国产地氯雷他定片的溶出曲线考察

陈承贵，李美芳，庞发根，李玉兰，王铁杰

（广东省深圳市药品检验研究院·深圳市药品质量标准研究重点实验室，广东 深圳 518057）

地氯雷他定（desloratadine）是美国先灵葆雅公司在1988年开发的强力长效三环类抗组胺药，是氯雷他定主要活性代谢物（去乙氧羧基氯雷他定），对H1受体具有强效和高选择性的阻断作用，还具有不依赖于组胺H1受体独特的抗炎活性和作用机制，主要用于治疗过敏性鼻炎和慢性特发性荨麻疹［1-2］。地氯雷他定是2016年国家药品评价性抽验选定品种，剂型包括片剂、分散片、胶囊、干混悬剂和糖浆剂。溶出度是固体制剂的重点评价项目，目前国内外均将该指标作为仿制药与原研产品比较的重要评价项目。根据其质量标准［3-7］，国内不同标准中溶出度检查均为小杯法，溶出介质和转速等条件不尽相同，很难区分国产药品之间及国产药品与原研药品之间的质量差异。依据《国家药品安全“十二五”规划》要求，本研究中针对地氯雷他定片开展仿制药一致性评价，为全面提高仿制药的质量提供参考。通过研究国产制剂与原研制剂溶出曲线一致性，使各企业对产品自身质量有较全面的了解，为企业提高产品质量提供改进方向与参考。

1 仪器与试药

仪器：AT 7smart型溶出仪（瑞士 Sotax公司）；XS205DU型电子天平（瑞士梅特勒公司）；ZKT-18F型真空脱气机（天津市天大天发科技有限公司）；Alliance 2695-2998型高效液相色谱仪（美国沃特世公司）。

试药：磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠、氯化钠、醋酸、醋酸钠、盐酸（分析纯，广州化学试剂厂）；甲醇（色谱纯，德国默克公司）；三氟乙酸、三乙胺（色谱纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；水（实验室自制）；地氯雷他定对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100919-200902，纯度为 99.7%）；地氯雷他定片（原研片剂，默沙东公司，批号为M021462，规格为每片5 mg）；地氯雷他定片（厂家1，批号为150825，规格为每片5 mg；厂家2，批号为AG20150802，规格为每片5 mg；厂家3，批号为1606030，规格为每片 5 mg；厂家 4，批号为 150501，规格为每片 5 mg；厂家 5，批号 150201，规格为每片 2.5 mg）。

2 方法与结果

2.1 溶出试验方法

2.1.1 溶出介质

根据《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》及参考日本“药品品质再评价”工程，采用不同pH的4种溶出介质［8-9］，分别为 pH 1.2盐酸溶液（取氯化钠2.0 g，加水适量使溶解，加盐酸7 mL，再加水稀释至1 000 mL，即得），pH 4.0 醋酸盐缓冲液［0.05 mol／L 醋酸溶液 -0.05 mol／L 醋酸钠溶液（16.4 ∶3.6，V／V）比例混合，即得］，pH 6.8磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾3.4 g和无水磷酸氢二钠3.55 g，加水适量使溶解，定容至1 000 mL，再稀释1倍，即得），水；同时增加国内现行标准 2种溶出介质，分别为0.01 mol／L盐酸溶液和0.1 mol／L 盐酸溶液，溶出介质均为 500 mL［10］。

2.1.2 溶出条件

依据2016年国家评价性抽验“地氯雷他定”品种的探索性研究［11］，参照美国药典 （USP 40-NF 35）中地氯雷他定片各论项下的溶出度项目规定，设置地氯雷他定片原研片剂溶出度条件为桨法，转速为 50 r／min［10］。

2.1.3 取样时间

溶出介质pH 6.8磷酸盐缓冲液和水取样时间点为5，10，15，20，30，45，60，90，120，150 min，其余 4 种溶出介质下的取样时间点为 5，10，15，20，30，45，60 min。

2.2 溶出量测定

2.2.1 溶液制备

取样品6片，按拟订条件试验，分别取溶液5 mL，取液，补加同温度同体积相同溶出介质，取续滤液作为供试品溶液。另取地氯雷他定对照品适量，精密称定，用溶出介质溶解并稀释至每1 mL约含10 μg（规格为2.5 mg的每 1 mL约含 5 μg）的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 色谱条件［11］

