急性脑梗死患者血清白细胞介素—9、抗心磷脂抗体和同型半胱氨酸水平测定及临床价值探讨

李传利

[摘要] 目的 探討和分析血清白细胞介素-9（IL-9）、抗心磷脂抗体（ACA）及同型半胱氨酸（Hcy）在急性脑梗死患者临床治疗中的价值。 方法 选择2016年9月～2017年4月在我院就诊的急性脑梗死患者115例作为研究对象，另选取我院健康体检者103例作为对照组。采用ELISA法检测急性脑梗死组与健康对照组的血清IL-9、ACA水平，采用循环酶法检测血清Hcy水平。比较急性脑梗死组与健康对照组IL-9、ACA和Hcy的水平差异，并分析IL-9和Hcy水平与患者的神经功能缺损NIHSS评分的相关性。 结果 急性脑梗死组IL-9水平为（0.94±0.28）pg/mL，较健康对照组高，差异有统计学意义（P<0.01）。急性脑梗死组ACA阳性率为46.1%，高于健康对照组的7.8%，差异有统计学意义（P<0.01）；急性脑梗死组Hcy的水平为（18.15±13.29）μmol/L，显著高于健康对照组（P<0.01）。Pearson相关分析表明，IL-9水平与患者的神经功能缺损NIHSS评分呈正相关（P<0.01），而Hcy与其相应的NIHSS评分不相关。 结论 急性脑梗死患者血清IL-9、ACA及Hcy的水平升高，且IL-9与神经功能缺损有相关性。该三个指标与急性脑梗死的发生密切相关，该三个指标的检测对急性脑梗死的预防、早期诊断与治疗具有重要的临床意义。

[关键词] 急性脑梗死；白细胞介素-9；抗心磷脂抗体；同型半胱氨酸

[中图分类号] R743.3 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2018）27-0124-04

[Abstract] Objective To investigate and analyze the clinical value of serum interleukin-9（IL-9）， anticardiolipin antibody（ACA） and homocysteine（Hcy） in the clinical treatment of patients with acute cerebral infarction. Methods A total of 115 patients with acute cerebral infarction who were admitted in our hospital from September 2016 to April 2017 were enrolled. A total of 103 healthy subjects from our hospital were selected as the control group. Serum IL-9 and ACA levels were measured by ELISA in acute cerebral infarction group and healthy control group. Serum Hcy level was detected by circulating enzyme method. The differences in IL-9， ACA and Hcy between the acute cerebral infarction group and the healthy control group were compared. And the correlation between IL-9， Hcy level and the NIHSS score of the neurological deficit was analyzed. Results The level of IL-9 in the acute cerebral infarction group was（0.94±0.28） pg/mL， which was higher than that in the healthy control group， and the difference was statistically significant（P<0.01）. The positive rate of ACA in acute cerebral infarction was 46.1%， which was higher than that in healthy control group（7.8%）. The difference was statistically significant（P<0.01）. The level of Hcy in acute cerebral infarction group（18.15±13.29） μmol/L， was significantly higher than that of the healthy control group（P<0.01）. Pearson correlation analysis showed that IL-9 level was positively correlated with NIHSS scores in patients with neurological deficits（P<0.001）， whereas Hcy was not correlated with the corresponding NIHSS scores. Conclusion The levels of serum IL-9， ACA and Hcy are elevated in patients with acute cerebral infarction， and IL-9 is associated with neurological deficits. These three indicators are closely related to the occurrence of acute cerebral infarction. The detection of these three indicators has important clinical significance for the prevention， early diagnosis and treatment of acute cerebral infarction.

[Key words] Acute cerebral infarction； Interleukin-9； Anticardiolipin antibody； Homocysteine

急性脑梗死（acute cerebral infarction，ACI）是一种严重的引起脑部组织缺血性、缺氧性损害甚至坏死的脑血管疾病，其主要病因为脑部供血动脉粥样硬化及血栓形成而引发的脑血流阻断[1]。ACI在临床具有较高的致死率和致残率，严重威胁患者健康和生命安全，因此ACI的早期诊断及预防性干预，对降低急性脑梗死发生率、控制患者病情及改善预后具有重要意义[2]。IL-9是一种炎性介质，近年来研究发现IL-9介入脑动脉的炎症过程，进而促进脑部动脉粥样硬化和血栓的发生发展[3]。抗心磷脂抗体（anticardiolipin antibody，ACA）是一种自身抗体，其与许多免疫介导的血栓性疾病密切相关；同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是引起并促进动脉粥样硬化进程的重要危险因素。本研究对急性脑梗死患者临床资料进行研究分析，探讨急性脑梗死与IL-9、ACA 及Hcy水平的关系，为急性脑梗死的早期预防、早期诊断及治疗提供一定的理论依据。

