分的分离与鉴定

冯磊，李飞，于梦娟，魏恩巍，吴思桐，曲明慧，王一孝，王广树

（吉林大学药学院，长春 130021）

荷青花〔Hylomecon japonica（Thunb.） Prantl et Kundig（Papaveraceae）〕为罂粟科荷青花属植物，多年生早春类短命植物，分布于我国东北至华中、华东地区[1]。荷青花全草具有祛风除湿、舒筋活血、消肿止痛等功效[2]。目前文献中有关荷青花全草的化学成分仅为生物碱类、酚类、皂苷类等化合物[3-5]。关于荷青花全草化学成分的研究较少，本研究对荷青花全草植物中10%乙醇提取物进行化学成分的分离及鉴定，为进一步探究荷青花植物的开发利用及其有效成分药理活性筛选奠定了坚实基础。

1 材料、仪器与试剂

1.1 试验材料

荷青花全草于2015 年6～8 月采自吉林省双阳市，经洗涤、干燥后保存于实验室，备用，经吉林大学药学院生药学教研室张静敏教授鉴定为荷青花〔H．japonica（Thunb.）Prantl et Kundig（Papaveraceae）〕。

1.2 仪器与试剂

Varian UNITYINOVA2400 核磁共振仪（BRUKER公司）；LDI1700-TOF-MS激光解吸电离飞行时间质谱仪（惠普公司）；LC-10AT高效液相色谱仪（岛津公司）；SHB-IIIA循环水式多用真空泵（上海豫康科教仪器有限责任公司）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器有限责任公司）；DHG-9030A 电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏公司）；KQ-250B 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；D-101 吸附型大孔树脂（天津农药股份有限公司树脂分公司）；薄层色谱硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；柱色谱硅胶（青岛恒泽硅胶制品有限公司）；所用试剂均为分析纯（北京化工集团有限公司）。

2 提取与分离

2.1 浸提

干燥的荷青花全草，经70%乙醇浸提，过滤，旋转蒸发器浓缩后得到提取物浸膏，备用。

2.2 洗脱

将浓缩得到的提取物浸膏上样于预处理过的D101 大孔吸附树脂柱并进行梯度洗脱，洗脱剂条件为乙醇（0%、10%、30%、50%、70%、95%），薄层色谱监测发现，10%乙醇洗脱效果较好，故收集得到10%乙醇洗脱物。

2.3 分离

将10%乙醇洗脱物反复进行硅胶柱色谱分离，展开剂条件为氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水（1.5∶1.8∶4.0∶1.0），分离 4 次得到A、B、C、D 4 个组分，将 4 个组分经薄层色谱与硅胶柱色谱多次分离。薄层色谱展开剂条件为氯 仿∶ 甲 醇∶ 乙 酸 乙 酯∶ 水∶ 甲 酸（1.5∶3.5∶4.0∶0.5∶0.5），硅胶柱色谱展开剂条件为氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水（1.5∶2.5∶4.0∶1.0），最终得 A1、B1、C2、C4、D1 和 D2 6 个组分。

2.4 纯化

将分离得到的6 个组分经高效液相色谱纯化，色谱条件为色谱柱：Gemini 5m C1（8250 10 mm）；检测波长：254 nm；流速：3.0 mL/min；进样量：50L；柱温：25 ℃；流动相：乙腈（A）与0.1%甲酸（B）。洗脱条件（A1、B1：0～9.00 min CB 97%，9.01～30.00 min CB 97%～90%；C2：0～30.00 min CB 85%～70%；C4：0～13.00min CB 76%；D1、D2：0～10.00min CB72%），分别得到化合物1～7。

