复方丹参片对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响

郭玉东 左泽平 高 阳 胡宇驰 曹春然 王志斌 李 丽

（北京市药品检验所，北京 100035）

复方丹参片是含丹参的一种制剂，主要含有丹参、三七和冰片，具有活血化瘀，理气止痛的功效，用于治疗气滞血瘀所致的胸闷（症见胸闷，心前区刺痛）、冠心病和心绞痛。复方丹参片临床使用量很大，然而不同厂家生产的质量参差不齐，药典质量控制方法不能完全反应其活性，因此对复方丹参片进行药效再评价，并筛选合适的活性指标用于其质量控制。本实验采用皮下肾上腺素加冰浴法制备大鼠血瘀模型，观察复方丹参片对血瘀模型大鼠血液流变学的影响，旨在探讨复方丹参片活血化瘀可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

品系：SD大鼠；级别：SPF级；许可证号：SCXK（京）2006-0009；由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

1.2 实验试剂

0.9%氯化钠注射液，批号：12080542（国药集团容生制药有限公司）；水合氯醛，批号：20110509（国药集团化学试剂有限公司）；凝血酶原时间（PT）测定试剂盒，批号：NO620322（Instrumentation Laboratory）；活化部分凝血酶原时间（APTT）测定试剂盒，批号：NO716816（Instrumentation Laboratory）；二磷酸腺苷ADP，浓度：5μmol/L（北京世帝科学仪器公司）；盐酸肾上腺素注射液（Adrenalin hydrochloride，缩写为 Adr），批号：1209251（天津金耀氨基酸有限公司）；枸橼酸纳，批号：20110604（北京化学试剂公司）

1.3 实验药品

复方丹参片（0.32 g/片，60片/盒，用法用量：一日三次，一次三片，北京同仁堂），批号：12120393；阿斯匹林泡腾片 （0.5 g/片），批号：1211032。

1.4 实验仪器

TE2101-L电子天平（北京塞多利斯仪器系统有限公司），LG-R-80B血液黏度仪（北京世帝科学仪器公司），MEK-6318血液分析仪（北京健长医疗器械有限公司），LG-PABER血小板聚集凝血因子分析仪（北京世帝科学仪器公司），LG-B-190红细胞变形聚集测试仪（北京世帝科学仪器公司），ACL ELITE PRO全自动血凝仪（Instrumentation Laboratory）。

1.5 方法

1.5.1 动物分组及急性血瘀模型的制备：SD大鼠60只，雌雄各半，体质量190～220 g，随机分为6组，分别为模型组、正常对照组（不皮下注射盐酸肾上腺素给予等体积的生理盐水）、阳性药组（阿斯匹林泡腾片）、复方丹参片高、中、低剂量组。阿斯匹林泡腾片组给药剂量2.5 mg/kg，复方丹参片高、中、低剂量组分别为0.68、0.34、0.17 g/kg，模型组和空白组给予生理盐水，给药体积均为1.0 mL/100 g，连续给药6 d后，除正常组外，各组动物皮下注射盐酸肾上腺素注射液0.9 mg·kg-1，共2次，间隔4 h，在第一次皮下注射Adr 2 h后将大鼠置于冰水中3 min，第二次皮下给Adr后造成血瘀证模型[1-2]，造模1 h后给药1次，然后禁食12 h[3]。于取血前1 h再给药1次，腹腔注射4%水合氯醛麻醉大鼠，供取血用。

1.5.2 复方丹参片对血瘀模型大鼠血小板数、血小板聚集率及红细胞压积的测定：从上述血瘀模型大鼠腹主动脉取血5 m L，加3.2% 枸橼酸钠抗凝（血液与抗凝剂体积比9∶1），以1 000 r/min离心10 m in，制备富血小板血浆（PRP），剩余血液经2 500 r/min离心 15 min，制备贫血小板血浆（PPP）[4]。用全血分析仪测定RPR中血小板数及红细胞压积。测定血小板聚集时取PPP 200μL调零，然后分别取PRP 190μL，加入诱导剂 ADP（终浓度5μmol/L）10μL，测定血小板5 min最大聚集率，血小板聚集测定均在4 h内完成。

1.5.3 复方丹参片对血瘀模型大鼠凝血时间和纤维蛋白原含量的测定：取贫血小板血浆（PPP），采用全自动血凝仪测定凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、活化部分凝血酶原时间（APTT）[5]和纤维蛋白原含量，操作严格按照试剂盒说明进行。

