牛奶中四环素类兽药残留的快速检测关键技术应用研究

从上世纪70年代起，养殖户就开始对动物使用促进生长和催情的兽药，并且随着市场需求的不断增长，兽药的使用数量也持续不断地攀升，这就在无意识的情况下加剧了各产品上的药物残留危害。VA、VB的含量在牛乳中占有的比例比较大，在一定程度上这二者可以促进人的骨骼生长，乳制品被广泛应用到人们的日常生活中。而像四环素等兽药会伤害人体健康。所以为了保障人类的健康安全，需要对人们日常生活需要的食品进行更为全面的监管，通过快速检测方法，以实现其食品的安全使用。

国内外乳制品快速检测方法

目前国内外就乳制品的抗生素快速检测方法最常用的是色谱法、免疫法以及微生物法。[1]

色谱法。色谱法是牛奶中抗生素检测方面应用最广泛的一种方法，主要是用各组在两相中的不同分配系数，让各组的混合物进行分离的。

现在色谱根据流动相与色谱柱的不同，又可分为以下三种：（1）气相色谱法：可以分离复杂的多组混合物，主要优点在于分析速度快、灵敏度高、应用范围广泛。主要应用在农药残留、兽药残留和成分的分析等方面。（2）高效液相色谱：气相色谱法虽然应用广泛，但是不适宜于挥发性差和发热不稳定的化合物，而高效液相色谱法，就是能高效自动的色对谱进行分离。（3）色谱-质谱联用：这是当前最重要的分离分析方法之一，联合作用各取所长，能对复杂基质的多残留进行快速筛选，灵敏度高、适用范围宽广。

微生物学检测法：一般可分为三种：（1）微生物抑制法：主要原理是通过使用抗生素从而发挥对微生物的生长抑制作用，进而可以计算出样品中的抗生素残留量。（2）微生物受体法：主要包括CHARMI和CHARMII，它可以应用在不同基质中的抗生素检测。（3）酶比色法：主要检测对象是牛奶中的β-内酰胺类抗生素。

免疫分析法：就是以抗原-抗体为基础，将抗体作为生物化学检测器对化合物、酶等进行定性或者定量分析的技术。比较常见的免疫分析主要包括放射免疫、荧光免疫分析以及酶联免疫吸附试验等等。放射免疫主要是把放射性物质作为标记物，它的突出优点在于灵敏度高，但是其突出劣势就在于对环境的损害，从而影响了其应用范围。[2][3]

本文中牛奶的四环素类兽药残留的快速检测关键性技术

本文根据牛奶中四环素农药残留的关键技术进行分析，采用灵敏度最高、精密度最高和比较快速及应用最为广泛的液相色谱-质谱法进行快速研究，通过对牛乳中的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素4种抗生素进行检测，为牛乳中四环素类抗生素的兽药残留分析提供参考。

试验材料及试验方式

试验仪器：H66MC超声波发生器：上海医疗企业集团；旋转仪蒸发仪：日本EYELA公司；固相萃取柱：赛默飞世尔科技有限公司。

试验试剂：试验试剂主要是纯度均超过95%的甲醇、四环素、土霉素、金霉素、强力霉素标准品等。

标准储备液和标准工作溶液的制备：标准储备溶液：准确称取四环素、土霉素、金霉素和强力霉素各10mg，纯度要求100%。称取完成后，使用一定量的甲醇与之融合，定容至100ml。然后将储备液放到-18℃以下的棕色瓶内进行存储，存储的时间能超过一年。

试样的制备：从样品中取出500g并进行充分的搅拌，然后将其放入容器之中并进行密封，做好标记后放入-18℃的环境内进行封存。再称取5g混合试样用HLB固相萃取柱对其相应的处理，等混合试样全部从柱内流出后，分别进行5ml水和5ml甲醛水的顺序进行淋洗。将压强持续控制在2.0kPa内，再进行减压，然后再使用容量为10ml的甲醇乙酸乙酯洗脱。[4]

液质条件：（1）色谱柱：选取Inertsil C8-3，5μm，150mm×2.1mm(内径)。（2）流动相：甲醇乙酸乙酯洗脱。（3）流速：300μL/min。（4）柱温：30℃。（5）进样量：30μL。（6）质谱条件：质谱扫描模式为多反应监测(MRM)，单位分辨率，雾化气(NEB)为6.00L/min(氮气)，气帘气(CUR)为10.00L/min(氮气)，喷雾电压(IS)为4500V，去溶剂温度(TEM)为500℃，去溶剂气流为7.00L/min(氮气)，碰撞气(CAD)为 6.00 mL/min(氮气)。

结果分析

定性测定：样品中混合的化合物色谱峰值残留的时间与标准溶液相比较而言波动的范围在2.5%左右。

定量测定：通过分析实验中样品液体中被测定的四环素含量的整体情况，选取定峰高相接近的标准工作溶液（标准工作溶液中的标准重构离子能在5.07min时达到100。）

结束语

乳制品中四环素类药品残留的快速检测方法有很多种，本文选取了最为普遍的液相色谱—质谱法进行快速检测，用试验检测的方法分析四环素类抗生素中的兽药残留，实现其定性检测的高效性和定量检测的准确性。今后还要实现对转基因食品、畜牧类等与人类健康息息相关的食品和产品进行快速检测，在推动检测技术深入开展的同时保障食品的安全问题。