3 结构鉴定

3.1 化合物1

室温下为白色粉末，易溶于甲醇，10%硫酸-乙醇加热显色为黄色，Molish 反应阳性，说明该结构连有糖基。HR TOF-MS m/z：[M+Na]+443.1144，结合13CNMR、1H-NMR 得出分子式为 C17H24O12。1H-NMR（400MHz, DMSO-d6） ：8.14（1H, d, J=5.6Hz, H-6），6.44（1H,d,J=5.6Hz,H-5），2.50（1H,s,H-7），4.70（1H,d,J=7.6Hz,H-1'），3.57（2H,d,J=9.2Hz,H-6'），3.28（m,H-3'），3.32（m, H-5'），3.39（m, H-2'），3.42（m, H-4'），4.81（1H,d,J=2.8,H-1''），3.81（1H,d,J=2.2Hz,H-2''），4.24（1H, t, J=12.8Hz, H-4''），3.57（2H, s, H-5''）；13CNMR（100MHz, DMSO-d6） ：15.1（-CH3），174.2（C-4），161.5（C-2），155.8（C-6），141.7（C-3），116.1（C-5），109.1（C-1''），103.6（C-1'），78.8（C-3''），76.2（C-2''），75.8（C-4''），63.2（C-5''），75.8（C-3'），73.7（C-5'），73.2（C-2'），69.8（C-4'），67.4（C-6'）。上述信号归属是通过HMQC、H-H COSY、HMBC 二维核磁共振谱完成的。以上理化常数、质谱数据、1H-NMR、13CNMR 数据与文献[6]一致，故化合物1 鉴定为麦芽醇-6'-O- -D-呋喃芹糖基- -D-吡喃葡萄糖苷（maltol-6'-O- -D-apiofuranosyl-glucop-yranoside）。

3.2 化合物2

室温下为黄色油状物，易溶于甲醇，10%硫酸-乙醇加热显色为红棕色，三氯化铁反应阳性，说明该结构为酚类化合物。1H-NMR（400MHz,DMSO-D6） ：7.73（2H, m, H-3'），7.69（2H, m, H-4', H-6'），7.65（1H, m,H-5'），4.24（1H, dt, J=6.4Hz, H-1），4.14（1H, dt,J=6.4Hz, H-2'），2.51（1H, m, H-3），1.67（1H, m,J=6.8Hz, H-7），1.42（2H, m,J=15.2Hz, H-2），1.31（4H,m, J=12Hz, H-4, H-5），1.23（2H, m, J=13.2Hz, H-6），0.93（3H,d,J=7.2Hz,H-8），0.89（3H,d,J=7.4Hz,H-9），0.86（3H, t, J=5.1Hz, H-10）；13C-NMR （100MHz,DMSO-d6）：167.0（C-1'），131.7（C-2'），131.6（C-3'），131.5（C-7'），128.6（C-4', C-5', C-6'），67.4（C-1），38.1（C-3），30.0（C-7），29.8（C-4），28.3（C-2），23.2（C-5），22.4（C-6），13.9（C-9），13.5（C-8），10.8（C-10）。1HNMR、13C-NMR 数据与文献[7]一致，故鉴定化合物2为3,7-二甲基-正辛基-1-苯甲酸（3,7-dimenthyl-n-octan-1-ethyl benzoate）。

3.3 化合物3

室温下为无色油状物，易溶于甲醇，微溶于水，10%硫酸-乙醇加热显色为淡黄色，三氯化铁反应阳性，说明该结构为酚类化合物。1H-NMR（400MHz,DMSO-d6） ：7.71（2H,m,H-2',H-6'），7.67（1H,m,H-4'），7.65（2H, m, H-3', H-5'），4.32（2H, t, J=6.4Hz, H-1），1.71（2H, m, H-2），1.47（2H , m, H-3），1.28（3H, t, -CH3）；13C-NMR（100MHz, DMSO-d6）：166.9（C-1'），131.6（C-7'），131.4（C-4'），128.6（C-5'），128.0（C-6'），69.7（C-1），29.9（C-2），22.0（C-3），13.5（C-4）。1H-NMR、13C-NMR 数据与文献[8]一致，故鉴定化合物3 为苯甲酸丁酯（butyl benzoate）。

