肾性骨病患者骨密度的检测与Klotho蛋白表达的相关性研究

董艳 孙艺 纪镇华 郑华

Klotho蛋白基因表达缺陷的老鼠会出现类似人类衰老一系列变化, 如动脉硬化、骨质疏松、糖能力代谢异常、生殖器官萎缩, 也被称为抗衰老蛋白［1-3］。膜型Klotho蛋白主要功能是调节肾脏分泌磷酸盐并合成活性维生素D(VitD), 与成纤维细胞生长因子23(FGF23)协同完成, 最终导致血钙水平的降低, 导致出现骨质疏松,骨折, 甚至影响患者的生存期［4］。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年4～11月本院收治的60例CKD3期、CKD4期、CKD5期肾性骨病患者作为实验组, 另选同期60例非肾性骨病患者作为对照组。其中男67例, 女53例, 平均年龄(46.76±13.44)岁。纳入标准：①对照组(非CKD)：年龄40～60岁, 血肌酐及尿蛋白检测正常的人群；②实验组：年龄40～60岁, CKD合并肾性骨病(未接受血液净化治疗), 并根据Ccr分为CKD3期(20例)、CKD4期(23例)、CKD5期(17例)3个亚组(根据GC公式分别计算Ccr值, 根据KDIGO 2013指南标准, 确诊的CKD分期)；③征得患者同意并签署知情同意书。排除标准：①急性肾衰竭；②既往存在骨质疏松病史及口服钙片及骨化三醇胶药物。

1.2 方法 ①所有对象：收集患者的一般资料, 如年龄、性别、体重, CKD患者的原发病、肾功能异常病、有无骨质疏松及用药史。②标本收集：受试者均禁食8 h以上, 空腹抽取静脉血2 ml, 即刻以3000 r/min离心10 min, 取上清送检。③检测指标：用罗氏全自动生化分析仪检测血Ccr、钙(Ca)、磷(P)、甲状旁腺激素, Ellisa 法检测Klotho蛋白, 应用骨密度分析仪测得骨密度|T|值。

1.3 观察指标 比较两组患者Klotho蛋白及骨密度|T|值,实验组各亚组中Klotho蛋白与骨密度|T|值的相关性。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用t检验；相关性检验采用Pearson相关分析法。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清Klotho蛋白、骨密度|T|值比较 实验组血清Klotho蛋白、骨密度|T|值显著低于对照组, 差异有统计学意义 (P＜0.05)。见表 1。

表1 两组血清Klotho蛋白、骨密度|T|值比较( ±s)

表1 两组血清Klotho蛋白、骨密度|T|值比较( ±s)

注：与对照组比较, aP＜0.05

对照组 60 418.04±37.21 2.94±0.46实验组 60 259.09±49.27a 1.95±0.42a t 19.941 12.311 P＜0.05 ＜0.05

2.2 60例实验组Klotho蛋白水平与各指标的相关分析 实验组Klotho蛋白与血钙、Ccr、骨密度|T|值等指标呈正相关,与血磷、甲状旁腺激素呈负相关(P＜0.05)。见表2。

表2 60例实验组血清Klotho蛋白水平与各指标的相关分析

2.3 60例实验组各亚组中, Klotho蛋白与骨密度|T|值相关性分析 实验组各亚组中Klotho蛋白与骨密度|T|值呈显著正相关(P＜0.05)。见图1。

图1 60例实验组Klotho蛋白与骨密度|T|值相关性分析

3 讨论

本研究结果显示 , 实验组血清Klotho蛋白、骨密度|T|值显著低于对照组, 差异有统计学意义(P＜0.05), Hu等［5］人的实验也验证了这一结果。Klotho基因缺陷鼠可出现一系列与人类衰老相似的表型变化, 如生长阻滞和寿命缩短、活动减少和步态紊乱、生殖器官萎缩、动脉硬化和异位钙化、骨质疏松、皮肤萎缩、肺气肿、糖和能量代谢异常、免疫功能异常等。年龄、氧化应激、急性缺血等可影响Klotho蛋白基因表达。

调节钙磷平衡和维生素D代谢是Klotho蛋白的重要功能之一, Klotho蛋白联合FGF23在肾脏近端小管上皮细胞与成纤维细胞生长因子受体(FGFRs)结合形成FGF-23-Klotho复合物, 抑制磷的重吸收, 远端小管上皮细胞通过稳定瞬时受体电位V5-钙(TRPV5-Ca2+)通道调节钙的重吸收, 并抑制肾脏1-α-25羟化酶活性, 下调骨化三醇水平。本研究结果显示, 实验组klotho蛋白与血钙、Ccr、骨密度|T|值等指标呈正相关, 与血磷、甲状旁腺激素呈负相关(P＜0.05)。提示Klotho蛋白可能在肾性骨病骨质疏松中发挥重要作用。提示随着Ccr的降低, 肾功能的进展恶化, Klotho蛋白水平逐渐降低, CKD患者肾脏Klotho表达水平减少, Klotho-FGFRs复合物水平下降, 不能充分结合FGF-23使其失去生物学效应；磷排泄减少并潴留, 钙重吸收发生障碍, 高磷、又进一步加重低钙, 由此形成恶性循环。

在临床中, 目前骨质疏松的临床诊断应用骨密度|T|值,而骨密度|T|值的检测受到年龄, 口服激素, 口服钙剂及骨化三醇胶等药物的影响, 在排除了上述因素后, 通过本实验的研究, Klotho蛋白与骨密度|T|值呈显著正相关(P＜0.05)。进而推断患者骨质疏松程度受Klotho蛋白的调节。在CKD患者中, 肾损伤后, Klotho蛋白表达进一步减少, 骨质疏松程度加重。

综上所述, Klotho蛋白表达水平随着CKD进展逐渐下降,其在肾性骨病患者中水平降低可能是导致钙代谢失调, 进而加重骨质疏松原因之一, 为进一步的深入研究提思路。