色谱柱：ZorbaxEclipseXDB-C8柱（150mm ×4.6mm，5 μm），用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：0.5%三氟醋酸溶液（用三乙胺调 pH至6.3）-甲醇（45 ∶55）；检测波长：240 nm；流速：1.0 mL ／min；柱温：30℃；进样量：20 μL。精密量取供试品溶液和对照品溶液20 μL，分别注入色谱仪，记录色谱图，见图1。按外标法以峰面积计算每片的溶出量。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察：取地氯雷他定对照品适量，精密称定，分别加入拟订的6种溶出介质，溶解并稀释至每1 mL含0.5mg的溶液，作为贮备液，分别精密量取1.00，2.50，5.00，10.00，25.00，50.00，100.00，200.00 mL，置500 mL容量瓶中，分别加入上述6种溶出介质稀释至刻度，摇匀，按拟订色谱条件测定，以对照品溶液质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y1=22 745X1-24 003，r=1.000 0（n=8）；Y2=44 373X2-92 808，r=0.999 9（n=8）；Y3=43423X3-83039，r=0.9999（n=8）；Y4=45790X4-19 847，r=1.000 0（n=8）；Y5=44 007X5-30 212，r=0.999 9（n=8）；Y6=44 927X6+2 881.3，r=1.000 0（n=8）。结果表明，6种溶出介质中地氯雷他定质量浓度在1.02～204.20μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

重复性试验：取地氯雷他定对照品适量，精密称定，分别用上述6种溶出介质溶解并稀释至每1 mL含10 μg的溶液，依法测定，重复进样6次。结果的RSD均小于1.0%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取地氯雷他定对照品适量，精密称定，分别用上述6种溶出介质溶解并稀释至每1 mL含10 μg的溶液，分别于 0，2，4，6，8，10，18，20 h 时依法进行测定。结果的RSD均小于1.0%（n=8），表明供试品溶液在20 h内稳定性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品分别溶解于上述6种溶出介质，加入相当供试品溶液含量80%，100%，120%的对照品溶液（各3份）考察。结果地氯雷他定在上述6种溶出介质的加样回收率分别为98.49%，99.81% ，99.50% ，98.82% ，100.18% ，100.52% ，RSD分别为 0.30%，0.50%，0.90%，1.00%，0.80%，0.30%（n=9），表明回收率较好。

2.3 滤膜过滤影响试验

考察地氯雷他定在6种溶出介质下滤膜对主成分是否吸附，以地氯雷他定对照品分别溶解于上述6种溶出介质，考察滤膜过滤样品溶液 5，10，15，20，30，35 mL等不同体积的影响。结果在上述6种溶出介质下，滤膜过滤不同体积的样品溶液均无影响，地氯雷他定峰面积的RSD均小于1.0% （n=6）。

2.4 溶出仪自动取样系统影响试验

考察在6种溶出介质下溶出仪自动取样系统及管路对地氯雷他定主成分是否有吸附或损失，以地氯雷他定对照品分别溶解于上述6种溶出介质考察，彻底清洗AT 7smart型溶出仪，排空所有管路，然后将各种溶出介质溶解的对照品溶液独自置于AT 7smart型溶出仪溶出杯中，一一考察，中间溶出介质交替时，也需彻底清洗溶出仪整个系统。结果在上述6种溶出介质下，溶出仪自动取样系统及管路均无影响，地氯雷他定峰面积的RSD均小于 1.0% （n=6）。

2.5 体外溶出评价方法

采用美国食品药物管理局（FDA）推荐的f2因子法［9］，根据实际情况判断溶出曲线的相似性。f2相似因子法是非模型依赖性比较法中最具代表性的评价方法，计算简单，结果可靠，广泛运用于评价药物制剂体内释药行为的相似性。根据公式（1）计算f2。其中，n为预测的点数，Ri与Ti分别为在t时间点参比制剂与受试制剂的平均累积溶出百分率。f2表示参比制剂与受试制剂体外释药行为的相似性，因此称为相似因子。一般认为，当f2≥50，即可认为受试制剂与参比制剂的体外释药行为无显著性差异；或者仿制制剂与参比制剂在15 min的平均溶出量不低于85%时，也可认为溶出曲线相似。

2.6 溶出曲线研究

原研片剂溶出试验：初步了解在6种溶出介质下的溶出行为，在溶出介质水和pH 6.8磷酸盐缓冲液条件下溶出量在60 min内均未达到85%以上，增加溶出时间至150 min，满足连续两点溶出量均达到85%以上，且差值在5%以内，以此作为这2种溶出度截止时间点的依据；其余溶出介质基本能在60 min内满足连续两点溶出量均达到85%以上，且差值在5%以内，以此作为这4种溶出介质下溶出度截止时间点的依据。详见图2 A。

pH 1.2盐酸溶液下溶出行为：原研片剂在30 min内溶出量呈合理递增趋势，其他厂家片剂在15 min溶出较快，拐点明显，原研片剂在15 min内未达到85%，采用f2相似因子法对其进行评价，结果厂家3的f2=51.1≥50，说明两者在pH 1.2盐酸溶液中溶出行为相似。详见图2 B。

pH 4.0醋酸盐缓冲液下溶出行为：原研片剂与受试片剂在15 min内溶出量均未达到85%，采用f2相似因子法对其进行评价，结果厂家4的f2=57.6≥50，说明两者在pH 4.0醋酸盐缓冲液中溶出行为相似。详见图2 C。