1 資料与方法

1.1 一般资料

将2016年9月～2017年4月我院神经内科收治的急性脑梗死患者115例纳入急性脑梗死组（ACI组），其中男74例，女41例，年龄43～89（47.6±11.7）岁。健康对照组（HC组）：选择年龄匹配，同期来我院体检的无心脑血管疾病、无感染、肝脏疾病、自身免疫性疾病、肾脏及内分泌等疾病的健康者103例，其中男65例，女38例，年龄46～79（48.1±12.5）岁。所有受试者近1个月内未服用任何药物。两组实验对象的性别和年龄比例比较无统计学差异，对于参加本研究项目知情，且均签署知情同意书。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：急性脑梗死组所有患者均于发病24 h内就诊，符合第4届脑血管病会议制定的诊断标准，且均经头颅CT和（或）MRI证实。

排除标准：（1）其他原因引起的脑梗死；（2）出血性脑血管疾病；（3）有严重血液系统、肝脏、自身免疫系统疾病、肾脏及恶性肿瘤等；（4）既往有神经系统方面的疾病且有严重后遗症者或其他原因引起的严重躯体疾病不能配合完成正常检查者；（5）妊娠或哺乳期者。

1.3 标本采集

所有受试者均于入院次日早晨空腹抽取静脉血，促凝剂真空采血管釆血2～4 mL，1 h内3500 r/min离心10 min，分离血清，2 h内完成Hcy检测。分装剩余血清至EP管中，每管120 μL，-80℃冻存，用于IL-9、ACA检测。

1.4 仪器和试剂

IL-9检测试剂盒购自R&D;；ACA检测试剂盒购自德国欧蒙医学诊断有限公司；酶标仪为美国Thermo Fisher Scientific公司生产；Hcy检测试剂盒购自宁波瑞源生物科技有限公司，检测仪器为日本日立公司生产的7600-110全自动生化分析仪。

1.5 方法

IL-9、ACA的水平采用ELISA法检测，实验步骤严格按照说明书执行，设置标准曲线孔、阴性对照孔和空白孔，根据标准曲线计算样本浓度，ACA≥12 RU/mL判为阳性，ACA<12 RU/mL判为阴性。Hcy采用循环酶法检测，其正常参考范围为4.0～15.4 μmol/L 。

1.6 神经功能缺损评分

根据美国国立卫生研究院卒中量表（NIH stroke scale，NIHSS）对ACI组患者发病期内的神经功能缺损进行评定。

1.7 统计学分析

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。计数资料用%表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson相关系数分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ACI组与健康对照组血清ACA阳性率比较

ACI 组 ACA 阳性53例（46.1%），对照组阳性8例（7.8%），两组比较差异有统计学意义（χ2=39.59，P<0.01）。见表1。

2.2 ACI组与健康对照组IL-9和Hcy水平比较

ACI组IL-9的血清学水平显著高于健康对照组（P<0.01）；而Hcy的血清学水平，ACI组显著高于健康对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。见表2。

2.3 脑梗死相关因素的Pearson相关性分析

ACI组患者血清中的IL-9水平与其相应的NIHSS评分具有Pearson相关关系，其r=0.66，说明二者的水平呈正相关关系，差异有统计学意义（P<0.01）。而Hcy与其相应的NIHSS评分不具有相关性。见表3。

3讨论

急性脑梗死是一种严重致死致残的疾病，目前静脉溶栓是唯一有效的治疗方法，但一方面很大程度被时间窗限制，另一方面只有约1/3的患者能够避免残疾[4]。因此，建立有效的血清学检测指标，早期预防、早期诊断，对急性脑梗死患者的意义尤为重要。

近年来，IL-9是目前新被发现参与急性脑梗死的细胞因子，可由淋巴细胞、上皮细胞、NK细胞等多种免疫细胞分泌产生，其在体内的生物学作用具有多效性，但在急性脑梗死中的作用尚不明确。

目前，已有研究表明急性缺血性脑卒中患者的血清IL-9水平要显著高于健康对照组[5]，在大鼠的脑卒中动物模型中也得出过相同结论[6]，与本研究结果一致。然而，IL-9在急性脑梗死中发挥的生物学作用和具体机制并不明确，相关研究在国外尚属起步阶段，国内研究更是有限。在动物模型中，使用IL-9预处理，会加重脑内注射门冬氨酸受体拮抗剂引发的白质损伤[7]。这表明IL-9作为一种炎症介质，可能通过引发其他的炎症细胞和炎症因子的参与，加重脑损伤部位的炎症反应，从而使急性缺血性脑损伤的病变加重。

在急性脑梗死的起始和发展阶段，多种免疫细胞和炎症因子参与的免疫应答和炎症过程最终将导致严重的脑损伤和神经功能缺损[8]。在中枢神经系统的炎症性疾病中，IL-9发挥着重要的中介作用。IL-9通过结合星形胶质细胞的IL-9R，促进其CCL-20的表达，从而促进Th17细胞迁移入中枢神经系统[9]。Th17细胞产生释放的IL-17，会直接或间接杀伤破坏神经元和神经组织，形成或加重急性脑梗死的脑组织损伤和神经功能缺损[10]。

