解毒化瘀方对S180荷瘤小鼠5-氟尿嘧啶化疗的增效减毒作用研究

张洁婷，云 璐，李海僖，杨 海

(山东省青岛市中心医院，山东 青岛 266042)

5-氟尿嘧啶(5-Fu)属于细胞毒类药物，是肿瘤化学治疗的重要药物，其抗瘤谱较广，主要用于治疗消化道肿瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、宫颈癌、膀胱癌及皮肤癌等[1]。但是由于5-Fu杀灭肿瘤细胞的非特异性，致使该药物毒副反应较大，患者治疗过程中耐受性差。近些年中药用于肿瘤治疗的研究越来越多，发现中药可通过降低化疗药物的毒性反应和/或提高化疗药物的敏感性等发挥减毒增效作用[2-4]。解毒化瘀方是临床使用多年的验方，可提高患者化疗耐受性及依从性，增强患者机体免疫力[5]，且实验研究发现该组方具有促进小鼠淋巴细胞增殖、增强NK细胞杀伤力作用[6-7]。本研究观察了解毒化瘀方对S180荷瘤小鼠5-Fu化疗效果及毒副作用的影响，旨在为该方的临床应用提供更多依据。

1 实验资料

1.1实验动物及瘤株 雄性昆明种健康小鼠，体质量22～24 g，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：SCXK(鲁)20140007，动物实验经医学实验动物管理委员会批准。S180肉瘤肿瘤株由首都医科大学提供，并于青岛海洋生物医药研究院新药筛选与评价中心实验室由昆明小鼠体内腹水传代保存。

1.2实验药物 5-Fu购于阿拉丁(批号：J1330022)。解毒化瘀方组成：黄芪、白术各18 g，茯苓、仙鹤草、鱼腥草、茵陈、虎杖、淫羊藿、海藻各15 g，龙葵30 g，姜半夏、制大黄各10 g，经传统方法煎煮后原液浓缩至480 mg/mL。每次给药现用现取，混匀后使用，给药期间药物储存在4 ℃条件下。

1.3主要实验仪器 超净台(SW-CJ-2F)：苏州净化设备有限公司；倒置显微镜(BX53):日本奥林帕斯公司；十万分之一天平(MS105DU)：瑞士梅特勒公司；离心机Thermo 21R：美国Thermo公司；超低温冰箱(DW-86L388A):中国海尔公司；高压灭菌锅(MLS-3781L)：日本三洋公司；超净纯水器(AdvantageA5):美国密理博公司。

1.4实验方法

1.4.1肿瘤接种 参照文献[8]方法。肿瘤细胞均采用3次传代后活化的S180肉瘤细胞，小鼠经断颈处死后，抽取腹水，收集S180肉瘤腹水细胞，并用无菌生理盐水稀释成1 000万/mL 细胞悬液。抽取细胞悬液，常规消毒后按每只0.2 mL接种于小鼠右前肢腋部皮下，每只小鼠接种200万细胞，制备S180小鼠肉瘤的实体瘤动物模型。

1.4.2分组处理 将接种肿瘤细胞后的小鼠随机分为生理盐水组、10 mg/kg 5-Fu组、20 mg/kg 5-Fu组、1 200 mg/kg中药组、2 400 mg/kg中药组、10 mg/kg 5-Fu联合1 200 mg/kg中药组、10 mg/kg 5-Fu联合2 400 mg/kg中药组，每组14只。接种24 h后开始给予相应干预13 d，5-Fu腹腔注射，隔日1次；中药灌胃，每日1次；生理盐水组灌胃中药同等体积的生理盐水。

1.4.3指标观察 ①在实验期间记录各组小鼠的一般情况(饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、中毒表现和死亡情况等)，每日称体质量并记录。②末次给药后24 h处死各组小鼠，剥离其肿瘤组织，称取肿瘤质量，参照文献[9]中公式计算肿瘤抑制率。肿瘤抑制率(%)=[1-(实验组平均瘤质量/对照组平均瘤质量)]×100%。③同时摘取各组小鼠的胸腺及脾脏，剥离被膜，分别称取小鼠的胸腺及脾脏质量，参照文献[10]中公式计算胸腺及脾脏指数。胸腺指数=100×胸腺质量/体质量；脾脏指数=100×脾脏质量/体质量。

2 结 果

2.1各组S180荷瘤小鼠一般情况及体质量变化 各中药组给药后小鼠精神状态、被毛光泽度、日常活动情况均优于生理盐水组及单纯5-Fu组，实验过程中无小鼠发生变态反应。干预13 d后，20 mg/kg 5-Fu组小鼠体质量明显低于其他组(P均<0.05)，其他各组小鼠体质量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，见表1及图1。

