红景天提取物对高原缺氧条件下肉鸡抗氧化能力和腹水症死亡率的影响

2018-12-29刘锁珠张振仓

饲料工业 2018年14期

■李龙刘锁珠张振仓

（1.杨凌职业技术学院动物工程分院，陕西杨凌712100；2.西藏农牧学院动物科学学院，西藏林芝860000）

以往高强度的遗传选育显著的提高了肉鸡的生产性能[1]，但忽略了肉鸡心肺功能的选育，因此耗氧器官和供氧器官发育比例的失调导致肉鸡容易出现肺动脉高压，导致肉鸡腹水症的发生率高[2-3]。特别是在环境限制氧气获得的条件下，肉鸡腹水症敏感性显著提高[4]。在高原地区，由于氧分压降低，肉鸡腹水症是引起肉鸡死亡的主要因素[5]。值得注意的是肉鸡本身单位体重代谢率（耗氧量）大约是其它哺乳动物的2～2.5倍，因此电子漏和自由基（特别是活性氧）的产生也是明显高于其它哺乳动物的[6]。高原缺氧环境会引起肉鸡氧气获取量减少、能量代谢异常和活性氧增多，其中缺氧诱发的机体活性氧增多是肉鸡腹水症发生的一个重要原因[7]。

红景天作为西藏的一种传统中药，其具有机体应激保护作用。清除体内自由基是红景天发挥这一作用的重要原因。已有大量研究表明无论体外和体内试验红景天均具有抗氧化作用[8-10]，其中四种主要的活性成分（红景天苷、络塞利、络塞维和络塞琳）也都表现出了清除体内活性氧的作用，但存在计量特异性[11]。之前有研究显示红景天粉能够提高高原缺氧条件下肉鸡42 d的抗氧化能力[12]，但对整个饲养期肉鸡腹水症死亡率无显著影响[5]，这可能是由于红景天粉中有效成分含量过低，发挥作用过慢有关。因此本试验拟通过添加红景天提取物来增加有效成分含量，研究红景天提取物对高原缺氧条件下肉鸡不同饲养期抗氧化能力和腹水死亡率的影响。

1 材料与方法

1.1 红景天水提物制备

本试验中红景天来自于西藏农牧学院校内人工种植，经本校相关专家鉴定为大花红景天。取红景天干燥根部用蒸馏水清洗根部泥土，在阴凉处风干，用粉碎机将红景天制成粉末，按质量体积比1∶5（w/v）添加蒸馏水，室温放置24 h（冷渗法）来获得红景天水提物，将上层液体转入另一容器中，残渣重复上述操作4次。将所有红景天水提物混合并用纱布过滤，8 000×g离心2 min转移上清弃去残渣，上清利用旋转蒸发仪进行干燥处理。通过液相色谱检测提取物中红景天苷、络塞维和酪醇的含量分别为25.21、10.44 mg/g和0.03 mg/g。

1.2 试验动物与试验设计

采用单因素完全随机试验设计，选用1日龄AA雄性肉仔鸡900只（研究表明雄性肉仔鸡的腹水敏感性高于雌性[13]，因此本试验全部选用雄性肉仔鸡以更好的建立肉鸡腹水症模型），随机分到5个日粮处理组，每个处理6个重复，每个重复30只鸡，进行为期42 d的饲养试验。试验所用肉仔鸡出雏当日从成都空运至西藏林芝。试验期饲料全部使用商品肉鸡全价配合饲料（试验基础日粮组成及营养水平见表1）。5种日粮分别是在基础日粮中添加0（对照组）、0.1%、0.15%、0.2%和0.4%的红景天水提物干粉。

1.3 饲养管理

饲养试验在西藏林芝海拔2 986 m处进行，鸡只饲养在2层鸡笼。第一周育雏温度为35.5℃左右，之后逐渐降低，三周后禽舍温度控制在25℃左右。第一周24 h照明，从第二周起每天保持恒定光照时间（23 h照明，1 h熄灯），自由采食和饮水，免疫和消毒按常规程序进行。

表1 试验基础日粮组成及营养水平

1.4 测定指标

1.4.1 腹水死亡率

试验期间每天记录发病、死亡鸡只，并对死鸡逐个剖检确定死因。如出现腹腔有浅黄色或黄色胶冻状液体、心包积水、右心室肥大（右心指数＞0.29）等症状判定为腹水死亡[14]。

1.4.2 血液采集与抗氧化性能测定

分别在第14、28 d和42 d每个重复随机抽取1只鸡，颈静脉采血后立即置于冰上带回实验室，4℃2 000×g条件下离心10 min分离血清，-20℃保存备用。

血清中的过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）、蛋白质羟基含量（PC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC）利用相应试剂盒测定（南京建成生物工程研究所），测定过程严格按照试剂盒提供的操作步骤进行。