1.5.4 复方丹参片对血瘀模型大鼠血液黏度及血浆的测定：从上述血瘀模型大鼠腹主动脉取的血中取1 m L，注入含有3.2% 枸橼酸钠抗凝（抗凝剂与血液比例为1∶9）的试管中，充分混匀，取血0.8 mL测量全血黏度，取上述贫血小板血浆（PPP）0.8 m L测量血浆黏度[6]。

1.5.5 复方丹参片对血瘀模型大鼠红细胞变形、聚集的测定：从上述血瘀模型大鼠腹主动脉取的血中取2 m L，注入含有3.2% 枸橼酸钠抗凝（抗凝剂与血液比例为1∶9）的试管中，充分混匀，分别取血0.8 m L，用红细胞变形聚集测试仪测定红细胞的变形和聚集。

1.6 统计方法

以上测定结果采用SPSS11.5统计软件进行组间的方差分析，考察模型组和空白组之间以及各给药组和模型组之间的统计学差异。

2 结果

2.1 复方丹参片对血瘀模型大鼠红细胞压积、血小板数及最大聚集率的影响

结果见表1，复方丹参片能够降低模型大鼠红细胞压积，中、小剂量组与模组相比有显著性差异（P＜0.01），大剂量组降低幅度较小。同时复方丹参片能降低模型大鼠血浆中血小板数，降低血小板最大聚集率，抑制血小板聚集作用，与模型组相比大、中剂量均有显著性差异（P＜0.01）。由以上结果还可以看出，血小板数的多少与血小板最大聚集率具有一定的相关性。

表1 复方丹参片对血瘀模型大鼠红细胞压积、血小板数及最大聚集率的影响（±s±s，n=10）Tab le 1 The effects of com pound danshon tab lets on erythrocyte deposition，p latelet coun t and m axim um aggregation rate of b lood stasism odel rats（±s±s，n=10）

表1 复方丹参片对血瘀模型大鼠红细胞压积、血小板数及最大聚集率的影响（±s±s，n=10）Tab le 1 The effects of com pound danshon tab lets on erythrocyte deposition，p latelet coun t and m axim um aggregation rate of b lood stasism odel rats（±s±s，n=10）

注：**P＜0.01 vs模型组；▲▲P＜0.01 vs空白组Note：**P＜0.01 vsmodel group；▲▲P＜0.01 vs blank group

空白780.7±80.9 34.0±2.4 38.0±14.2模型 / 900.3±87.8 55.4±8.2▲▲ 59.3±7.9▲▲阿斯匹林 0.0025 673.7±151.5** 43.9±7.6** 36.5±8.6**大剂量 0.68 696.5±112.4** 49.1±6.5 38.2±9.3**中剂量 0.34 781.4±144.3 45.4±7.3** 44.0±8.8**小剂量 0.17 832.7±113.2 43.6±7.5**/48.8±11.7

2.2 复方丹参片对血瘀模型大鼠 TT、PT、APTT和FIB的影响

结果见表2，复方丹参片能够降低模型大鼠血浆中纤维蛋白原含量，与模型组相比大、中剂量有显著性差异（P＜0.01），小剂量无显著性差异（P＞0.05）。同时具有一定延长模型大鼠凝血酶原（PT）和活化部分凝血酶原（APTT）凝集时间作用，其中大剂量组延长APTT凝集时间的作用较为明显，与模型组相比差异显著（P＜0.01），中和小剂量无显著性差异（P＞0.05）。复方丹参片延长凝血酶（TT）和凝血酶原（PT）凝集时间作用较小，各剂量组与模型组相比无显著性差异（P＞0.05）。

表2 复方丹参片对血瘀模型大鼠凝血时间的影响（±s±s，n=10）Tab le 2 The effects of com pound danshon tab lets on coagu lation tim e of b lood stasism odel rats（ ±s ±s，n=10）

表2 复方丹参片对血瘀模型大鼠凝血时间的影响（±s±s，n=10）Tab le 2 The effects of com pound danshon tab lets on coagu lation tim e of b lood stasism odel rats（ ±s ±s，n=10）

注：**P＜0.01 vs模型组；▲▲P＜0.01 vs空白组Note：**P＜0.01 vsmodel group；▲▲P＜0.01 vs blank group

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2.3 复方丹参片对血瘀模型大鼠血液黏度的影响

结果见表3，复方丹参片能降低血瘀模型大鼠全血黏度及血浆黏度，模型组与空白组相比有显著性差异（P＜0.01），且明显高于空白组，提示模型成立。复方丹参片的大剂量的高切和中切与模型组相比均有显著性差异（P＜0.01），低切与模型组相比大剂量差异显著（P＜0.05），中、小剂量对全血黏度 的影响不大。血浆黏度与模型组相比大剂量有显著 性差异（P＜0.01），中剂量差异显著（P＜0.05），小 剂量无显著性差异。其中大剂量降低全血黏度及血 浆黏度的作用效果较为明显，并具有较为明确的剂 量关系。