表1 各组S180荷瘤小鼠干预前及干预结束后体质量比较

注：①与20 mg/kg 5-Fu组比较，P<0.05。

图1 实验期间各组S180荷瘤小鼠体质量变化

2.2各组S180荷瘤小鼠肿瘤质量与肿瘤抑制率比较 10 mg/kg 5-Fu组、20 mg/kg 5-Fu组、10 mg/kg 5-Fu联合1 200 mg/kg中药组、10 mg/kg 5-Fu联合2 400 mg/kg中药组肿瘤质量均明显低于生理盐水组和1 200 mg/kg中药组、2 400 mg/kg中药组(P均<0.05)，生理盐水组、1 200 mg/kg中药组、2 400 mg/kg中药组肿瘤质量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。20 mg/kg 5-Fu组、10 mg/kg 5-Fu联合1 200 mg/kg中药组、10 mg/kg 5-Fu联合2 400 mg/kg中药组肿瘤抑制率均明显高于10 mg/kg 5-Fu组(P均<0.05)，且10 mg/kg 5-Fu联合1 200 mg/kg中药组肿瘤抑制率明显高于20 mg/kg 5-Fu组和10 mg/kg 5-Fu联合2 400 mg/kg中药组(P均<0.05)。见表2。

表2 各组S180荷瘤小鼠肿瘤质量与肿瘤抑制率比较

注：①与生理盐水组比较，P<0.05；②与10 mg/kg 5-Fu组比较，P<0.05；③与10 mg/kg 5-Fu联合1 200 mg/kg中药组比较，P<0.05。

2.3各组S180荷瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数比较10 mg/kg 5-Fu组、20 mg/kg 5-Fu组胸腺指数均明显低于生理盐水组(P均<0.05)，2 400 mg/kg中药组胸腺指数明显高于生理盐水组(P<0.05)，其他组胸腺指数与生理盐水组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。20 mg/kg 5-Fu组脾脏指数明显低于生理盐水组(P<0.05)，其他组脾脏指数比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表3。

表3 各组S180荷瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数比较

注：①与生理盐水组比较，P<0.05 。

3 讨 论

目前治疗恶性肿瘤的方式主要有化疗、放疗、手术等，其中化疗在肿瘤的综合治疗中占有重要地位。但是化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时也存在一定的毒副反应，故如何提高治疗效果、减轻毒副反应一直是临床亟待解决的问题。相关研究表明，丹参、仙茅等多种中药可影响肿瘤的生长代谢过程，调控机体的免疫功能和内分泌功能，可减轻肿瘤患者症状及化疗药物毒副作用，从而提高肿瘤患者生存周期和生活质量[11-13]。本研究所选解毒化瘀方经临床应用显示出较好作用，为进一步探讨该方不同剂量单用和与5-Fu联合应用的效果，笔者进行了相关动物实验。

本实验过程中，各组小鼠均无过敏中毒等不良反应，各中药组小鼠的精神状态和被毛的光泽度优于生理盐水组，说明解毒化瘀方单用或联合5-Fu对实验小鼠均无明显的毒害作用。实验中20 mg/kg 5-Fu组小鼠体质量明显降低，而10 mg/kg 5-Fu和不同剂量解毒化瘀方联合应用小鼠体质量与生理盐水组相比差异不显著；20 mg/kg 5-Fu组肿瘤抑制率明显高于10 mg/kg 5-Fu组，不同剂量中药单独给药均无明显抗肿瘤作用，但是不同剂量中药联合10 mg/kg 5-Fu用药后肿瘤抑制率明显高于20 mg/kg 5-Fu组，其中中药低剂量联合5-Fu效果更好，呈明显的增效作用，这可能与低浓度药液小鼠吸收更好有关。10 mg/kg 5-Fu组和20 mg/kg 5-Fu组小鼠胸腺指数均显著降低，表明5-Fu对胸腺具有明显的毒害作用；不同剂量中药联合5-Fu组，小鼠胸腺指数略高于相同剂量的5-Fu组但差异不明显，证明中药联合给药对5-Fu造成的小鼠胸腺损害具有一定的缓解作用，提示在抗肿瘤过程中解毒化瘀方有减轻5-Fu对胸腺等免疫器官损害作用的趋势；此外，2 400 mg/kg中药组小鼠胸腺指数明显增高，进一步证明解毒化瘀方可提高免疫活性。对小鼠脾脏指数的观察发现，20 mg/kg 5-Fu组脾脏指数明显降低，而不同剂量中药组和不同剂量中药联合5-Fu组脾脏指数与生理盐水组比较差异不明显，可见解毒化瘀方对脾脏指数影响不明显。

综上所述，解毒化瘀方单独使用对S180荷瘤小鼠肿瘤生长无抑制作用，与5-Fu联合使用具有明显抑制肿瘤生长的作用，并可明显降低5-Fu对免疫器官的毒害作用，为该中药组方与化疗药物的联合应用提供了理论支持。但该中药组方能否降低5-Fu所致的骨髓抑制作用及其增效减毒作用机制尚不明确，有待进一步研究。