幽门螺杆菌感染与人胃黏膜组织miRNA584 和miRNA1290表达相关性分析

叶 彬 任于晗 王亚娟 俞 珊 王金钢 郭 妮

作者单位：浙江省嵊州市人民医院（浙江大学附属一院嵊州分院）消化内科（嵊州312400）

幽门螺杆菌（helieobacter pylori，Hp）感染被认为与慢性胃炎、胃黏膜肠化生、胃癌等疾病的发生密切相关，Hp 感染增加了胃黏膜肠化生、胃癌发生的几率[1-2]。miRNAs（microRNA，微小RNA）是一类在转录后水平调控基因表达的小的内源性非编码RNA分子，其在癌症的发生发展中可能发挥重要功能[3-4]。研究表明，miRNA584 和miRNA1290 是胃黏膜发生肠化生机制中的一个重要通路[5-9]。本研究观察Hp 感染与人胃黏膜组织miRNA584 和miRNA1290 表达情况，探究Hp 感染与miRNA584 和miRNA1290 表达的相关性。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选取2013 年6 月—2014 年12 月在嵊州市人民医院行胃镜检查的慢性胃炎患者80例，其中男性46 例，女性34 例。平均年龄（52.37±11.47）岁。所有患者均进行14C-尿素呼气试验检查，检查结果Hp 阳性患者40 例，Hp 阴性患者40 例。胃镜检查分别于胃体中部大弯、小弯侧及胃窦距幽门3cm 大弯、小弯侧各活检1 块组织行光镜检查，所有活检组织必须为黏膜全层，包括黏膜肌层。

1.2 试 剂 单克隆抗体购自Santa Cruz 公司，二甲苯等试剂购自华东试剂公司，醋酸酐等试剂购自武汉博士德公司，三乙醇胺等试剂购自上海化学试剂公司，预杂交液及杂交液购自丹麦Exiqon 公司。

1.3 原位杂交方法 对收集的四块胃黏膜组织石蜡标本，依照脱蜡、水化、染色、水洗残液、脱水、封片等流程进行原位杂交，miRNA584 和miRNA1290 以细胞质中出现明显的蓝色颗粒为阳性染色，采用半定量积分法[10]判断结果。染色强度分级：1 分，无染色或弱染色；2 分，中等强度染色；3 分，强染色。阳性细胞数分级：1 分，阳性表达率＜10%；2 分，阳性表达率10%～50%；3 分，阳性表达率＞50%。以上两项分数相乘，得分0～3 分者为低表达，＞3 分为高表达。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0 统计软件进行数据处理，计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

检测样本中miRNA584 和miRNA1290 的阳性染色主要出现在胞质中，胞膜和胞核无表达。Hp 阳性患者胃黏膜组织miRNA584 无染色或弱染色14例，中等强度染色17 例，强染色9 例；miRNA1290 无染色或弱染色16 例，中等强度染色13 例，强染色11例。Hp 阴性患者胃黏膜组织miRNA584 无染色或弱染色23 例，中等强度染色13 例，强染色4 例；miRNA1290 无染色或弱染色27 例，中等强度染色7 例，强染色6 例。与Hp 阴性患者胃黏膜组织比较，Hp 阳性患者胃黏膜组织miRNA584 和miRNA1290 表达均增加，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 Hp 感染与胃黏膜组织miRNA584、miRNA1290 表达[例（%）]

3 讨 论

Hp 在胃黏膜肠化及胃癌发生发展中起重要的作用，Hp 感染增加了胃癌的发生风险[1-2]，已经被WHO 正式列为Ⅰ类致癌因子。

研究表明，miRNAs 在胃癌的发生、发展以及转移的过程中起到了重要的作用[11-12]，在萎缩性胃炎及胃黏膜肠化生等胃癌前状态中，存在大量表达异常的miRNAs[13-14]。研究表明，miRNA584 和miRNA 1290 在体外培养的胃黏膜上皮细胞感染Hp 后发生肠化生改变中起到重要的作用，在Hp 毒力因子CagA 作用下miRNA584 和miRNA1290 表达升高，促进了肠化生的发生，其中miRNA584 通过Erk1/2 途径上调，miRNA1290 通过NF-κB 通路激活，miRNA584 和miRNA1290 的共同靶基因是Foxa1，该实验表明，miRNA584 和miRNA1290 是CagA 诱导胃黏膜肠化生机制中的一个重要通路[10]。体外实验表明，miRNA1290 在胃癌细胞表达升高，而使用miRNA1290 抑制物后，胃癌细胞的增殖也受到抑制[15]。

本研究发现，与Hp 阴性患者比较，Hp 阳性患者胃黏膜组织miRNA584 和miRNA1290 表达均增加，提示Hp 感染可能导致miRNA584 和miRNA1290 表达上调。根据已有研究，我们推测miRNA584 和miRNA1290 可能在Hp 诱导胃黏膜细胞肠化生中起重要作用，但具体机制需要进一步深入研究。