图2 平均溶出曲线

pH 6.8磷酸盐缓冲液下溶出行为：原研片剂与受试片剂溶出行为差异性更为明显，不同厂家的处方、生产工艺、原辅料控制、质量控制等不同，溶出行为显然会有很大差异，根据FDA研究归纳的BCS分类，地氯雷他定为BCS分类Ⅰ类药物，即高溶解性且高渗透性药物，pH的改变影响溶出行为，因此该溶出介质下溶出行为的差异为不同厂家的药品提供区分。采用f2相似因子法进行评价，显示厂家3和厂家4溶出行为较相似。详见图2 D。

水下溶出行为：溶出行为分歧性较大，区分性明显，呈现3种情况：第1种溶出过程急剧增加，出现明显拐点（如厂家2和厂家5）；第2种溶出过程相当缓慢，溶出量较低（如厂家1）；第3种溶出行为和原研片剂较相似，逐步缓量溶出，符合人体吸收要求。详见图2 E。

0.01 mol／L盐酸溶液下溶出行为：观察溶出曲线，溶出拐点最明显的是厂家2，原研片剂在15 min内未达到85%，采用f2相似因子法对其进行评价，结果厂家3和厂家 4的f2≥50，说明两者在 0.01 mol／L盐酸溶液中溶出行为相似。详见图2 F。

0.1 mol／L盐酸溶液下溶出行为：原研片剂与受试片剂在15 min内均达到85%以上的溶出量，根据《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》中要求，当受试制剂和参比制剂在15 min内的溶出量≥85%时，可以认为两者溶出行为相似，无须进行f2的比较，详见图2 G。

3 讨论

3.1 溶出介质选择

国产地氯雷他定片各规格现行标准中溶出度均采用第三法，各厂家执行标准选定的溶出介质和转速等条件不尽相同，不能很好地评价各厂家产品质量的优劣。本研究中对溶出方法、溶出条件和检测方法进行了系统研究，考察了原研片剂和国内5个厂家的片剂在6种溶出介质下的溶出曲线，对抽验地氯雷他定片的体外溶出了行为做出较为全面的分析和评价［11-14］。

3.2 溶出条件选择

曾考察小杯法、转速50 r／min与 75 r／min、不同溶出介质、溶出介质体积250 mL，桨法、转速50 r／min、不同溶出介质、溶出介质体积500 mL，结果显示，小杯法虽然提高了溶出药物的浓度，但与普通杯的桨法相比，其搅拌时产生的剪切应力及一些物理参数有较大的差异，其搅拌程度要比普通杯桨法更剧烈，考虑小杯法通用性不强；同时，参照美国药典片剂与口崩片、片剂进口标准的规定和地氯雷他定药代动力学研究结果（地氯雷他定口服后30 min可测得其血浆浓度），对国产地氯雷他定片溶出曲线研究方法选为桨法、溶出介质体积 500 mL、转速 50 r／min［11-13］。

3.3 溶出样品检测方法选择

前期研究中用紫外分光光度法和高效液相色谱法进行了大量的试验，结果表明，紫外分光光度法检测干扰因素较多且难以保证原始数据的完整性，而高效液相色谱法检测不仅可保证原始数据的完整性，且更合理、准确、高效，可进行大范围溶出行为的考察［11］。

3.4 f2相似因子法的评估分析

地氯雷他定水溶性差，在水和pH 6.8磷酸盐缓冲液溶出介质下，更能好反映不同厂家与原研片剂的溶出行为，特别是厂家1的产品差异性最明显，在相应取样时间点，其溶出量明显偏低，提示厂家1产品的处方工艺有待进一步研究。由图2和f2相似因子法评估结果可知，厂家3与厂家4产品的体外溶出行为与原研片剂完全一致，其余厂家产品与原研片剂在溶出行为上仍有差异，本研究中采用多条溶出曲线来评价地氯雷他定片的内在质量更合理。

综上所述，体外溶出度试验是评价口服固体制剂内在质量的一种重要方法，尤其是多种pH溶出介质中的溶出行为，不仅可反映仿制制剂内在品质是否一致，还可提高药物生物等效性试验的成功率［12-16］。