西洋参-白花蛇舌草药对联合化疗治疗晚期食管腺癌临床疗效及对UHRF1表达的影响

王 俊,贺 侠,刘越洋,黄雅慧

(陕西省西安市中医医院，陕西 西安 710021)

食管腺癌是指发生于食管远端与胃交界区域的腺癌，它在全球范围内的发生率近年有了明显增高[1]。而大多数食管腺癌就诊时已是晚期，化疗成为主要治疗手段。奥沙利铂是第三代铂类抗肿瘤药，与顺铂(DDP)比较，有更强的细胞毒作用，与5-氟尿嘧啶(5-Fu)等化疗药有协同作用。亚叶酸钙(CF)是生化调节剂，本身没有抗肿瘤作用，但可以通过调节5-Fu的生化代谢，使5-Fu的抗癌细胞反应明显加强[2-3]。但单纯化疗毒副反应发生率较高，部分患者不能耐受，影响疗效。笔者观察了以“扶正祛毒”为立法的西洋参-白花蛇舌草药对联合FOLFOX4方案治疗食管腺癌的疗效、毒副反应发生情况及对UHRF1表达的影响，现将结果报道如下。

1 临床资料

1.1纳入标准 ①经病理学确诊为晚期食管腺癌患者且PS≤2分;②应用以DDP为主方案治疗后疾病进展者;③无食管放射治疗适应证,预计生存期大于3个月;④受试者知情同意，并签署相关文件;⑤无严重心、肝、肾等重要脏器的器质性疾病，血常规及肝、肾功能等实验检查均大致正常。

1.2排除标准 无明确的肿瘤病灶(包括可测量和不可测量的)者；妊娠期或哺乳期妇女；有明显的梗阻症状者；合并严重的心脑血管疾病，或精神障碍等疾病者；依从性差者。

1.3一般资料 选择本院2010年1月—2017年6月收治且符合上述标准的Ⅲ～Ⅳ期食管腺癌患者60例，随机分为化疗组(A组)、药对化疗组(B组)各30例，另选30例Ⅲ～Ⅳ期食管腺癌拒绝放化疗患者作为拒绝化疗单纯药对组(C组)。A组男19例，女11例；年龄45～76岁，平均55.6岁。B组男18例，女12例；年龄42～75岁，平均56.2岁。C组男20例，女10例；年龄为45～75岁，平均56.4岁。3组性别、年龄比较差异无统计学意义(P均>0.05)。

1.4治疗方法 A组给予FOLFOX4双周方案化疗：奥沙利铂(江苏奥赛康药业股份有限公司生产，国药准字H20064296，规格：50 mg/瓶)85 mg/m2静脉滴注2 h，第1天；亚叶酸钙400 mg/m2静脉滴注2 h,第1，2天；5-氟尿嘧啶400 mg/m2静脉推注后,以600 mg/m2持续静脉泵入22 h，第1,2天。B组在A组的基础上给予西洋参-白花蛇舌草汤药(西洋参20 g、白花蛇舌草15 g)100 mL口服，早晚各1次。C组仅给予西洋参-白花蛇舌草汤药100 mL口服，早晚各1次。每4周为1个周期，评价1次疗效，治疗至完成12周或肿瘤发生进展。

1.5观察指标

1.5.1近期疗效 采用电子胃镜及CT观察，根据WHO实体瘤客观疗效评定标准[4]分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、无变化(SD)和进展(PD)，以CR+PR+SD计算疾病控制率(PCR)。

1.5.2生活质量 根据KPS评分按文献[4]评价，治疗后较治疗前提高10分以上为提高，减少10分以上为降低，变化不足10分为稳定。

1.5.3毒副反应 按抗肿瘤药物毒副反应评价标准[4]进行评定，观察3组白细胞降低、血小板降低、胃肠道反应、肝功能异常、心脏毒性、神经系统毒性等不良反应发生情况。