1.5 数据分析

采用EXCEL（2010）整理数据，利用SPSS（17.0）进行方差分析和LSD多重比较，数据以“平均数±标准差”的形式表示，使用x2检验比较不同处理组之间的死亡率差异，以P＜0.05判定为差异显著。

2 试验结果

2.1 日粮中添加红景天提取物对肉鸡腹水死亡率的影响(见图1)

图1 日粮中添加红景天提取物对不同时期肉鸡腹水死亡率的影响

由图1可见，在14 d时各处理组之间肉鸡累计腹水死亡率无显著差异（P＞0.05）。但在28 d和42 d，0.2%和0.4%红景天提取物处理组相对于其他三个处理组显著降低了肉鸡累计腹水死亡率（P＜0.05）。

2.2 日粮中添加红景天提取物对肉鸡抗氧化能力的影响（见表2）

表2 日粮中添加红景天提取物对不同时期肉鸡抗氧化能力的影响

由表2可见，在14 d时，相比于对照组，0.2%和0.4%红景天提取物处理组显著降低了血清中MDA和PC的含量（P＜0.05），而0.1%和0.15%红景天提取物处理组与对照组之间各氧化指标均无显著差异（P＞0.05）。在28 d时，相比于对照组，0.2%和0.4%红景天提取物处理组显著降低了血清中MDA和 PC 的含量（P＜0.05），并显著提高了 GSH-Px、SOD和T-AOC的活性（P＜0.05），0.15%红景天提取物处理组显著提高了血清GSH-Px活性（P＜0.05）。在42 d时，相比于对照组，0.15%、0.2%和0.4%红景天提取物处理组显著降低了血清中MDA和PC的含量（P＜0.05），并显著提高了 CAT、GSH-Px、SOD和T-AOC的活性（P＜0.05），相比于对照组，0.1%红景天提取物处理组显著降低了血清中MDA和PC的含量（P＜0.05），并显著提高了GSH-Px、SOD和TAOC的活性（P＜0.05），但对CAT的活性无显著影响（P＞0.05）。

3 讨论

生理性缺氧会破坏机体的氧化和抗氧化系统的平衡，改变酶和非酶的抗氧化状态、蛋白质氧化水平和脂类氧化水平，从而引起组织损伤[15]。MDA是多不饱和脂肪酸过氧化的产物，是衡量机体中氧化应激的一个重要指标，与之类似的PC是蛋白质氧化的产物，也同样能够评价机体的氧化水平[16]。目前研究发现红景天提高动物机体抗氧化能力主要通过两个方面实现：①直接清除活性氧，从而抑制营养物质的过氧化；②提高抗氧化酶分泌和活性[8-11，15]。本试验同样研究发现日粮中添加0.2%和0.4%的红景天提取物能够提高高原缺氧条件下肉鸡的抗氧化能力，但14 d时0.2%和0.4%红景天提取物能够显著降低血清MDA和PC的含量，但对抗氧化酶的活性无显著影响。提示适量的红景天前期对肉鸡抗氧化能力的影响是通过直接清除体内活性氧和抑制营养物质过氧化来实现，而非通过提高抗氧化酶的分泌与活性。而在28 d和42 d，0.2%和0.4%红景天提取物能够显著降低血清MDA和PC的含量，提高抗氧化酶的活性，提示在肉鸡饲养中后期红景天主要是通过清除活性氧和增加消化酶分泌和活性2个途径来实现的。

高原缺氧条件下肉鸡的腹水症发生率会显著提高[17]，本试验同样发现在西藏林芝2 986 m海拔高度饲养肉鸡42 d腹水死亡率达到了约14%，远高于平原地区肉鸡腹水症的发生率。肉鸡生理缺氧条件下活性氧代谢异常是肉鸡腹水症发生的一个重要诱因，这主要是由于活性氧带来的组织损伤（特别是心肺系统）和减少血液中NO浓度有关[18]。血液中过高的活性氧会与血液中NO反应生成强抗氧化剂过氧硝酸盐，而NO是一种重要的血管扩张和血压调节因子，被认为是动物体内重要的心脏保护剂[19]。虽然在14 d时添加0.2%和0.4%红景天提取物显著改善了肉鸡的抗氧化能力，但腹水症的发生主要集中在肉鸡饲养的中后期，这可能是在14 d时红景天提取物对腹水死亡率发生无显著影响的主要因素。而在28 d和42 d时添加0.2%和0.4%红景天提取物显著降低了肉鸡腹水死亡率的发生，而这个时期红景天提取物对肉鸡抗氧化性能的改善是其腹水死亡率降低的重要原因之一。虽然0.1%和0.15%红景天提取物处理组在42 d显著的提高了肉鸡的抗氧化能力，但对肉鸡腹水死亡率的发生无显著影响，这可能是添加0.1%和0.15%红景天提取物活性成分过低，发挥作用较慢引起的，红景天发挥抗氧化功能存在计量依赖性。