NIHSS评分是ACI后神经系统功能缺损的评价体系，本研究中我们发现患者的NIHSS评分与其血清IL-9的水平具有相关性，提示IL-9的水平可能与ACI的严重程度相关。目前，有研究也得出过类似结论，发现缺血性脑梗死患者血清IL-9水平及IL-9分泌型T细胞水平均较健康对照组升高，且CD3+CD4+IL-9+和CD3+CD8+IL-9+细胞数量的升高与疾病的严重程度呈正相关[11]。该研究还表明，IL-9对脑组织的损伤，很有可能是通过激活损伤性的STAT信号通路、封闭保护性[12]的PI3K/AKT信号通路来实现的[11]。然而也有学者认为，其他类型的细胞比例更具有指导意义，如最近的研究发现外周血中CD4+CD28-细胞的比例对于急性脑梗死患者的分型和治疗有着重要意義[13]。

然而，关于IL-9在急性脑梗死中的作用还有诸多不确定性。一方面，在ACI的不同时相细胞因子的水平也会有不同变化。已有研究证实，在急性缺血性脑卒中后12个月IL-9处于低水平，且这种低水平的IL-9与患者的卒中后疲劳现象存在相关关系[14]。另一方面，IL-9/IL-9R系统可能参与大脑皮质层神经元的一种新的内源性抗凋亡机制，从而对脑细胞有一定的保护作用，且能一定程度的抵抗压力引起的神经损伤[15]。因此，要确定IL-9急性脑梗死中的作用，还需要更多坚实的研究和有力的证据。

一直以来，ACA被认为是急性脑梗死的诱因之一，但其与急性脑梗死的关系并未引起广泛研究。本研究中我们采用ELISA法，检测到急性脑梗死组患者的抗心磷脂抗体阳性率较健康对照组高，且差异有统计学意义，与目前抗心磷脂抗体的研究现状是一致的。近年来，随着溶栓治疗和脑卒中中心的开展普及，抗心磷脂抗体作为一种血栓促进性因子，在急性脑梗死中的作用和角色逐渐受到了国内外学者的关注。尤其是国内许多学者在脑梗死患者的外周血中均检测到高水平的抗心磷脂抗体[16]。国外许多相关研究表明脑梗死的发生和抗心磷脂抗体相关，有研究显示，在没有其他的凝血功能紊乱诱发因素的脑梗死患者中，有6%～25%的个体检测到抗心磷脂抗体的存在，主要包括狼疮抗凝物、抗心磷脂抗体、抗-β2糖蛋白I抗体[17]。抗心磷脂抗体阳性患者的颈动脉超声检查显示，颈动脉有较厚的动脉粥样硬化斑块存在[18]，是目前较为直观的证据。除了ACA已知的引发动脉粥样斑块形成的作用，还有研究发现，ACA阳性患者若合并有丙型肝炎病毒感染，会增加急性脑梗死的意外风险[19]。

目前已有大量文献证实，Hcy在急性脑梗死患者中的血清水平升高，Hcy水平的升高与脑梗死的形成、脑梗死的复发、梗死后躯体功能障碍的预判，尤其与脑梗死患者大血管动脉粥样硬化斑块的形成，均具有显著的相关性。此外，Hcy在人体的血管调节异常和认知功能损伤中均发挥一定的作用。有研究表明，高水平的Hcy会增加心脑血管意外的风险，且预后差。Hcy水平的升高还可以预测评估痴呆的发生风险，而这种风险是独立于脑部小血管病变和其他血管风险因子之外的[20]。最新研究发现，高水平的Hcy在急性脑梗死中并非独立致死因素，但却与女性脑卒中患者5年死亡高风险有相关性[21]，提示临床加强女性脑卒中后的血清Hcy检测，为预后提供依据。

本研究中我们将急性脑梗死患者的Hcy水平与其相应的NIHSS评分进行Pearson相关性分析，我们并没有得到预期中二者的相关关系。近几年国内也有研究得出过与我们结论不相符的结果，经过分析，脑梗死患者的Hcy水平与其相应的NIHSS评分是呈显著相关关系的。我们认为可能的原因主要有以下几方面：一方面，本研究中纳入研究的对象为急性脑梗死患者，在患者入院诊治的第一时间内抽取外周静脉血，在疾病发生的早期时相，Hcy水平可能并没有达到预期，但是其水平与健康对照组相比还是有显著性差异的。另一方面，不同实验室采用的Hcy检测试剂的厂家不同，得到的Hcy数值也不尽相同。总之，关于Hcy在急性脑梗死中的作用，还需要进一步的实验研究确证。

综上所述，IL-9为急性脑梗死的检测治疗提供新方向，联合ACA和Hcy监测，可为不同人群提供个体化治疗意见，最大限度降低急性脑梗死对患者的生命安全和生命质量的威胁。

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（收稿日期：2018-06-05）