关于鸡大肠杆菌病的分离鉴定及药敏实验探讨

石哲铭

（新疆石河子大学动物科技学院 832003）

家禽大肠杆菌是非常常见的病原菌，此病经常发生在养殖场中，较为严重。为了控制此病毒，兽医在临床上开始研发控制此病毒的药物，各种控制药物接踵而来，导致大肠杆菌耐药菌株出现，耐药性的变大加剧了抗菌药物在畜禽体内的残留，给养禽业长期发展带来危害。

1 大肠杆菌病概述

大肠杆菌病是由埃希氏菌导致的禽类肠道传染病。此病为革兰氏阴性，拥有一些周鞭毛与菌毛。造成胚胎死亡、脐炎、气囊病等病症，还会和其余细菌病毒同时发病。发病时鸡的精神恍惚、不思饮食，更为严重的是出现呼吸受阻、排血便等情况[1]。从一些相关资料可以看出，全国由于感染毒素性大肠杆菌病死亡的人数高达80 万（针对5 岁以下儿童）。最为严重的很多地区大肠杆菌在腹泻病人的病原谱中占据首位，在国外便发生过类似事情，大肠杆菌曾经引发过食品污染事故，致病性非常严重，经常会造成患者腹泻、脱水更为严重的是死亡[2]。在兽医学上，大肠杆菌一年四季都会发病，死亡率非常大，需格外注意。此外，在有关大肠杆菌病防治中提出，此病在全部家禽中发病率非常高，且病程时间长，容易与其他呼吸道疾病产生混合感染，这也变为大肠杆菌最为主要的特点。感染大肠杆菌病不仅会导致家禽生产能力降低，还会在一定程度上影响产品质量。在20世纪80年代，我国养殖业集中化得到提升，畜禽大肠杆菌病在各地盛行，丝毫不会受到其他传染因子的影响，大肠杆菌感染仍处于首要位置，较为影响我国畜牧养殖业发展。

2 大肠杆菌分离、鉴定以及药敏实验

大肠杆菌在一些哺乳动物中，属于正常菌群，在饲料、饮水、孵化场等地较为常见，此病传染主要是大肠杆菌饲料、饮水、呼吸道、消化道等路径实施传播的。然而，由于大肠杆菌发病没有显著的季节性，四季都有可能发生。在冬季与气候多变的地方，各种家禽都有可能发生[3]。尤其是孵化过程、种蛋内等死胚分离频率较高。当存在其他病原体感染，发生大肠杆菌感染率会更为严重。基于此，相关专业人士针对鸡大肠杆菌进行分离、鉴定并实施了药敏实验，取得显著结果。

2.1 材料

选择40 份大肠杆菌感染的病例，运用较为突出的病变心血与肝脏组织对细菌实施分离与鉴定。选择培养基与药敏纸片。牛肉膏、微量元素发酵管，药敏纸片涵盖头孢啉、头孢他啶、万古霉素、左氟沙星等，购买于某某试剂有限公司。选用健康的小白鼠为实验动物，总共50 只，体重大约为22g。

所选用的设备及仪器主要有各类显微镜（其中具体指光学显微镜）、恒温箱、为保证实验的无污染性更需要应用高压灭菌器、无菌实验台等物品。除此之外，还应用大量培养基与试剂来提高本次实验的准确性，具体有麦康凯琼脂 (NA)、伊红美兰琼脂、普通肉汤等，而所应用到的所有培养基全是根据《兽医微生物实验指导》配置而成。其中，利用硝酸盐作为还原剂，氧化酶试剂及其他实验相关的微量生化试管、药敏纸片。

2.2 病料的采集方式与方法

在本次实验中，主要选取了6 个出现病死鸡的鸡场为主要采集场所，从6 个鸡场分别选取一只病死鸡为研究对象，利用无菌环境取出6 只病死鸡的心脏与肝脏，向其分别采取1ml 的血，在此基础上进行细菌分离培养。之后，利用经杀菌后的手术刀片完成脏被膜操作，然后接种环刺入肝实质取肝样，开展分离培养的实验。

2.3 分离培养操作

本次实验中，每一环节均采用无菌操作手段，将选择到的病料分别放置在普通琼脂平板、麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂上面，然后利用恒温方式培养24h，并对实验皿内变化进行观察。之后在所观察到的细菌中挑选最为适宜的菌落，用划线的方式放置于肉汤内，再进行恒温培养24h。

2.4 镜检

本环节中，主要是操作人员利用麦康凯琼脂平板进行新的菌落培养，同样选择恒温培养方式，但培养时间需保持在20h内。然后将涂片上的火焰保持稳定，在其上方滴入结晶紫染液，1min 后再进行水洗操作；然后滴加革兰氏碘液，保持1min 左右的反应后进行水洗操作；滴加95%乙醇脱色，在15～30 后进行水洗，这一步骤要求将染色液全部清洗干净，避免脱色；之后用番红染液对清洗干净的细菌进行复染色，保持1min后水洗，全部干燥后才可以进行镜检操作。本次实验结果显示，革兰氏阳性菌呈现出紫色，革兰氏阴性菌呈红色。在此基础上还对菌体的形态及染色特征进行实时观察与记录。