3.4 化合物4

室温下为黄色粉末，易溶于甲醇，10%硫酸-乙醇加热显色为黄色，三氯化铁反应阳性，说明该结构为酚类化合物。1H-NMR（400MHz,DMSO-d6） ：7.71（2H,m, H-2'），7.68（1H, m, H-6'），7.28（1H, d, H-3'），4.23（2H,t,J=6.4Hz,H-1'），0.94（3H,t,J=5.2Hz,H-2'）；13CNMR（100MHz, DMSO-d6） ：167.1（C-1），131.8（C-2,C-6），128.6（C-3, C-5），126.3（C-7），65.2（C-1'）, 28.9（C-2'）。1H-NMR、13C-NMR 数据与文献[9]一致，鉴定化合物4 为苯甲酸乙酯（ethyl benzoate）。

3.5 化合物5

室温下为白色粉末，易溶于甲醇，微溶于水，10%硫酸-乙醇加热显色为紫色，三氯化铁反应阳性，说明该结构为酚类化合物。1H-NMR（400MHz,DMSO-d6）：7.43（2H, d, J=6.4Hz, H-2, H-3），6.84（1H, d,J=8.4Hz, H-6），3.90（3H, s, H-8）；13C-NMR（100MHz,DMSO-d6）：150.8（C-4），147.1（C-5），122.7（C-6），122.4（C-2），114.9（C-3），132.2（C-1），55.5（C-8）。1HNMR、13C-NMR 数据与文献[10]一致，故鉴定化合物5 为香草酸（vanillicacid）。

3.6 化合物6

室温下为白色粉末，易溶于甲醇，微溶于水，10%硫酸-乙醇加热显色为棕色，三氯化铁反应阳性，说明该结构为酚类化合物。1H-NMR（400MHz,DMSO-d6）：7.43（2H, d, J=6.0Hz, H-5, H-6），6.83（1H, d,J=8.4Hz, H-9），3.79（6H, s, H-2, H-3）；13C-NMR（100MHz, DMSO-d6） : 167.6（C-4），150.8（C-7），147.1（C-8），123.3（C-4），122.4（C-5），114.9（C-6），112.7（C-9），55.5（C-3），48.6（C-2）。1H-NMR、13CNMR 数据与文献[11]一致，故鉴定化合物6 为香草酸甲酯（methyl vanillic acid）。

3.7 化合物7

室温下黄色固体，易溶于甲醇，硫酸-乙醇加热显色为黄色，Molish 反应阳性，说明该结构中连有糖基。1H-NMR（400MHz,DMSO-d6） ：4.23（1H,d,J=2.4Hz,H-4'），3.52（1H,m,H-2'），3.69（1H,m,H-3'），3.53（1H,dd, J=8.0Hz, H-5'），7.62（1H, d, J=16.0Hz, H-8），7.01（1H, s, H-6），6.78（2H, s, H-7），5.40（1H, d, J=1.6Hz,H-1'）；13C-NMR（100MHz, DMSO-d6） ：123.4（C-5），114.8（C-7），143.7（C-8），147.6（C-1），115.8（C-6），123.4（C-5），147.6（C-1），119.0（C-4），166.8（C-9），107.5（C-1'），84.1（C-4'），74.8（C-3'），80.0（C-2'），59.9（C-5'）。1H-NMR、13C-NMR 数据与文献[12,13]一致，鉴定化合物7 为咖啡酸-1-O--L-呋喃阿拉伯糖苷（Caffeic acid-1-O--L-oxole-arbinoside）。

4 结果与讨论

本研究运用醇提法对采集自吉林省长春市双阳区的荷青花全草植物进行了处理，采用多种色谱分离技术对荷青花全草植物提取物进行分离得到了7 个化合物，结合每个化合物的理化常数、质谱数据、1H-NMR、13C-NMR数据及相关文献[6-10]，最终得到7 个单体化合物，分别为麦芽醇-6'-O- -D-呋喃芹糖基- -D-吡喃葡萄糖苷（1）、3,7-二甲基-正辛基-1-苯甲酸（2）、苯甲酸丁酯（3）、苯甲酸乙酯（4）、香草酸（5）、香草酸甲酯（6）、咖啡酸-1-O--L-呋喃阿拉伯糖苷（7）。1～7 化合物均是首次从荷青花全草植物中分离得到，其中化合物1 为罂粟科中首次分离得到。本试验的结果为进一步探究该植物的药理作用提供了科学依据，为荷青花的化学成分和药理活性提供了一定的参考。