1.5.4UHRF1蛋白表达检测 治疗前后经胃镜取材实体肿瘤组织，一块组织标本经4%甲醛固定、石蜡包埋后,切成4 μm厚连续切片；常规切片脱蜡至水、抗原修复后,按照免疫组化试剂盒(购自北京中杉金桥生物技术有限公司)说明书对标本进行免疫组化染色(UHRF1 抗体工作浓度为1∶100)；于光学显微镜下计数细胞,每例标本计数3张切片,每张切片随机选取5个高倍视野；结果判断以细胞染色强度和阳性细胞百分率得分之和进行判定[5]。染色程度评分：基本不染色为0分，染色淡为1分，染色适中为2分，染色深为3分；染色细胞百分比评分：5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～70%为3分，71%～100%为4分。2项评分相加0～1分为“-”，2～3分为“+”,4～7分为“”。将染色“-”定义为阴性，“+”和“”定义为阳性。

1.5.5UHRF1 mRNA表达检测 治疗前后经胃镜取材实体肿瘤组织，置于液氮中研磨,采用TRIzol提取细胞的总RNA,根据RT-PCR试剂盒(购自北京索来宝试剂有限公司)；说明将RNA转录成cDNA,UHRF1基因引物序列:上游引物5’-CGTGGTCCAGATGAACTCC-3’,下游引物5’-CACGTTGGCGTAGAGTTCC-3’,片段大小193 bp;内参照GAPDH基因引物序列:上游引物5’-TGACTTCAACAGCGACACCCA-3’,下游引物5’-CACCCTGTTGCTGTAGCCAAA -3’,片段大小121 bp 。PCR 反应条件:95 ℃15 s(预变性)；95 ℃ 5 s(变性)、60 ℃ 30 s(退火)、72 ℃ 45 s(延伸),共45个循环。

1.6统计学方法 采用SPSS19.0进行统计学分析。等级资料采用秩和检验，计数资料采用2检验，计量资料则应用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1近期疗效比较 B组控制率明显高于其他2组(P均<0.05)。见表1。

表1 各组近期疗效比较

注：①与B组比较，P<0.05。

2.2生活质量比较 B组生活质量明显优于A组和C组(P均<0.05)，A组生活质量最差。见表2。

表2 各组生活质量比较 例(%)

注：①与A组比较，P<0.05;②与B组比较，P<0.05。

2.3KPS评分比较 治疗前A组KPS评分(65.4±5.45)分，B组(66.5±7.56)分，C组(66.4±6.05)分，各组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗后A组KPS评分(57.5±4.65)分，B组(73.3±6.78)分，C组(61.2±2.24)分， B组KPS评分明显高于其他2组(P均<0.05)。

2.4毒副反应比较 A组、B组毒副反应发生率明显高于C组(P均<0.05),但B组毒副反应发生率明显低于A组(P<0.05)。见表3。

表3 各组治疗后毒副反应发生情况比较 例(%)

注：①与C组比较，P<0.05;②与A组比较，P<0.05。

2.5治疗前后食管腺癌黏膜中UHRF1蛋白表达情况比较 治疗前，A组、B组、C组UHRF1蛋白阳性表达率分别为89%，85%，87%；治疗后，3组UHRF1蛋白阳性表达率分别为74.0%，48.5%，77.5%。3组治疗后UHRF1蛋白阳性表达率均较治疗前明显降低(P均<0.05),且B组明显低于其他2组(P均<0.05)。

2.6治疗前后食管腺癌黏膜中UHRF1 mRNA比较3组治疗后食管腺癌黏膜中UHRF1 mRNA表达水平均较治疗前明显降低(P均<0.05)，其中B组与其他2组对比UHRF1表达减少更加显著(P均<0.05)。见图1。