表3 复方丹参片对血瘀模型大鼠血液黏度的影响（±s±s，n=10）Tab le 3 The effects of com pound danshon tab lets on the b lood viscosity of b lood stasism odel rats（±s±s，n=10）

表3 复方丹参片对血瘀模型大鼠血液黏度的影响（±s±s，n=10）Tab le 3 The effects of com pound danshon tab lets on the b lood viscosity of b lood stasism odel rats（±s±s，n=10）

注：*P＜0.05，**P＜0.01 vs模型组；▲▲P＜0.01 vs空白组Note：*P＜0.05， **P＜0.01 vsmodel group；▲▲P＜0.01 vs blank group

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2.4 复方丹参片对血瘀模型大鼠红细胞变形聚集的影响

结果见表4，复方丹参片能够降低血瘀模型大鼠红细胞聚集能力，减小聚集指数和曲线下的聚集面积，中小剂量与模型组相比具有显著性差异（P＜0.05），大剂量差异不明显。复方丹参片在一定程 度上也能增加模型大鼠红细胞变形能力，但与模型 相比无显著性差异。

表4 复方丹参片对血瘀模型大鼠红细胞变形聚集的影响（±s±s，n=10）Tab le 4 The effects of com pound danshon tab lets on the deform ation and accum u lation of erythrocytes of blood stasism odel rats（±s ±s，n=10）

表4 复方丹参片对血瘀模型大鼠红细胞变形聚集的影响（±s±s，n=10）Tab le 4 The effects of com pound danshon tab lets on the deform ation and accum u lation of erythrocytes of blood stasism odel rats（±s ±s，n=10）

注：*P＜0.05vs模型组；▲▲P＜0.01 vs空白组Note：*P＜0.05vsmodel group；▲▲P＜0.01 vs blank group

0.09±0.04 16.1±8.3 0.74±0.04 363.5±28.0模型 / 0.64±0.25▲▲ 122.5±47.6▲▲ 0.69±0.05 337.7±31.4阿司匹林 0.0025 0.36±0.18* 69.8±35.9* 0.72±0.04 355.1±28.3大剂量 0.68 0.53±0.25 103.2±50.8 0.71±0.04 346.5±25.0中剂量 0.34 0.38±0.26* 73.4±53.9* 0.72±0.04 356.5±27.1小剂量 0.17 0.39±0.14* 75.3±29.9*空白/0.72±0.04 351.2±24.0

3 讨论

血液流变学是研究循环血液的流动性、变形性、凝固性、黏弹性以及心血管黏滞性的科学。现代药理研究表明，当人体患某种疾病，尤其是心血管系统疾病时，血液的流变性发生异常，从而引起全身或局部循环和微循环障碍[7]。目前临床上血液的浓、黏、凝、聚是造成心脑血管疾病的重要原因[8]，本实验采用的急性大鼠血瘀模型模拟人类血液流变异常改变临床表现，考察复方丹参片活血化瘀可能的作用机理。

全血黏度主要取决于红细胞数量的多少和性能，血浆的黏度主要取决于血浆蛋白的含量[9]。全血黏度的增高会引起红细胞变形性降低和聚集性增高，使黏度进一步增高，使血流进一步变慢，这样有利于血小板的黏附和聚集[10]；血浆黏度的增高会使血液的凝固性增加；最终导致心血管疾病[11]。本实验结果表明，复方丹参片能够降低血瘀模型大鼠全血及血浆的黏度，进一步降低红细胞聚集，同时能够抑制ADP诱导的血小板聚集作用，这可能是复方丹参片活血化瘀的主要作用机理。

本文研究发现复方丹参片能够降低实验性急性血瘀模型大鼠的全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原含量、红细胞聚集、血小板数和血小板最大聚集率。此种药理作用对于防止动脉硬化的发展，防止急性心肌梗死时的高黏状态、并发症以及预防及控制部分脑血管疾病的发生均有较好作用，为复方丹参片临床作为预防和治疗血瘀证、改善微循环提供了新的实验依据。

通过本试验发现，复方丹参片能够明显改善急性血瘀模型大鼠血液流变状态，并通通过指标分析，发现复方丹参片活血化瘀的主要立足点可能是降低血液黏度和抑制血小板聚聚，如果能够围绕这两项指标进一步分析，找到复方丹参片的治疗作用通路及靶点，将能进一步提高复方丹参片的质量和疗效。