猪流行性腹泻综合防治技术的研究

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(1.温州科技职业学院，浙江 温州 325006； 2.仙居县农业局)

猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(PDEV)引起的以严重腹泻、呕吐、脱水为主要临床特征的一种高度接触性肠道传染病[1]。首先于1978 年报道于英国，确定其是由一种冠状病毒引起的疾病。目前该病在世界范围内广泛流行，给养猪业造成巨大损失。断奶猪和成年猪经常发生一过性的腹泻，而哺乳仔猪，尤其7日龄以内的哺乳仔猪发生腹泻并死亡，发病率高达100%，病死率平均为50%，最高病死率接近100%，且多数疫情主要发生在中小规模养猪场[3]。

1 材料与方法

1.1发病仔猪 选取出生7日龄以内且腹泻在12-36 h内的活仔猪，确诊为流行性腹泻感染的仔猪，且实验室检测排除猪瘟、高致病性蓝耳病毒等其他病原体，病死猪不可用。

1.2健康肉猪 180日龄临床健康肉猪2头。

1.3发病仔猪肠组织返饲材料制备 选择符合1.1条件的发病仔猪。集中统一放血致死，不要将污染面扩大，剖开腹腔，取出仔猪的胃、小肠和大肠，放入干净的盆中，盆中放入冰块保持低温，在盆中选取需要的组织，在此过程中不能使用任何消毒剂。先剪碎选取小肠和大肠,一头仔猪的内脏加入250 mL预冷藏的蒸馏奶，不含糖奶。用匀浆机将加过蒸馏奶的剪碎样品制成匀浆，注意时间不要超过0.5 min，以免机器过热导致病毒死亡。将匀浆乳状返饲材料分装，每袋盛装100 mL，用橡皮筋扎口封严，每袋可喂10～50头母猪，立即饲喂或-20℃下冻存。每袋尽量一次用完，不能反复冻融，以免病毒死亡。

1.4发病仔猪肠组织灭活苗制备 选择符合1.1条件的发病仔猪。集中统一放血致死，剖开腹腔，采取整个大小肠段，立即-20 ℃反复冷冻一次。趁病料未完全解冻前，将其剪碎成1 cm3小块，注意肠内容物的保留。按照1∶3比例，加入冷藏的生理盐水，制成匀浆。匀浆液用40目滤筛初滤和60目的滤筛二滤。按最终甲醛溶度为0.3%～0.5%剂量，添加甲醛灭活，严格混匀，分装。37 ℃温箱灭活48 h，期间每2 h摇匀一次组织灭活苗。细菌学检测：将做好的灭活组织苗无菌操作接种到血平板培养基上，37 ℃生物培养箱培养36 h，观察有无菌落长出。仔猪安全性检测：选择健康的断奶仔猪2头，每头分两点注射接种灭活组织苗10 mL，连续观察7 d，查看有无发病，同时设立对照组。

1.5返饲材料与肠组织灭活苗的使用 用制备好的返饲材料饲喂怀孕母猪(孕龄80 d以内)、后备母猪、断奶母猪，每头母猪喂5-10 mL，隔日连喂2-3次；切忌不可喂产房哺乳母猪和孕龄80 d以上的母猪。返饲当天全场按顺序消毒，尤其母猪定位栏，杜绝返饲材料污染哺乳猪舍等其它场所。

返饲结束的母猪在间隔开1周、2周、2周分别肌肉注射一次肠组织灭活苗；后备母猪(千万不能漏打后备母猪和公猪)配种前完成三次免疫：第一次喂返饲材料，第二次和第三次分别肌肉注射发病仔猪肠组织灭活苗，分别间隔2周。

1.6猪流行性腹泻高免血清的制备 对180日龄的2头肉猪进行饲喂制备好的返饲材料，每头10 mL，各间隔1 d，连续饲喂3次；7 d后肌肉注射发病仔猪肠组织灭活苗5 mL，各间隔14 d，连续注射3次。免疫期间，给予自由采食和饮水，并在饮水中添加适量的电解多维，减低应激和提高免疫应答。

在最后一次肌注组织灭活苗后10 d，经颈动脉放血无菌采集肉猪全身血液，玻璃珠等物理方法抗凝血。将收集的抗凝血以3000 r·min-1转速离心无菌分离血清，分装，再置入56 ℃水浴中灭活补体30 min，按10 IU/mL剂量分别添加青链霉素4 ℃作用12 h，-20 ℃冻存备用。

2 结果

2.1返饲效果观察 通过饲喂返饲材料和肌注灭活苗，以此来逐步的扩大母猪的保护面，以致最后消除PED病毒的威胁[4-5]。母猪在返饲后1周左右可产生抗体，成功的人工感染大约有8%-30%的母猪拉稀，有些母猪不拉稀但精神沉郁，1-2餐不吃食。哺乳仔猪吃到母源抗体后获得被动免疫，起到保护作用。

2.2高免血清效果观察 使用制备的PED高免血清对早中期的发病仔猪进行肌肉注射，每公斤体重注射5 mL，连续使用3 d；加以配合口服葡萄糖盐水、庆大霉素和电解多维，能使病死率降低到20%左右。

3 小结与讨论

3.1返饲注意事项 返饲材料取自的发病仔猪实验室检测排除混合感染猪瘟，蓝耳病等疫病，制作过程一定要低温操作，时间不宜过长，从取样到分装持续时间控制在1 h以内，防止操作过程中的外来污染以及消毒剂或其他化学物质对返饲材料的干扰。一般情况下，定位栏母猪饲喂完返饲材料后，及时对定位栏持续消毒10 d。

3.2仔猪初乳管理 新生仔猪尽早吃到初乳，以免被外界野毒感染。最好转出哺乳能力差的母猪或有乳房炎的母猪并做好治疗工作，仔猪最好淘汰或转给刚断奶的母猪寄养。加强初乳管理，尤其是夜间出生的，初乳摄入量要达到40 mL/头，以提高仔猪的被动抵抗力。

3.3隔离发病母仔 把产房的发病母猪及呕吐、腹泻仔猪迅速转出产房，进行隔离饲养，防止病毒传播而导致腹泻所造成的高死亡率。

3.4干燥消毒空栏 对腹泻母猪的产床及相邻产床进行严格的清理干燥消毒，用消毒药粉洒在污染物上作用一定时间后冲洗。再实施消毒和空栏，空栏的时间要足够，可长达3-5 d，消毒以火焰消毒效果更佳。