家畜布鲁氏菌病血清学调查

李尤龙 杨艳明 李登峰

（1，云南省曲靖市罗平县大水井乡农业综合服务中心 655800；2，云南省曲靖市罗平县畜禽改良工作站 655800；3，云南省曲靖市罗平县动物疫病预防控制中心 655800）

布鲁氏菌病（简称布病）是由布鲁氏菌属细菌感染导致人畜共患的常见传染病，在全世界范围内严重威胁人类健康，影响畜牧业发展。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告的传染病，我国规定布病为多种动物共患的二类动物疫病。因此，开展家畜布病的血清学调查具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 样本来源、采样要求和采样比例

对去年监测出阳性畜的场（户）100%采样监测，对引入饲养期限不足半年的牲畜实行100%采样监测，对养牛20头以上、羊20只以上、猪50头以上的规模场户按5%比例采集血清（种公畜、母畜、育肥畜比例为1∶3∶1），对监测有阳性畜的养殖场（户、企业）实行100%采样复检。羊共调查13个乡（镇、街道）105个行政村280个自然村，10个规模场、570户散养户，调查羊35634只，共采集羊血清2188份；猪共调查13个乡（镇、街道）48个行政村73个自然村，31个规模场，66户散养户，调查猪21318头，共采集猪血清751份，牛共调查13个乡（镇、街道）16个行政村20个自然村，3个规模场、17户散养户，调查牛11856头，共采集牛血清150份。

1.2 检测试剂及仪器

布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原（批号：20180701），布病阳性标准血清、布病阴性标准血清，由中国兽医药品监察所生产；布氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒（批号：20180316），由青岛立见诊断技术中心生产，于2～8℃冷藏保存备用。洁净的一次性反应板，其上已有划好的4cm2圆圈，单道微量移液器、多道微量移液器、吸头，纯水仪、酶标仪、二级生物安全柜，恒温培养箱等。

2 检测方法与结果判定

2.1 虎红平板凝集试验和结果判定

试验前将待检血清、阴性血清、阳性血清和抗原恢复至室温（20～25℃）。在一次性反应板上标记好被检血清号，在其上滴加虎红平板凝集试验抗原30ul，然后在抗原旁滴加被检血清30ul，用吸头搅动血清和抗原，使之充分混合，每加一个被检血清都要换吸头，在4min内观察结果，设阴性血清、阳性血清对照。在阴、阳性血清对照成立的条件下方可对被检血清进行判定。受检血清在4min内肉眼可见不同成度颗粒状或絮状凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(-)。出现阳性的再用竞争酶联免疫吸附（cELISA）试验进一步检测确诊。

2.2 竞争酶联免疫吸附试验和结果判定

根据试剂盒说明书进行试验操作和结果判定。试验准备，试剂盒各组分在使用前均恢复至室温（20～25℃），加液前充分摇匀，将洗涤液20倍稀释。操作步骤，BRUC抗原包被板每孔加入稀释好的洗涤液40ul，A1、B1孔加入10ul BRU阴性血清，C1、D1孔加入10ul BRU阳性血清，剩余孔各加入10ul样品血清，每孔加入50ul竞争抗体，轻轻振匀，37℃孵育60min。甩干BRUC抗原包被板中的液体，每孔加入300ul洗涤液，洗涤3次，每孔加入100ul酶标抗体，轻轻振匀，37℃孵育30min，甩干BRUC抗原包被板中的液体，每孔加入300ul洗涤液，洗涤3次，每孔加入50ul底物溶液A，再加入50ul底物溶液B，37℃孵育15min，每孔加入50ul终止液终止显色反应，使用酶标仪测定450nm波长处的OD值。结果判定，BRU阴性血清的平均OD值应大于0.5，BRU阳性血清的OD值应大于60%，试验结果有效，否则重新试验；样品抑制率≥50%判为阳性，样品抑制率＜50%判为阴性[1]。

3 结果

通过虎红平板凝集试验共集中检测样品3089份，其中猪血清751份、牛血清150份、羊血清2188份，2份羊血清为阳性，其余样品为阴性；2份羊血清阳性样品和180份牛羊血清阴性样品通过竞争酶联免疫吸附试验进行检测，结果全为阴性。通过筛选和确诊试验3089份血清样品全部判定为阴性。

4 小结

（1）加强家畜布病的血清学学调查。每年进行两次集中采样和布病血清学监测，应用虎红平板凝集试验(RBT)进行初筛，然后进行竞争酶联免疫吸附试验确诊。

（2）一些养殖户对家畜布病防控工作的重要性认知不足。监测出阳性畜的场（户）进行复检，采集血清时，因不满足扑杀补助标准阻止采样，难做工作，需要加强宣传力度。

（3）流行病学调查面广，工作量大，需加大人力、物力、财力的投入。

（4）兽医实验室正常运行需要大量经费支持，实验室工作经费紧缺，仪器设备、试剂耗材满足不了监测工作的需求。监测动物的种类、范围、数量等会受到限制，需加大实验室经费投入[2]。