2.5 致病性实验

在致病性试验中，将分离的菌体分别接种于营养肉汤中，保持恒温状态下的培养，这一步骤所利用的设备为恒温培养箱，培养时间为24h；然后选取6 只健康的小白鼠为研究对象，对其进行任意分组，每组3 只；其中，A 组中每只小白鼠腹腔接种的为0.2ml 的肉汤菌液，B 组中每只小白鼠腹腔接种的同样为0.2ml 的灭菌生理盐水，然后分别观察两组小白鼠的情况。在此基础上，另外选取6 只健康的7日龄雏鸡，将其按照随机数理法的方法平均分为两组，即C 组和D 组。其中，C 组每只雏鸡腹腔接种0.2ml 的肉汤菌液；而D 组雏鸡腹腔接种0.2ml的灭菌生理盐水，然后分别对其情况进行观察与记录。

2.6 药敏实验

首要做的便是进行细菌分离培养与镜检。选取病死鸡，取其肝，将其做成营养肉汤，恒温条件下培养1d。之后选择细菌进行接种，37℃下查看细菌变化情况，并进行涂片，这样方便在革兰氏染色镜下进行检验，之后选用单个较为突出的菌落接种鲜血琼脂斜面，将其保存于4℃冰箱中待用。最后，为了更好地分析可将带有病菌的物品放进营养汤中，并将其放在37℃的环境下震荡，培养18h，查看结果。时间到达后，每株病菌接种4 个小白鼠，并在小白鼠腿部注射带有病菌的营养汤，另外一组注射灭菌肉汤，每只0.2ml。进而查看小白鼠的发病率及死亡情况，对那些发病死亡的小白鼠实施尸体解剖，进而查看有什么病变，并对其实施分离培养。在分离菌肉汤培养中实施葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵实验，在微量发酵管中分别接种细菌，在37℃环境下培养。经过1d 后观察结果，其他生化实验在2～3d 内查看结果。

2.7 实验结果

从结果上可以看出，全部的分离细菌在普通肉汤中生长得非常好，慢慢摇动液体，会发现液体呈现云雾状。本病的传播主要通过空气蔓延。所以，在养鸡场需及时进行净化与熏蒸消毒空气，如果污染较为严重，不应实施种蛋，如果在轻度污染上有了粪便，可以采用刀片刮净。刚出生的小鸡对温度要求非常高，因此，培育小鸡期间，需定期带鸡消毒，或者在供暖炉上适当的蒸发点食醋，确保空气湿润，同时也能保证地面干燥，取得的效果非常好。根据实验结果，在较为普通的琼脂上颜色呈灰白色，且表面凸起、边缘是较为整齐的细菌脱落。从染色体可以看出，分离菌是两端呈现钝圆且中等大小，排列较为单一。同时从分离出来的细菌中发现，其可以发酵葡萄糖、乳糖、麦芽，产酸产气。融合以上的培养特点和镜检结果属于大肠杆菌。

2.8 药物敏感实验结果

通过药敏实验可以看出，有15 株鸡源致病性大肠杆菌，对头孢曲松较为敏感，对丁胺那霉素、先锋、氨曲南等药物拥有非常高的敏感性，都在一半以上。然而，对于一些庆大霉素、头孢呋辛、利福平等药物存在不同程度上的耐药性，对于环丙沙星、克拉霉素等有完全的耐药性。此病最主要的传播介质是饲料、饮水、空气，因此，要加强鸡舍日常清洗，做好消毒操作。同时，要定期清理水槽，更换鸡舍内饮用水，保持鸡舍内温度、湿度均在合理范围内，减少病菌产生与蔓延的概率。

3 探讨

3.1 大肠杆菌产生耐药性的因素

在动物体内大肠杆菌是常见的细菌，会导致机体抵抗能力减小，引发大肠杆菌。抗生素与化学药物在控制大肠杆菌中占据较为重要的作用。在生产过程中，不合理的运用药物导致大肠杆菌耐药性逐渐加重。其中临床上不合理用药涵盖如下几个方面。（1）没有在正确的诊断基础上用药。（2）再给鸡进行用药时，未根据规定进行药敏实验，便进行抗菌药物。（3）对于一些药物剂量、疗程及用药时机不了解。（4）用药时选用二线药物太早。（5）没有轮流使用药物，而是长时间选用一种药物。此外，本次疾病传播途径属于继发与混合感染。所以，种鸡场需及时进行清理与熏蒸消毒，如果污染较为严重，则不应实施种蛋，如果在轻度污染上有了粪便，可以采用刀片刮净。刚出生的小鸡对于温度要求非常高，因此，培育小鸡期间需定期带鸡进行消毒，或者在供暖炉上适当蒸发点食醋，这样便能确保空气湿润，同时也能保证地面干燥，取得的效果非常好。

3.2 适量添加维生素与微生态制剂，加强机体抵抗力

进行喂养过程中可适量增添VA、VE，家禽可获得良好的辅助治疗。另外，不定时的喂乳酸菌片，可保持鸡肠道中菌体不失去平衡，可在一定程度上减小病性大肠杆菌。

3.3 接种免疫疫苗

鸡接受免疫疫苗可预防鸡大肠杆菌的发病率，可依照疫苗种类定期对小鸡注射免疫接种，所以，需定期对小鸡注射一些免疫接种，这样小鸡便能对其有免疫功能，由于大肠杆菌血清型较多，血清抗原体的不一致，其抵抗能力也不同，因此，建议定期为小鸡打疫苗。

4 结束语

通过以上分析表明，引起鸡大肠杆菌感染的因素有许多，平时应注意正确给鸡用药，尤其是抗病毒药物。另外，养殖时需提升抗菌药物的质量监督，合理选择药物，尽可能杜绝耐药菌株的发生。