3 讨 论

食管腺癌是食管黏膜下或者贲门腺体发生的恶性肿瘤，其发生多与饮食习惯不良相关，长期食用过热、过硬及粗糙或含有较多的亚硝酸盐食物有关，该病发病过程中的遗传因素也是最近研究热点。现代医学手术及放化疗使得食管腺癌的预后得到不同程度的改善，对于晚期食管腺癌患者，临床上主要采用姑息化疗为主[5]。奥沙利铂抗癌活性强，对多种肿瘤有效，但其为有毒之品，在治疗的同时亦有明显的毒副作用。中药可以治疗很多疾病尤其是自身免疫性疾病和肿瘤等, 而且以不良反应小而著称。

图1 治疗前后食管腺癌黏膜中UHRF1表达水平比较

食管腺癌属中医“噎膈”范畴，《内经》首先指出其与人身之津液有关。根据笔者前期的研究发现，脾虚肝郁血阻是其基本病机，脾胃素虚是其发病基础；忧思恼怒，情志失调，导致肝失疏泄，气机不利，使得肝气犯胃是其发病关键；肝郁日久，气郁化火是其转变特点；气机郁滞，血行不畅，故血瘀内结加重耗气伤阴是其最终结局[6-10]。西洋参-白花蛇舌草药对中西洋参性味苦、微甘、寒，归心肺胃经，具有补元气，补肺心肾脾气阴,清火生津的功效，笔者临床应用取其补元气而不燥，补脾气，兼能润，清其火，能生津的作用，补益脾胃之素虚；白花蛇舌草性微苦、甘，寒，归胃、大肠、小肠经，主要有清热解毒消痈之功，对于郁滞过久而化热，血瘀内结的晚期肿瘤患者，可起到明显的解毒散结之功[11]。两种药物联合使用，可起到补脾胃、益津气、清热毒、消瘀结之效。现代药理研究发现，西洋参主要含皂苷类及多糖成分，其中皂苷类具有明显的抗肿瘤作用，其作用机制一是改变肿瘤细胞膜的通透性，抑制胞内药物的流出；二是抑制细胞的分裂周期，诱导凋亡，而多糖也可起到免疫调节及抗肿瘤作用[12-13]。白花蛇舌草主要成分包括黄铜类、萜类、多糖等成分，均具有抗肿瘤、增强免疫的功能，还可直接作用于肿瘤细胞，从基因水平、分子水平、信号传导的调节、理化因素等多个方面影响肿瘤细胞的增殖[14-16]。两药联合化疗药物，可达到明显的增效减毒作用。

本研究结果显示，B组有效率明显高于其他2组，对于晚期食管癌二线治疗而言，药对联合西药能取得类似一线标准方案效果，说明该方案有其可取之处；本研究结果还显示治疗后B组KPS评分明显高于其他2组，表明西洋参-白花蛇舌草药对联合化疗能提高晚期食管癌患者生活质量。A、B 2组患者毒副反应均主要为骨髓抑制、胃肠道反应、外周神经毒性及心脏毒性反应，但B组的毒副反应明显减轻，提示西洋参-白花蛇舌草药对联合化疗具有保护骨髓造血功能作用，可提高患者对化疗的顺应性。

UHRF1也称ICBP90，存在于人和小鼠中，是在酵母单克隆中分离的蛋白质。UHRF1是一种核蛋白，其在确保DNA甲基化的正确复制中起重要作用。SRA结构域是其与DNA结合的关键区域，UHRF1还能够通过PHD结构域结合二甲基和三甲基的H3K9多肽，表明UHRF1具有对DNA和组蛋白甲基化的双重识别功能[17]。UHRF1在肺癌、结肠直肠癌和肝细胞癌以及肿瘤进展期均呈过表达[18-19]，其与食管腺癌的细胞增殖也有着密不可分的关系，肿瘤分化程度越低，UHRF1表达越高[20]。本研究结果显示西洋参-白花蛇舌草联合化疗可降低UHRF1基因的表达。

综上所述，西洋参-白花蛇舌草药对联合化疗治疗进展期晚期食管腺癌能改善晚期食管癌患者的生活质量，减轻化疗毒性反应，并能降低UHRF1基因的表达。