miR-432在神经胶质瘤患者中的表达和其临床意义

刘文术，王 贺，牛佳义，林 杨，江 威

（1．黑龙江省齐齐哈尔市第一医院急诊内科，黑龙江 齐齐哈尔 161000；2．黑龙江省齐齐哈尔市第一医院脑外科，黑龙江 齐齐哈尔 161000；3．黑龙江省齐齐哈尔市第一医院内分泌科，黑龙江 齐齐哈尔 161000）

神经胶质瘤（简称为胶质瘤）是一种发生在神经外胚层的恶性肿瘤，是神经系统肿瘤中发病率较高的恶性肿瘤之一（30%）。胶质瘤具有生长速度较快、治愈率低、术后复发率较高、存活率低、预后较差等特点，患者通常出现颅内压增高、癫痫、呕吐等临床症状，严重影响患者的生活质量和生命安全[1]。因此，胶质瘤已成为临床和基础研究的重点问题。

本研究主要探究miR-432在神经胶质瘤患者中的表达及其临床意义，为今后神经胶质瘤的治疗提供实验基础和理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月～2018年1月我院收治的胶质瘤患者的脑组织15例，并收集同期在我院接受治疗的创伤性脑损伤患者脑组织15例作为正常对照组。胶质瘤患者年龄10～75岁，平均（42.5±26.75）岁，其中男8例，女7例，根据《WHO中枢神经系统肿瘤分类》分期标准：Ⅰ期1例，Ⅱ期3例，Ⅲ期3例，Ⅳ期8例。胶质瘤患者年龄10～75岁，平均（41.75±27.05）岁，其中男8例，女7例。两组患者在年龄、性别比较无统计学意义。

1.2 细胞培养和转染

胶质瘤细胞系U87细胞购于南京科佰生物科技有限公司（中国）。U87细胞采用含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素混合物的DMEM培养液（Hyclone公司，美国），并置于37℃、5% CO2培养箱（Thermo公司，美国）中培养。

1.3 RNA提取和实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）

根据Trizol Reagent试剂（Invitrogen，美国）说明书提取组织、血清和细胞中总RNA，并使用NanoDrop2000检测RNA浓度和纯度。按照逆转录试剂盒（ABI，美国）说明书进行逆转录反应，将RNA逆转录为cDNA。

1.4 CCK-8实验

采用CCK-8实验检测细胞活力。首先，将细胞以1×104个细胞/孔密度接种于96孔板中，细胞转染24小时后，在每孔中加入10 μL CCK-8溶液（北京百奥莱博，中国），孵育4小时。采用酶标仪检测450 nm处的吸光度。每组设置6个复孔取平均值，另设单孔只加入培养基作为空白对照。

1.5 细胞划痕实验

采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力。首先，将细胞接种于六孔板中，细胞转染24小时后，利用一次性进口吸头在每孔中竖直划一条直线，用PBS（索莱宝，中国）清洗细胞，以去掉漂浮的细胞，然后更换新鲜培养液继续培养。分别于0小时、24小时后观镜下观察并拍照，对比不同时间细胞划痕宽度。

1.6 统计学方法

所有数据均表示为均数±标准差，用graphpad软件对所有数据进行统计学处理。t值用以检验计量资料，x2用以检验计数资料，组间差异经P值进行判定，当*P＜0.05，**P＜0.0和***P＜0.001时，差异具有统计学意义。

2 结 果

质瘤患者和非胶质瘤患者血清中miR-432的表达，结果显示，与非胶质瘤患者相比，胶质瘤患者血清中miR-432的表达显著降低，差异有统计学意义（P=0.0228＜0.05）。

2.2 细胞转染后miR-432的表达量变化

CCK-8实验结果显示，与mimic-NC组相比，miR-432 mimic显著降低胶质瘤细胞系U87细胞的活力，而与inhibitor-NC组相比，miR-432 inhibitor显著升高U87细胞活力。

3 讨 论

本研究应用qRT-PCR技术检测miR-432在15例胶质瘤患者的癌症组织和15例非胶质瘤患者的脑组织中的表达情况。结果显示，miR-432在胶质瘤组织中的表达显著降低。qRT-PCR实验结果提示，miR-432在胶质瘤患者血清中miR-432的表达水平显著低于非胶质瘤患者。